季方茹，宋元清，雷力力，沈慶明，荊洪英

(1.佳木斯大學附屬第一醫(yī)院藥劑科，黑龍江佳木斯154003;2.雞西市人民醫(yī)院藥劑科，黑龍江雞西158100)

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CYP3A4* 1G基因多態(tài)性與紫杉醇不良反應的關系①

季方茹1，宋元清2，雷力力1，沈慶明1，荊洪英1

(1.佳木斯大學附屬第一醫(yī)院藥劑科，黑龍江佳木斯154003;2.雞西市人民醫(yī)院藥劑科，黑龍江雞西158100)

摘要:目的:觀察分析CYP3A4* 1G基因多態(tài)性與紫杉醇不良反應發(fā)生率的關系。方法:選擇2013－01～2015－09經(jīng)病理或細胞學檢查確診為乳腺癌130個病例作為入選試驗對象，檢測其CYP3A4* 1G基因型并觀察、收集、記錄其不良反應發(fā)生情況，分析患者的不良反應發(fā)生和基因多態(tài)性的相關性。結果: CYP3A4* 1G基因多態(tài)性與紫杉醇不良反應發(fā)生率沒有統(tǒng)計學差異。結論: CYP3A4* 1G基因多態(tài)性與紫杉醇不良反應發(fā)生率沒有關聯(lián)。

關鍵詞:CYP3A4* 1G ;基因多態(tài)性;紫杉醇;不良反應

近年來隨著藥物基因組學的發(fā)展，藥物基因多態(tài)性與藥物療效和不良反應的關系越來越被重視，相關的研究也很多，很多研究成果已被批準應用到臨床中，對指導臨床合理用藥，達到精準醫(yī)療起了很重要的作用。在細胞色素P450酶(CYP)的研究中，CYP1B1和CYP3A4作為新的藥物靶點日益受到關注［1］?；贑YP1B1和CYP3A4在多種腫瘤組織中(前列腺、結直腸等)［2］特異性高表達，而在相應的正常組織中不表達這一特點，認為CYP1B1和CYP3A4為一個抗癌治療、耐藥逆轉的新靶點。紫杉醇是目前治療卵巢癌、非小細胞肺癌、乳腺癌的有效藥物。然而，與其他抗腫瘤藥物一樣，由于紫杉醇的骨髓抑制作用、心血管毒性、神經(jīng)毒性、肝臟毒性及胃腸道反應等不良反應個體差異的存在，在一定程度上限制了它的應用。筆者對我院腫瘤科應用紫杉醇注射液治療乳腺癌的130例患者，進行了基因型檢測和其不良反應觀察、收集、統(tǒng)計和分析，研究二者的關聯(lián)性，為臨床醫(yī)生使用紫杉醇時減少不良反應的發(fā)生提供依據(jù)。

1　儀器與材料

1.1儀器

Thermo公司微量移液器;日本島津公司AUW220D電子分析天平;美國Bio－Rad公司S1000 Thermal Cycler PCR儀、PowerPac Universal通用型電泳儀、ChemiDoc XRS凝膠成像系統(tǒng);上海滬譽貿(mào)易有限公司H2500R－2高速冷凍離心機。

1.2試藥

Fermentas公司生產(chǎn)的Genomic DNA Purification Kit、Star pcr Taq、100 bp DNA Ladder、Oli I內(nèi)切酶。CYP3A4* 1G擴增引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成，DNA測序由生工生物工程(上海)股份有限公司北京測序部完成。紫杉醇注射液: 5mL: 30mg哈藥集團生物工程有限公司生產(chǎn)。

1.3研究對象、血樣采集方法及給藥方法

選擇經(jīng)病理或細胞學檢查確診為乳腺癌的病例作為入選試驗對象，預計生存期不少于6個月，1個月內(nèi)未用任何藥物作過抗腫瘤治療，血常規(guī)及肝、腎功能、心電圖相關檢查正常者。檢測CYP3A4* 1G位點基因型，根據(jù)基因型將患者分為CC型(野生純合子) ; CT + TT型(雜合子+突變純合子) 2組，然后按患者體表面積計算每個患者靜脈輸注紫衫醇注射液的劑量(175mg/m2)，入選的患者不再同時使用其他抗腫瘤藥。給藥方法:用紫杉醇前30min靜脈滴注地塞米松注射液20mg，及雷尼替丁200mg，同時肌注50mg異丙嗪，紫杉醇注射液用專用輸液管靜脈滴入，時間不少于3h，每3周一次。每一療程4次。

