張文杰(沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院藥劑科，遼寧 沈陽(yáng)　110002)

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微生物比濁法測(cè)定注射用替考拉寧的效價(jià)含量

張文杰*(沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院藥劑科，遼寧 沈陽(yáng)110002)

DOI10.14009/j.issn.1672-2124.2016.03.031

摘要目的：建立比濁法測(cè)定注射用替考拉寧效價(jià)含量的方法，以用于其質(zhì)量控制。方法：分別采用微生物比濁法和管碟法對(duì)注射用替考拉寧的效價(jià)進(jìn)行檢定，比較2種方法的效果。結(jié)果：替考拉寧線性范圍為5.0～15.0 u/ml，濃度的對(duì)數(shù)與吸光度成良好的線性關(guān)系，線性方程為A=1.372-0.792 6l gC(r=0.997)，平均回收率為100.46%，RSD為0.85%。結(jié)論：比濁法和管碟法測(cè)定注射用替考拉寧效價(jià)含量的結(jié)果無顯著差異。微生物比濁法靈敏、準(zhǔn)確、可靠、重現(xiàn)性好，可用于注射用替考拉寧的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞效價(jià)； 含量； 比濁法； 管碟法； 替考拉寧

Determination of Content of Teicoplanin for Injection by Microbiological Turbidimetric Method

ZHANG Wenjie (Dept.of Parmacy, the Second Affiliated Hospital of Shenyang Medical College, Liaoning Shenyang 110002, China)

ABSTRACTOBJECTIVE：To establish a microbiological turbidimetri method for the determination of content of teicoplanin for injection, so as to control its quality. METHODS: Microbiological turbidimetri method and cup-plate method were respectively adopted to detect and compare the the potency of teicoplanin for injection, and the effects of two methods were compared. RESULTS: The calibration curve was linear with the logarithm of concentration range of 5.0-15.0 (μ/ml) of teicoplanins, the linear equation wasA=1.372-0.792 6l gC(r=0.997), the average recovery was 100.46%,RSDwas 0.85%. CONCLUSIONS: There was no significant difference in the determination of content of teicoplanin for injection between turbidimetric method and cup-plate method. Microbiological turbidimetri method is sensitive, accurate, reliable and reproducible, suitable for quality control of teicoplanin for injection.

KEYWORDSPotency; Content; Turbidimetric method; Teicoplanin

替考拉寧作為一種重要的抗菌藥物，臨床主要用于多重耐藥菌感染的治療[1]。為了更好的控制藥品的質(zhì)量，保證藥品的安全有效，參考相關(guān)文獻(xiàn)[2-7]，本研究采用微生物比濁法《中國(guó)藥典》(2005年版)對(duì)該制劑含量進(jìn)行測(cè)定，并與該制劑含量測(cè)定的現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)的管碟法進(jìn)行比較，以評(píng)價(jià)該制劑的質(zhì)量控制方法，現(xiàn)報(bào)告如下。

1儀器與試藥

島津UV-260型紫外分光光度計(jì)(日本島津公司)；WBS-200多功能微生物比濁法自動(dòng)測(cè)量分析儀與ZY-300微生物管碟效價(jià)測(cè)定儀(北京先驅(qū)威烽技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn))。

金黃色葡萄球菌 [CMCC(B)26003]和枯草芽孢桿菌 [CMCC(B)63501] 由中國(guó)食品藥品檢定院提供。替考拉寧標(biāo)準(zhǔn)品(批號(hào)130374-201201；效價(jià)847 u/mg)由中國(guó)食品藥品檢定院提供。注射用替考拉寧(批號(hào)：2012016，2012017，2012018；規(guī)格1.0 g)為市場(chǎng)上購(gòu)買。營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(批號(hào)120509)；抗菌藥物檢定培養(yǎng)基Ⅱ(pH 6.5，批號(hào)120107)由北京三藥科技開發(fā)公司提供。甲醛、氯化鈉、磷酸氫二鉀和磷酸二氫鉀為分析純；0.9%氯化鈉注射液和磷酸鹽緩沖液(pH 6.0)均按《中國(guó)藥典2部》(2010年版)附錄配制。

2方法與結(jié)果

2.1管碟法

取裝量差異項(xiàng)下的供試品細(xì)粉適量，精密稱定，用pH 6.0的磷酸鹽緩沖液制成每1 ml中約含1 000 u/ml的溶液，按照《中國(guó)藥典2部》(2010年版)附錄Ⅺ A中抗菌藥物微生物檢定法測(cè)定。高、低濃度分別為40 u/ml和20 u/ml，試驗(yàn)菌為枯草芽孢桿菌 [CMCC(B)63501]，培養(yǎng)溫度36～37 ℃，培養(yǎng)時(shí)間14～16 h。

2.2比濁法

2.2.1菌液及含菌培養(yǎng)基的制備:取金黃色葡萄球菌新鮮斜面培養(yǎng)物一白金耳，接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基100 ml中，搖勻，使其在530 nm波長(zhǎng)處的吸光度約為1.0，為含菌培養(yǎng)基。

