朱米娜，王健紅，郝彩霞，王文勇，張 娜，賈衛(wèi)靜，唐海龍，董寶俠，顧宏濤，張 濤，楊 嵐，高廣勛，陳協(xié)群，王 哲，梁 蓉*

(1西安市第一醫(yī)院急診科，西安 710002；第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院：2血液科，3病理科，西安 710032)

套細胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma, MCL)是一種B細胞非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma, NHL)，約占NHL的3%～10%，異質(zhì)性強，好發(fā)于老年男性，患者就診時常為Ⅲ～Ⅳ期，易復發(fā)，預后差[1-4]。目前多采用淋巴瘤國際預后指數(shù)(international prognostic index, IPI)和MCL國際預后指數(shù)(MIPI)進行風險分層[5,6]，但仍難以準確指導MCL臨床治療和預后評估，亟需探討新的預后判斷指標。

14-3-3zeta屬14-3-3蛋白家族成員，可通過結合蛋白發(fā)揮對多種網(wǎng)絡信號的調(diào)控，如Bax、Bad與14-3-3zeta結合后定位在胞漿內(nèi)，通過阻斷它們與線粒體Bcl-2的結合發(fā)揮抗細胞凋亡作用，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中扮演重要角色[7-9]。有研究表明14-3-3zeta與彌漫大B細胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma, DLBCL)的發(fā)病機制有關[10]，目前未出現(xiàn)其在MCL表達的研究報道。本研究旨在探討14-3-3-zeta的表達及其與MCL患者預后的關系。

1 對象與方法

1.1 研究對象

收集2007年3月至2012年3月期間于第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院取材、病理科確診、血液科住院標準治療的，并取得完整2年隨訪資料的12例MCL患者的臨床資料，包括：性別、發(fā)病年齡、發(fā)病部位、全身癥狀、美國東部腫瘤協(xié)作組(Eastern Cooperative Group, ECOG)評分、腫大淋巴結、脾臟及骨髓侵犯、其他結外侵犯、臨床分期、發(fā)病時的白細胞數(shù)、乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)、β2-微球蛋白(β2-microglobulin,β2-GM)、病理結果、治療方案。所有患者均接受1個療程以上CHOP(E)方案{多柔比星(doxorubicin)、環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide)、長春新堿(vincristine)、潑尼松[prednisone；依托泊苷(etoposide)]}±R[利妥昔單抗(rituximab)]聯(lián)合化療，2例同時行局部放療。1例經(jīng)化療+局部放療達完全緩解(complete remission, CR)后行自體造血干細胞移植(autologous stem-cell transplantation, ASCT)；1例選用PAD方案[硼替佐米(bortezomib)、多柔比星、地塞米松(dexamethasone)]聯(lián)合化療，達CR后采用美羅華(利妥昔單抗注射液)1次/月維持治療。所有方案藥物劑量均參照美國國立綜合癌癥網(wǎng)絡(National Comprehensive Cancer Network,NCCN)指南MCL治療方案的標準劑量，按體表面積計算得出?；颊咄瓿?～6個療程正規(guī)化療后，評定短期療效總反應率(overall response rate,ORR)，包括CR和部分完全緩解(partial remission,PR)；隨訪2年，觀察總生存(overall survival,OS)率及無進展生存(progression free survival,PFS)率。

調(diào)取患者存檔蠟塊，重新切片、固定，經(jīng)免疫組化檢測蛋白表達，以15份淋巴結反應性增生標本作為對照。

1.2 主要試劑與儀器

14-3-3zeta，兔抗人多克隆抗體(Abcam公司，英國)；CD20、CD10、CD79α、Bcl-2、GTVisionTMⅢ抗鼠/兔通用型免疫組化檢測試劑盒(DAKO公司，丹麥)；CD5、CD3、PAX5、Cyclin D1(邁新生物技術開發(fā)有限公司，福州)。顯微鏡及成像系統(tǒng)(Olympus公司，日本)。

1.3 常規(guī)HE染色及免疫組織化學染色

12例患者病理活檢標本經(jīng)HE染色、光鏡下觀察。采用抗原抗體反應原理，用鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶二步法檢測免疫表型：一抗14-3-3zeta 濃度為1︰ 50，開始免疫組織化學染色前抗原經(jīng)微波修復10 min。采用磷酸緩沖液代替一抗作為陰性對照，并采用試劑盒建議的陽性對照片作陽性對照。

1.4 結果判定

兼顧陽性染色強度與數(shù)量進行免疫組織化學染色結果判定。以細胞內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性標記。(1)根據(jù)染色強度分為0分(無色)、1分(淺黃色)、2分(棕黃色)、3分(棕褐色)；(2)根據(jù)腫瘤陽性細胞百分比分為0分(無陽性)、1分(≤25%)、2分(26%～50%)、3分(51%～75%)、4分(>75%)；(3)染色強度積分與數(shù)量積分相加后判定結果：0分為-，1分為±；2～3分為+，4～5分為++，6～7分為+++。

1.5 統(tǒng)計學處理

結果數(shù)據(jù)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行分析。組間比較采用Fisher確切概率法。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 患者一般情況

12例患者中男性9例，女性3例，男︰女=3︰1，中位年齡57.5(45～74)歲，病理類型均為彌散性。臨床特點具體見表1。

2.2 14-3-3zeta在MCL中的表達及臨床意義

14-3-3zeta在反應性增生淋巴結中弱表達。12例 MCL患者中8例細胞漿中14-3-3zeta陽性表達，陽性表達率為66.7%(表1，圖1)。

14-3-3zeta陽性表達患者ORR(62.5%，8例患者中5例緩解)與陰性表達患者(75.0%，4例患者中3例緩解)相比，無明顯差異；14-3-3zeta陽性表達患者2年PFS率(37.5%，8例患者中3例無進展)低于陰性表達患者(75.0%，4例患者中3例無進展)；14-3-3zeta陽性表達患者2年OS率(50.0%，8例患者中4例存活)低于陰性表達患者(100%，4例患者全部存活)。由于樣本量太小，上述結果差異均無統(tǒng)計學意義(均P>0.05)。

