幸小均

618300 四川省廣漢市人民醫(yī)院

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Bmi1、EZH2在食管鱗癌中的表達(dá)及其臨床價(jià)值

幸小均

618300 四川省廣漢市人民醫(yī)院

【摘要】目的探討B(tài)mi1與EZH2共同高表達(dá)對(duì)食管鱗癌的影響。方法回顧性分析82例食管鱗癌患者的臨床資料，考察Bmi1與EZH2在食管鱗癌組織中的表達(dá)情況及其對(duì)食管鱗癌患者生存率的影響，并進(jìn)一步分析Bmi1與EZH2的表達(dá)情況對(duì)食管鱗癌的影響是否存在關(guān)聯(lián)性。結(jié)果腫瘤組織Bmi1與EZH2的IS得分均明顯高于癌旁組織(P<0.05)；Bmi1高表達(dá)組患者2～5年及5年生存率較Bmi1低表達(dá)組低(P<0.05)，EZH2高表達(dá)組患者各時(shí)間段生存率與低表達(dá)組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；Bmi1與EZH2共同高表達(dá)組與其他組的食管鱗癌患者的P16表達(dá)情況差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論Bmi1與EZH2與食管鱗癌的發(fā)生和發(fā)展有密切聯(lián)系，且影響食管鱗癌患者的預(yù)后，Bmi1與EZH2共同高表達(dá)是食管鱗癌發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

【關(guān)鍵詞】Bmi1基因；EZH2基因；食管鱗癌；危險(xiǎn)因素

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:537～540)

Bmi1與EZH2均屬于多梳基家族的成員(PcG)，Bmi1為多梳基抑制復(fù)合體1(PRC1)的重要組成之一[1]，EZH2參與多梳基抑制復(fù)合體2(PRC)的組成[2]。多梳基家族(PcG)基因具有高度的保守性，在組織器官的發(fā)育中發(fā)揮重要作用，并且參與調(diào)控多種生理過(guò)程，包括調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄，干細(xì)胞的更新，細(xì)胞分化以及腫瘤發(fā)生等[3-5]。相關(guān)研究已經(jīng)證實(shí)，Bmi1與EZH2在多種腫瘤組織中異常表達(dá)，表明其在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮重要作用[6]，但是Bmi1和EZH2與食管鱗癌的發(fā)生和發(fā)展的相關(guān)性尚不完全清楚。本研究對(duì)我院確診的82例食管鱗癌患者進(jìn)行回顧性研究，現(xiàn)將相關(guān)內(nèi)容報(bào)告如下。

1材料與方法

1.1一般資料

選取2006年4月-2010年4月期間我院確診的82例食管癌患者，其中男性47例，女性35例，年齡43～78歲，平均年齡(58.3±5.4)歲。本研究82例食管鱗癌患者均符合以下入選標(biāo)準(zhǔn)：①所選標(biāo)本經(jīng)病理學(xué)確診為食管鱗癌和癌旁組織；②均未經(jīng)放化療治療；③患者隨訪資料完整。所有患者均于手術(shù)前獲取患者的食管鱗癌組織和癌旁組織，并制作石蠟標(biāo)本，用于進(jìn)一步的免疫組化分析。

1.2研究方法

所有患者均于手術(shù)時(shí)切除標(biāo)本進(jìn)行10%福爾馬林固定，石蠟包埋，然后進(jìn)行(1)脫蠟水化：置于二甲苯Ⅰ~Ⅲ 各5 min，100%酒精Ⅰ~Ⅲ 各1 min，95%酒精 1 min， 75%酒精 1 min，雙蒸水洗滌 2 min 共2次；(2)抗原修復(fù)：10 mM 枸櫞酸緩沖液(pH6.0)，微波加熱97 ℃12 min，室溫自然冷卻；(3)1×PBS洗滌2 min，2次；雙蒸水洗滌 5 min 共3次，3% H2O2室溫孵育10 min；(4)雙蒸水洗滌 2 min，1次，1×PBS洗滌2～5 min，2次；(5)封閉：5% BSA-PBST 室溫1 hr；(6) 一抗40 ℃孵育過(guò)夜(不超過(guò)16 hr)；(7)1×PBST洗滌8 min，2次；1×PBS洗滌8 min，2次；(8)二抗室溫孵育 1 hr；(9)1×PBST洗滌8 min，2次；1×PBS洗滌8 min，2次；(10)ABC室溫孵育 10 min；(11)1×PBS洗滌8 min，3次；(12)DAB 染色出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果后用雙蒸水沖洗終止染色過(guò)程；(13)蘇木精復(fù)染1 min；后用雙蒸水洗滌5 min。(14)脫水保存：系列75%乙醇30 s；100%乙醇30 s；二甲苯30 s；中性樹(shù)膠封閉后蓋上玻片，避免氣泡產(chǎn)生[7]。