2　方法

2.1 CYP3A4* 1G基因檢測

上游引物5＇...AATAGAAAGCAGATGAACCAGAGCC...3＇，下游引物5＇...CACCCTGATGTCCAGCAGAAACT...3＇; PCR組分及條件: Maxima Hot Start Green PCR Master Mix (2X) 12.5μL，上、下游引物各1μL，模板DNA 1μL，雙蒸水9.5μL; 94℃預變性4min，94℃變性30s，54℃退火30s，72℃延伸30s，35個循環(huán)后，72℃延伸5min。酶切及電泳: 10 ×green buffer 2μL，PCR產(chǎn)物10μL，Rsa I內(nèi)切酶1.0μL，雙蒸水17μL;水浴37℃，酶切5 min，水浴65℃，滅活5min。使用2.0%瓊脂糖凝膠電泳30min，電壓140V。

PCR擴增產(chǎn)物片段長度為287bp。限制性內(nèi)切酶RsaI酶切后判斷基因型，當出現(xiàn)215和72bp兩個片段時為CC純合子型，當出現(xiàn)287，215和72bp三條片段時為CT型雜合子，當只有287bp一條片段時為TT型純合子。檢測結果經(jīng)焦磷酸測序方法驗證。

2.2不良反應觀察時限

第一次用藥開始至療程結束后15d。

2.3不良反應判斷標準

依據(jù)我國國家藥物不良反應監(jiān)測中心采用的判斷方法［3］

3　結果

3.1基因測序結果

按2.1方法進行試驗并經(jīng)焦磷酸測序驗證，兩種方法檢測結果，兩者完全相符。CYP3A4* 1G擴增酶切見圖1，焦磷酸測序見圖2。

M為50bp DNA Marker; 1、2、8、9泳道為CC型野生純合子，4、5、6泳道為CT型雜合子，3、7泳道為TT型突變純合子。圖1　CYP3A4* 1G擴增酶切后電泳結果圖

圖A、B、C分別為CC、CT、TT基因型，突變位點在189位圖2　CYP3A4* 1G 3種基因型毛細管電泳測序圖

3.2基因型分布與不良反應

2013－01～2015－09共收集符合要求的作紫杉醇化療的乳腺癌患者血樣130例，經(jīng)檢測，CC型59例，CT型65例，TT型6例，由于TT基因型例數(shù)太少，因而將CT型與TT型合并計算，其基因型分布及不良反應情況經(jīng)卡方檢驗見表1。

表1　CYP3A4* 1G基因多態(tài)性與紫杉醇不良反應關系發(fā)生率

由表1可見，兩組不良反應差異沒有顯著性(P＞0.05)。

4　討論

我國的乳腺癌患者逐年上升，如何在化療時減少不良反應的發(fā)生是醫(yī)生和藥師的責任。有文獻報道紫杉醇血藥濃度與腫瘤治療效果及不良反應有關［4］。而CYP3A4* 1G基因多態(tài)性與紫杉醇藥物代謝無關［5］。本研究顯示CYP3A4* 1G基因多態(tài)性與紫杉醇的不良反應也無關。因此我們應從其他方面研究個體血藥濃度與腫瘤治療效果及不良反應的關系，通過其他措施的應用來探討和減少不良反應的發(fā)生，比如可以進一步探討用紫杉醇注射液之前，用止吐藥與減輕患者的不良反應的關系，以此來降低不良反應的發(fā)生率、提高患者的生存質(zhì)量，延長生存期。

參考文獻:

［1］肖昌瓊，周宏瀕.細胞色素P450藥物氧化酶基因多態(tài)性與乳腺癌易感性研究進展［J］.中國腫瘤，2009，18(1) : 38

［2］Maria P，Elisa G，Aldo C，et al.Cytochrome 450 1B1 (CYP1B1) polymorphisms associated with response to docetaxel in Castration－resistant prostate cancer (CRPC) patients［J］.BMC Cancer，2010 (10) : 511

［3］李俊主編.臨床藥理學［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2013: 150

［4］劉加濤，孫國平，陳小歡，等.紫杉醇用于非小細胞肺癌的藥代動力學與療效、毒性反應的關系研究［J］.安徽醫(yī)藥，2012，16(9) : 1253

［5］荊洪英，國玉芝.CYP3A4* 1G基因多態(tài)性與紫杉醇血藥濃度的關系研究［J］.中國藥房，2015，26(8) : 1063－1065

(收稿日期:2015－12－17)

通訊作者:荊洪英(1965～)女，黑龍江雞西人，碩士，主任藥師，碩士研究生導師。E－mail : Wjinghongying@126.com

作者簡介:季方茹(1963～)女，黑龍江望奎人，學士，主管藥師。

基金項目:①2013年度黑龍江省教育廳科學技術研究項目，編號: 12531683。

中圖分類號:R285

文獻標識碼:A

文章編號:1008－0104(2016) 02－0007－02