表1 12例MCL患者14-3-3zeta的表達

MCL: mantle cell lymphoma; IPI: international prognostic index; MIPI: mantle cell lymphoma international prognostic index; LDH: lactate dehydrogenase; F: female; M: male;*ND:not done;▲N: lymph node

圖1 免疫組織化學檢測14-3-3zeta在MCL的表達

8例14-3-3zeta陽性患者中5例Bcl-2陽性；7例Bcl-2陽性患者中5例14-3-3zeta陽性(71.4%)，兩者表達有相關性(表1)。14-3-3zeta與Bcl-2均表達陽性者5例，4例治療有效(ORR)，2例達2年PFS，2例達2年長生存；14-3-3zeta與Bcl-2其中之一表達陽性者2例，均治療有效(ORR)，1例達2年PFS，2例達2年長生存。8例14-3-3zeta陽性患者中3例行R+CHOP(E)方案化療，2例治療有效(ORR)，2例達2年PFS，3例達2年長生存；5例行CHOP(E)方案化療，3例治療有效(ORR)，1例達2年PFS，1例達2年長生存。結果提示,14-3-3zeta與Bcl-2表達均陽性者療效較單一陽性表達者差，R+CHOP(E)方案組療效優(yōu)于CHOP(E)方案組，有臨床意義，但樣本量少，尚無統(tǒng)計學意義，需擴大樣本量進一步研究。

3 討 論

MCL是一種相對少見的、具有高度異質(zhì)性的特殊類型NHL，兼有侵襲性淋巴瘤和惰性淋巴瘤的特征，還具有特征性的遺傳學易位特點t(11;14)(q13;q32)，并導致細胞周期蛋白(cyclin)D1過度表達。MCL中位生存期3～5年，預后受多種因素影響，目前多采用IPI和MIPI進行預后評估[5,6]，但仍難以準確地指導臨床治療和預后評估，亟需探討新的預后判斷指標。本研究旨在初步探討新的分子14-3-3zeta蛋白在MCL表達中的意義，指導臨床診療。

本研究12例患者中男性9例，女性3例，男︰女=3︰1，中位年齡57.5(45～74)歲。Ann Arbor臨床分期均為Ⅲ～Ⅳ期；淋巴結起病8例(占66.7%)；脾臟受累9例(占75.0%)；骨髓侵犯7例(占58.3%)；伴隨全身癥狀者5例(占41.7%)；所有患者病理類型均為彌散型；IPI 0～2分(中低危)的患者約占66.7%；MIPI<5.7(中低危)的患者約占63.6%。

14-3-3zeta是14-3-3蛋白家族的一個亞型，可通過Bad、Bax和Noxa、細胞骨架蛋白、CDC25C、HDACs和組蛋白等結合蛋白發(fā)揮對多種網(wǎng)絡信號的調(diào)控，如Noxa與Mcl-1蛋白結合能促進Mcl-1蛋白降解，導致細胞凋亡；14-3-3zeta/Noxa結合可能通過Mcl-1而抑制凋亡。14-3-3 zeta與Bax和Bad結合后定位在胞漿內(nèi)，通過阻斷它們與線粒體Bcl-XL和Bcl-2的結合發(fā)揮抗細胞凋亡作用[7,8]。14-3-3zeta參與多種癌癥細胞的增殖、周期調(diào)控、黏附、生長和凋亡等，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用[9,11-13]。研究顯示下調(diào)14-3-3zeta表達可誘導腫瘤細胞凋亡并增加腫瘤細胞對化療敏感性，可能是潛在的未來腫瘤治療的新靶點[9,14,15]。Maxwell等[10]的研究表明14-3-3zeta與DLBCL的發(fā)病機制有關，并且提出了針對耐藥性DLBCL使用14-3-3抑制劑這樣一種有前景的綜合治療方案。目前未出現(xiàn)14-3-3zeta在MCL表達的臨床意義的體內(nèi)外研究報道。

我們研究表明，12例患者14-3-3zeta 表達陽性8例(66.7%)，71.4%的Bcl-2表達陽性者14-3-3zeta表達陽性，符合正相關，且兩者均表達陽性者的ORR、2年PFS/ OS率均較單一陽性表達者差。進行預后因素分析結果如下。(1)14-3-3zeta陽性表達患者ORR、2年OS率、2年PFS率(62.5%、50.0%、37.5%)均低于14-3-3zeta陰性表達患者(75.0%、100.0%、75.0%)。(2)8例14-3-3zeta陽性患者中3例行R+CHOP(E)方案化療，2例治療有效(ORR)，2例達2年PFS，3例達2年長生存；5例行CHOP(E)方案化療，3例治療有效(ORR)，1例達2年PFS，1例達2年長生存。提示R+CHOP(E)方案組的ORR、2年PFS/ OS率均優(yōu)于CHOP(E)方案組，表明利妥昔單抗聯(lián)合化療可提高療效，與國內(nèi)外報道一致[16,17]。兩個方案的療效差異雖有臨床意義，但樣本量少，尚無統(tǒng)計學意義，需擴大樣本量進一步研究。

以上結果提示，14-3-3zeta蛋白可能與MCL預后有一定關系；而14-3-3zeta與Bcl-2表達符合正相關，推測14-3-3zeta與MCL預后相關性原因與Bcl-2有關，可能是MCL治療的新靶點。

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