本研究的免疫組織化學(xué)染色評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為：根據(jù)切片中上皮細(xì)胞的免疫組織化學(xué)著色深淺的比例分為弱陽(yáng)性、陽(yáng)性、強(qiáng)陽(yáng)性，分別記1分、2分、3分。樣本中Bmi1或EZH2陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞所占總細(xì)胞的比例分為5級(jí)：<5%(0分)，5%~25%(1分)，26%~50%(2分)，51%~75%(3分)和>75%(4分)。根據(jù)著色深淺與陽(yáng)性細(xì)胞比例計(jì)算免疫反應(yīng)得分(immunoreactivity score，IS)，IS=樣本著色程度得分×陽(yáng)性細(xì)胞比例得分[8]。

Bmi1高表達(dá)是指Bmi1免疫反應(yīng)得分≥6分，EZH2高表達(dá)是指EZH2免疫反應(yīng)得分≥10分，P16高表達(dá)是指P16免疫反應(yīng)得分≥3分[9]。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 16.0軟件比較各組間差異，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，計(jì)數(shù)資料以絕對(duì)數(shù)和百分率表示，組間比較采用q檢驗(yàn)加方差F分析，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1Bmi1與EZH2在食管鱗癌組織及癌旁組織中的表達(dá)差異

腫瘤組織Bmi1與EZH2的IS得分較癌旁組織高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；在2種組織中P16的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表1。

表1　Bmi1、EZH2與P16在食管鱗癌患者組織中的表達(dá)情況

注：*為與癌旁組織比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2食管鱗癌患者Bmi1與EZH2表達(dá)與其臨床資料的關(guān)系

根據(jù)患者腫瘤組織Bmi1的IS得分分成Bmi1高表達(dá)組(Bmi1 H)和低表達(dá)組(Bmi1 L)。其中Bmi1高表達(dá)組19例，占23.17%;Bmi1低表達(dá)組63例，占76.83%。患者性別、腫瘤大小、腫瘤分化程度、臨床分期、以及是否發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移在Bmi1高表達(dá)組和低表達(dá)組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

根據(jù)患者腫瘤組織EZH2的IS得分分成EZH2高表達(dá)組(EZH1 H)和EZH2低表達(dá)組(EZH2 L)。其中EZH2高表達(dá)組49例，所占比例為59.75%；EZH2低表達(dá)組33例，所占比例為40.25%。患者臨床分期、以及是否發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移在EZH2高表達(dá)組和低表達(dá)組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。,見(jiàn)表2。

表2　食管鱗癌患者Bmi1與EZH2表達(dá)與其臨床

Bmi1與EZH2共同高表達(dá)組與其他組的食管鱗癌一般臨床資料比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表3。

表3　Bmi1與EZH2的不同表達(dá)組與食管鱗癌患者的一般臨床資料分析(例，%)

2.3Bmi1與EZH2的表達(dá)與食管鱗癌患者生存率的關(guān)系

通過(guò)比較各組0~2年、2~5年及5年以上生存率發(fā)現(xiàn)，Bmi1 H組的2～5年以及5年生存率低于Bmi1 L組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而EZH2 H組與EZH2 L組的各時(shí)間段生存率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表4。

表4　不同Bmi1與EZH2的表達(dá)組患者食管鱗癌患者

進(jìn)一步分析Bmi1與EZH2共同高表達(dá)組Bmi1(H)EZH1(H)與其他各組患者生存率發(fā)現(xiàn)，Bmi1與EZH2共同高表達(dá)并不縮短患者生存期，(P>0.05)，見(jiàn)表5。

表5　Bmi1與EZH2共同高表達(dá)食管鱗癌患者與其他

2.4P16在Bmi1與EZH2高表達(dá)食管鱗癌患者中的表達(dá)情況

對(duì)不同組別患者的P16表達(dá)情況進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)Bmi1與EZH2共同高表達(dá)組與其他組的食管鱗癌患者的P16表達(dá)情況差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表6。

