祁新春，楊曉雁（山西戎子酒莊有限公司，山西鄉(xiāng)寧 042100）

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利用改進的高效液相色譜法測定葡萄酒中山梨酸鉀含量

祁新春，楊曉雁
（山西戎子酒莊有限公司，山西鄉(xiāng)寧 042100）

摘 要：通過對國標GB/T 23495-2009食品中山梨酸鉀含量方法的改進，建立一種簡單穩(wěn)定性好的方法，用于檢測葡萄酒中山梨酸鉀含量。結(jié)果表明，山梨酸濃度與液相色譜儀出峰峰面積呈線性回歸，相關(guān)系數(shù)r為0.9998，回收率為91%~115.8%；檢測葡萄酒樣品時，RSD為2.08，穩(wěn)定性和重復(fù)性好。

關(guān)鍵詞：山梨酸鉀；高效液相色譜儀；葡萄酒

山梨酸，化學(xué)名為2,4-己二烯酸或2-丙烯基丙烯酸，是一種直鏈不飽和脂肪酸，結(jié)構(gòu)式如圖1所示。可參與人體內(nèi)的正常代謝，同化產(chǎn)生二氧化碳和水，但山梨酸過量，會對人體有害處[1]。由于其具有抑制微生物生長特性，而且毒性低，被國際糧農(nóng)組織和衛(wèi)生組織推薦為高效安全的防腐劑。山梨酸的溶解度比較低，常制成溶解度較大的山梨酸鉀，添加到食品中[2-3]。山梨酸鉀為無色-白色鱗片狀結(jié)晶，或白色粉末，熔點270 ℃，溶于水而難溶于乙醇[4]。山梨酸鉀和山梨酸具有同樣的防腐功能，能夠有效地抑制霉菌、酵母菌和好養(yǎng)性細菌的活性，還能防止肉毒桿菌、葡萄球菌、沙門氏菌等有害微生物的生長和繁殖，其抑制發(fā)育的作用比殺菌作用更強，從而能夠有效延長食品的保存時間[5-7]。

我國國家標準GB 15037-2006《葡萄酒》規(guī)定葡萄酒中山梨酸及山梨酸鉀的最大使用限量為0.2 g/kg。當(dāng)山梨酸與山梨酸鉀同時使用時，以山梨酸計，不得超過最大使用量[8]。為了檢測葡萄酒中山梨酸或山梨酸鉀的含量，國家標準GB/T 5009.29-2003《食品中山梨酸、苯甲酸的測定》規(guī)定檢測方法為氣相色譜法、薄層色譜法以及高效液相色譜法[9]，國家標準GB/T 23495-2009《食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定 高效液相色譜法》提出利用高效液相色譜儀檢測不同食品中的山梨酸含量[10]。

圖1　山梨酸結(jié)構(gòu)式

上述兩個標準使用高效液相色譜法測定山梨酸的檢測方法存在不一致與不夠詳細的問題。（1）制備山梨酸標準儲備液的不同：國家標準GB/T 5009.29-2003制備為準確稱取0.1000 山梨酸，加碳酸氫鈉（20 g/L）5 mL，加熱溶解，移入100 mL容量瓶中，加水定容至100 mL；而GB/T 23495-2009制備為準確稱取0.2680 g山梨酸鉀，加水溶解并定容至200 mL；（2）樣品處理：對葡萄酒樣品水浴加熱除醇的時間和溫度并未做詳細規(guī)定。

因此，本方法選擇了一種比較快速制備山梨酸標準儲備液和一種快速準確的樣品處理方法。

1 試驗材料與方法

1.1 試驗材料

高效液相色譜儀（Agilent 1260，安捷倫科技（中國）有限公司），附紫外吸收檢測器（VWD），色譜柱（HYPERSIL 150 mm×4.6 mm，5 μm）。

甲醇（色譜級，Mreda Technology inc，USA），乙酸銨（分析純，洛陽市化學(xué)試劑廠），氨水（洛陽市化學(xué)試劑廠），山梨酸標準溶液（濃度為1 mg/mL，中國計量科學(xué)研究院），所有的溶液均由Millipore 純水機（美國）制備的超純水配制。

葡萄酒樣品為2014年戎子酒莊3款鮮酒：輕柔紅葡萄酒，酒度為9.0%，含糖量為52.0 g/L；輕柔桃紅葡萄酒酒度為10.5%，含糖量為39.2 g/L；濃甜紅葡萄酒酒度為12.5%，含糖量為106 g/L。

1.2 試驗方法

1.2.1 山梨酸標準曲線制作

按照表1所示，吸取不同體積的山梨酸標準溶液，并將其稀釋到10 mL的容量瓶中，對應(yīng)濃度如表所示，過濾待用。上述步驟重復(fù)三次。

1.2.2 樣品前處理

用移液槍取葡萄酒樣品10 mL于小燒杯中，100 ℃水浴加熱20 min或80 ℃水浴30 min去除乙醇，加水稀釋，并用稀氨水（氨水與超純水1:1混合配制）準確調(diào)節(jié)pH值為7.00，最后定容到100 mL容量瓶中，用一次性濾器過濾后待用。

