王帆　楊大偉

[摘 要]建立乙酰半胱氨酸注射液的無菌檢查方法。方法：本試驗(yàn)參照《中國藥典》2010年版二部無菌檢查法進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果： 與對(duì)照組比較，含供試品的各濾筒中試驗(yàn)菌生長良好，并與各對(duì)照組中相應(yīng)的菌落生長情況相同。結(jié)論：本品可采用此法進(jìn)行無菌檢驗(yàn)并結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

[關(guān)鍵詞]乙酰半胱氨酸 無菌檢查法 薄膜過濾法 方法學(xué)驗(yàn)證

中圖分類號(hào)：TM 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1009-914X（2016）10-0023-01

乙酰半胱氨酸注射液臨床主要應(yīng)用于對(duì)乙酰氨基酚中毒及其他原因引起的肝衰竭的治療。本文按照《中國藥典》[1]2010年版二部附錄Ⅺ H無菌檢查法進(jìn)行測定，并進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。

1.材料與儀器

1.1 試驗(yàn)樣品：

乙酰半胱氨酸注射液（規(guī)格： 20ml：4g，批號(hào)：140510，數(shù)量：160支/批，哈爾濱譽(yù)衡藥業(yè)股份有限公司）

1.2 試驗(yàn)用菌株

大腸埃希菌44102第2代、金黃色葡萄球菌26003第2代、枯草芽孢桿菌63501第2代、生孢梭菌 64941第2代、白色念珠菌98001第2代、黑曲霉98003第3代。

1.3 試驗(yàn)用培養(yǎng)基

營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 批號(hào)130916、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基 批號(hào)111031、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 批號(hào)121015、改良馬丁培養(yǎng)基 批號(hào)130603、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基 批號(hào)111206、0.1%蛋白胨水溶液 批號(hào)130221、氯化鈉 批號(hào)101217。

1.4 儀器

LDZX-75KBS立式壓力蒸汽滅菌器-上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠、DHG-9145A電熱鼓風(fēng)干燥箱-上海和呈儀器制造有限公司、LRH-250生化培養(yǎng)箱-上海一恒科技有限公司、DHP-9272電熱恒溫培養(yǎng)箱-上海一恒科技有限公司、HTY-2000B集菌儀-杭州泰林生物技術(shù)設(shè)備有限公司、SW-CT-2FD凈化工作臺(tái)-蘇州凈化設(shè)備有限公司、BSA2202S電子天平-德國賽多利斯股份公司、BSC-1100ⅡB2生物安全柜-北京東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司。

2.方法學(xué)驗(yàn)證

2.1 菌種接種

改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基：稱取2.1g，加水50ml；營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基：稱取0.9g，加水50ml；改良馬丁培養(yǎng)基：稱取1.42g，加水50ml；硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基：稱取1.46g，加水50ml。

接種：取黑曲霉斜面培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基斜面上，于23～28℃培養(yǎng)5～7d；取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，于30～35℃培養(yǎng)18～24h；取生孢梭菌液體培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，于30～35℃培養(yǎng)18～24h；取白色念珠菌斜面培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基中，于23～28℃培養(yǎng)24～48h。

2.2 驗(yàn)證試驗(yàn)

2.2.1培養(yǎng)基配制：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：稱取4.8g，加水150ml；玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基：稱取3.05g，加水100ml；硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基：稱取29.25g，加水1000ml；改良馬丁培養(yǎng)基：稱取17.1g，加水600ml；0.1%蛋白胨水溶液：稱取0.3g，加水300ml；0.9%氯化鈉溶液：稱取2.7g，加水300ml。

2.2.2菌液制備：取經(jīng)30～35℃培養(yǎng)18～24h的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌液體培養(yǎng)物各1ml，分別加入到9ml0.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍依次稀釋，金黃色葡萄球菌至10-6，大腸埃希菌至10-7，生孢梭菌至10-7。取經(jīng)23～28℃培養(yǎng)24～48h的白色念珠菌液體培養(yǎng)物1ml加入到9ml0.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍依次稀釋至10-5。取經(jīng)培養(yǎng)5～7d的黑曲霉培養(yǎng)物，加3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液將孢子洗脫，轉(zhuǎn)移至另一試管，取1ml加至9ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍依次稀釋至10-4。

2.2.3試驗(yàn)組：取供試品120支，每支取5ml，分別置6個(gè)濾筒中過濾（每筒20支），過濾后每筒加入菌懸液1ml，加入硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基100ml，分別于30～35℃和23～28℃培養(yǎng)5d，逐日觀察。

2.2.4對(duì)照組：另取6個(gè)濾筒，分別加入1ml相應(yīng)的試驗(yàn)菌，再加入相應(yīng)的等量培養(yǎng)基，作為對(duì)照，按規(guī)定條件培養(yǎng)5d，逐日觀察。

2.2.5供試品對(duì)照組：取供試品40支，每支取5ml，分別置2個(gè)濾筒中過濾（每筒20支）。過濾后再加入相應(yīng)的等量培養(yǎng)基，作為對(duì)照，按規(guī)定條件培養(yǎng)5d，逐日觀察。

陰性對(duì)照組：取0.1%無菌蛋白胨水溶液適量，加入相應(yīng)的培養(yǎng)基，按規(guī)定條件培養(yǎng)5d，逐日觀察。

3.結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

驗(yàn)證試驗(yàn)樣品接種6株陽性菌的生長情況：硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基：金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌試驗(yàn)組、對(duì)照組均為陽性，供試品對(duì)照組與陰性對(duì)照組為陰性；改良馬丁培養(yǎng)基：白色念珠菌、黑曲霉試驗(yàn)組、對(duì)照組均為陽性，供試品對(duì)照組與陰性對(duì)照組為陰性。

驗(yàn)證試驗(yàn)用活菌計(jì)數(shù)結(jié)果：金黃色葡萄球菌74，大腸埃希菌67.5，枯草芽孢桿菌55，生孢梭菌29.5，白色念珠菌41，黑曲霉45.5。

4.結(jié)論

經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，依法檢測，可有效檢測乙酰半胱氨酸注射液的無菌檢查，為控制產(chǎn)品質(zhì)量提供檢測依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1] 中國藥典，2010年版二部