2.2.2溶液的配制:取替考拉寧標(biāo)準(zhǔn)品，精密稱定，加滅菌水稀釋至1 000 μ/ml備用；作為標(biāo)準(zhǔn)品溶液；另取裝量差異項(xiàng)下的注射用替考拉寧，精密稱定，加滅菌水稀釋至1 000 μ/ml制成溶液，取樣3批，分別制備，作為供試品溶液。

2.2.3測(cè)定方法:精密量取供試品溶液1 ml置滅菌試管中，每個(gè)濃度9管，分別精密加入菌液培養(yǎng)基9 ml，立刻搖勻，放入比濁法自動(dòng)測(cè)量分析儀中，于37 ℃培養(yǎng)5 h取出，立即加入甲醛溶液(1→5)0.5 ml，充分混勻；標(biāo)準(zhǔn)品溶液測(cè)定同上述方法一樣。以含9.0 ml菌液培養(yǎng)基、1.0 ml磷酸鹽緩沖液和0.5 ml甲醛溶液(1→5)同條件培養(yǎng)的溶液為空白液；分別于紫外分光光度計(jì)530 nm波長(zhǎng)處測(cè)定供試液和空白液試管中金黃色葡萄球菌對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期內(nèi)的不同培養(yǎng)時(shí)間吸光度值(A)。

2.2.4線性關(guān)系及范圍:精密量取標(biāo)準(zhǔn)品溶液適量，分別用磷酸鹽緩沖液稀釋成濃度分別為5.0、7.0、9.0、11.0、13.0、15.0 u/ml的溶液，作為供試液，照“2.2.3”項(xiàng)下測(cè)定方法測(cè)得吸收度，以濃度(C)的負(fù)對(duì)數(shù)値為橫坐標(biāo)，吸收度(A)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得線性方程：A=1.372-0.792 1 gC(r=0.997)。結(jié)果，替考拉寧在5.0～15.0 μ/ml的濃度范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好，并通過t檢驗(yàn)可靠性測(cè)驗(yàn)結(jié)果判定證明回歸效果顯著。

2.2.5回收率試驗(yàn):精密量取標(biāo)準(zhǔn)品溶液適量，用磷酸緩沖溶液分別稀釋成濃度為5.0、10.0、15.0 μ/ml的溶液各6份，按“2.2.3”項(xiàng)下測(cè)定方法測(cè)定吸收度，計(jì)算回收率和RSD%，見表1。由表1可見，平均回收率為100.46%，RSD為0.85%。

表1　回收率試驗(yàn)結(jié)果(μ/ml)

2.2.6精密度試驗(yàn):取“2.2.5”項(xiàng)下回收率試驗(yàn)10.0 μ/ml濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液作9支管，按“2.2.3”項(xiàng)下測(cè)定方法測(cè)定吸收度，計(jì)算吸光度RSD為1.7%。

2.2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)：取10.0 μ/ml濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液經(jīng)0、1、3、4 h分別測(cè)其吸光度値，計(jì)算RSD為0.97%。

2.2.8樣品的測(cè)定:分別用管碟法和比濁法對(duì)3批樣品進(jìn)行含量測(cè)定：取樣品分別用磷酸鹽緩沖液稀釋濃度為10.0 μ/ml作為供試液。按“2.2.3”項(xiàng)下測(cè)定方法測(cè)定吸收度，并計(jì)算含量，并與管碟法含量進(jìn)行了比較，2種方法結(jié)果一致，見表2。

3討論

由于任何影響液體培養(yǎng)基內(nèi)微生物生長(zhǎng)的因素和儀器的性能均會(huì)影響測(cè)定的準(zhǔn)確性，因此，在試驗(yàn)中應(yīng)考慮培養(yǎng)時(shí)間的控制、培養(yǎng)溫度均一性及試驗(yàn)菌液的配制和培養(yǎng)管的均一性?！吨袊?guó)藥典》(2005年版)新增比濁法，與管碟法比較，比濁法具有快速靈敏，精密度好的特點(diǎn)。

表2　種方法測(cè)定結(jié)果比較

本研究中試驗(yàn)培養(yǎng)4 h，當(dāng)日出結(jié)果。采用管碟法測(cè)定時(shí)，高低劑量的劑距不大，且易產(chǎn)生雙圈現(xiàn)象，效價(jià)測(cè)定時(shí)的可信限率不是很好。比濁法測(cè)定時(shí)高低劑量的劑距較大，避免了上述影響，且培養(yǎng)時(shí)間短，因此測(cè)定更為快速，準(zhǔn)確，可信限率較小[8-11]。

綜上所述，替考拉寧是種多組分抗菌藥物主要通過微生物發(fā)酵法生成，同管碟法比較，比濁法測(cè)定注射用替考拉寧的效價(jià)含量操作方便、靈敏度高、重復(fù)性好、檢驗(yàn)時(shí)間短、輔料無干擾、可信限率低、人為影響因素少。因此，比濁法能夠應(yīng)用于注射用替考拉寧效價(jià)測(cè)定[12-14]。

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(收稿日期：2015-07-02)

中圖分類號(hào)R927

文獻(xiàn)標(biāo)志碼A

文章編號(hào)1672-2124(2016)03-0364-02

*副主任中藥師。研究方向：藥物分析。E-mail:593438436@qq.com