1.2.3 高效液相色譜條件

配制0.02 mol/L乙酸銨溶液。取1.54 g乙酸銨，溶于1 L超純水中，過濾待用。

高效液相色譜條件：流動相，甲醇:乙酸銨=5:95；波長230 nm，流速1 mL/min，柱溫30 ℃，進樣體積10 μL。

表1　山梨酸標準曲線

2 結(jié)果與分析

2.1 標準曲線制作

由圖2可以看出，山梨酸出峰時間為4.7 min左右。

山梨酸標準溶液用超純水配制成濃度分別為5 mg/L，10 mg/L，15 mg/L，20 mg/L，25 mg/L，30 mg/L，按儀器工作條件進行測定，以各自峰面積對標準溶液的質(zhì)量濃度繪制標準曲線，檢測的化合物在5～30 mg/L呈線性，線性回歸曲線見圖3，相關(guān)系數(shù)r為0.9998。

2.2 回收試驗

在葡萄酒樣品中加入1 mg/mL的山梨酸標準溶液1 mL，檢測樣品中山梨酸含量，結(jié)果如表2所示：進行回收試驗，平行3次，按試驗條件測定，加標回收率在93.03%～107.15%之間。

圖2　山梨酸標準樣品出峰圖

圖3　山梨酸標準曲線

2.3 樣品中山梨酸鉀含量測定

如圖4所示為葡萄酒中山梨酸鉀含量的測定圖譜，出峰時間為4.8 min左右，干擾峰少。檢測葡萄酒中山梨酸鉀含量，樣品檢測重復(fù)3次，輕柔紅葡萄酒檢測數(shù)據(jù)依次為110.7 mg/L，109.67 mg/L，111.94 mg/L，檢測平均值為110.77 mg/L，RSD為1.86；輕柔桃紅紅葡萄酒檢測數(shù)據(jù)依次為103.10 mg/L，102.93 mg/L，101.20 mg/L，檢測平均值為102.41 mg/L，RSD為1.03；濃甜紅葡萄酒檢測數(shù)據(jù)依次為94.57 mg/L，93.21 mg/L，96.52 mg/L，檢測平均值為94.77 mg/L，RSD為1.76。說明利用該方法檢測低醇葡萄酒中山梨酸鉀含量，準確性高，重復(fù)性好。

表2　加標回收率

3 討論

樣品前處理試驗表明，經(jīng)過加熱去醇，稀釋并調(diào)節(jié)pH后，樣品出峰狀況穩(wěn)定，檢測結(jié)果更精準[11-12]。通過pH調(diào)節(jié)后，消除不同溶液pH值對結(jié)果的影響[13]。

樣品測定結(jié)果顯示，利用高效液相色譜能夠?qū)⒌痛计咸丫浦猩嚼嫠徕浥c葡萄酒中其他物質(zhì)完美的分離[14-15]，定量分析重現(xiàn)性好，結(jié)果基本一致。因此，在實際樣品測定中，該方法更簡單準確。

4 結(jié)論

本文建立了葡萄酒中山梨酸鉀含量的測定方法，利用高效液相色譜儀，設(shè)置儀器條件為流動相，甲醇:乙酸銨=5:95，波長230 nm，流速1 mL/min，柱溫30 ℃，進樣體積10 μL。樣品進樣之前加熱去醇，稀釋以及pH調(diào)整處理，結(jié)果穩(wěn)定性更好。山梨酸濃度與液相色譜儀出峰峰面積呈線性回歸，相關(guān)系數(shù)r為0.9998，回收率為93.03%～107.15%；檢測葡萄酒樣品時，RSD＜2.00，方法簡單而且穩(wěn)定性好，靈敏度高，可以用于實際樣品的測定。

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The determination of potassium sorbate in wine by modified HPLC

QI Xinchun,YANG Xiaoyan
(Shanxi Chateau Rongzi Limited Company,Xiangning,Shanxi,042100)

Abstract:The study established a simple method of determination potassium sorbate in wine by modifying the GB/T 23495-2009.The results showed that the concentration of potassium sorbate and peak area were conforming to linear regression,and correlation index was 0.9998,the recoveries were 91% to 115.8%.The Relative standard deviation (RSD) was 2.08 when detect wine sample and the results were stable and repeatable.

Key words:potassium sorbate,High performance liquid chromatography (HPLC),wines

作者簡介：祁新春（1983-），男，學(xué)士，釀酒師，山西戎子酒莊有限公司技術(shù)中心。E-mail:qxc0814@163.com

收稿日期：2015-08-24

DOI：10.13414/j.cnki.zwpp.2016.01.006

中圖分類號：S663.1

文獻標識碼：A