表6　不同Bmi1與EZH2表達(dá)組患者的P16表達(dá)

3討論

原癌基因Bmi1和EZH2同屬于多梳基因家族，其具有高度的保守性，相關(guān)研究表明Bmi1和EZH2在細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖中均發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用[10-12]。研究表現(xiàn)Bmi1在胃癌組織中的高表達(dá)患者的存活期較短，能夠作為胃癌診斷和治療的一個(gè)有價(jià)值的標(biāo)志物[13]。最新的研究提出Bmi1和EZH2可以作為某些癌癥治療的分子靶點(diǎn)[14]。

本研究發(fā)現(xiàn)，食管鱗癌組織的Bmi1和EZH2免疫反應(yīng)得分明顯高于癌旁組織，表明食管鱗癌組織高表達(dá)Bmi1和EZH2可能在食管鱗癌的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中起到促進(jìn)作用。相關(guān)研究已經(jīng)證實(shí)，Bmi1與多種腫瘤包括白血病、乳腺癌、胃癌、肺癌、膀胱癌、大腸癌及食管癌等的發(fā)生和發(fā)展有密切關(guān)系[15-16]。通過(guò)分析Bmi1的不同表達(dá)程度與患者臨床資料的結(jié)果表明Bmi1的表達(dá)與食管鱗癌生長(zhǎng)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和TNM分期具有相關(guān)性，而EZH2高水平表達(dá)也可能參與食管鱗癌的發(fā)生和發(fā)展。隨訪發(fā)現(xiàn)，Bmi1表達(dá)高的患者2～5年以及5年以上生存率明顯低于Bmi1低表達(dá)組，表明Bmi1高水平表達(dá)影響了食管鱗癌患者手術(shù)的預(yù)后。

本研究進(jìn)一步對(duì)Bmi1和EZH2共同高表達(dá)對(duì)食管鱗癌患者的影響， 結(jié)果顯示Bmi1和EZH2共同高表達(dá)組食管鱗癌患者的一般臨床資料、生存率以及抑癌基因P16的表達(dá)情況與其他組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究主要從食管鱗癌患者的腫瘤組織標(biāo)本的免疫組化方面著手，并沒(méi)有深入到細(xì)胞分子水平，有一定的局限性。Bmi1與EZH2的表達(dá)與食管鱗癌的更深層次的聯(lián)系，還有待進(jìn)一步的研究證實(shí)。

綜上所述，Bmi1與EZH2與食管鱗癌發(fā)生和發(fā)展有密切聯(lián)系，且影響食管鱗癌患者的預(yù)后。

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(編輯：甘艷)

Expression of Bmi-1 and EZH-2 in Esophageal Squamous Cell Carcinoma and Its Clinical Value

XINGXiaojun.People’sHospitalofGuanghan，Guanghan,618300

【Abstract】ObjectiveTo explore co-overexpression of Bmi1 and EZH2 on esophageal squamous cell carcinoma.MethodsRetrospective analysis of the clinical data of 82 patients with esophageal squamous cell carcinoma was conducted.Expression of of Bmi1 and EZH2 in esophageal squamous cell carcinoma and its influence on survival rate were detected,and further analysis of the association of Bmi1 and EZH2 expression in esophageal squamous cell carcinoma and its impact was conducted.ResultsThe IS scores of Bmi1 and EZH2 in tumor tissues were significantly higher than adjacent tissues (P<0.05);2~5 and 5-year survival rates of the patients with high expression of Bmi1 were lower than patients with low expression of Bmi1(P<0.05),there had no significant difference in the survival rates at different time between patients with high EZH2 expression and patients with low EZH2 expression (P>0.05);there had no significant difference in P16 expression between patients with co-overexpression of Bmi1 and EZH2 group and other group (P>0.05).ConclusionBmi1 and EZH2 are closely related with the occurrence and development of esophageal squamous cell cancer,and it influence the prognosis of patients,and co-overexpression of Bmi1 and EZH2 is an independent risk factor for esophageal squamous cell carcinoma.

【Key words】Bmi1gene;EZH2 gene;Esophageal squamous cell carcinoma;High risk factor

(收稿日期2015-06-02修回日期 2015-11-20)

中圖分類(lèi)號(hào)：R735.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1001-5930(2016)04-0537-04

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2016.04.005