呂潔瓊，林君紅，崔升淼

(廣東藥科大學 中藥學院，廣東 廣州 510006)

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介孔二氧化硅納米粒對穿心蓮內酯載藥性能及藥物釋放的影響

呂潔瓊，林君紅，崔升淼

(廣東藥科大學 中藥學院，廣東 廣州 510006)

目的 制備介孔二氧化硅納米粒，并研究它對穿心蓮內酯載藥性能及藥物釋放的影響。方法 以介孔二氧化硅納米粒負載穿心蓮內酯，采用N2吸附、DSC、SEM、XRPD進行表征，并測定納米粒的載藥量和體外藥物釋放量。結果 投藥量為10%、20%、25%、30%時，藥物質量分數(shù)分別為6.89%、14.8%、19.6%、22.3%；載藥后樣品分散均勻，外觀、大小與載藥前相比均無顯著變化；載藥后比表面積、孔容量、孔徑均比載藥前降低。體外溶出度試驗表明，穿心蓮內酯介孔二氧化硅納米粒(MSNs-AND)的體外溶出度均比穿心蓮內酯原料藥高，且差異具有統(tǒng)計學意義。結論 介孔二氧化硅納米?？蓪崿F(xiàn)穿心蓮內酯的高負載，并可顯著提高其溶出度。

穿心蓮內酯； 介孔二氧化硅； 納米粒； 體外釋放

穿心蓮內酯(andrographolide,AND)為二萜類內酯化合物，是中藥穿心蓮(AndrographisHerba)的主要有效成分之一，具有較好的免疫調節(jié)及抗腫瘤作用，治療胃癌、肺癌、大腸癌等多種腫瘤效果明顯[1-2]。但穿心蓮內酯水溶性差、溶出較低，因此限制了藥物的口服吸收。介孔二氧化硅納米粒已得到越來越廣泛的關注，具有較高的比表面積、較大的孔容量、生物相容性良好且價格相對低廉，可將難溶性藥物裝載于其中，增大藥物溶出面，提高藥物溶出度，進而可提高藥物口服生物利用度[3-4]。本研究以介孔二氧化硅納米粒為載體，負載穿心蓮內酯，并對納米粒的載藥量和體外藥物釋放量進行考察。

1 儀器與試藥

AUTOSORB-1-MP全自動比表面及孔隙度測定儀(美國康塔)；ADVANCE X-射線衍射儀(德國Bruker)；STA 409同步熱分析儀(德國Netzsch)；JSM-6060掃描電鏡(日本電子Jeol)；高效液相色譜儀、紫外檢測器(日本島津公司) 。

穿心蓮內酯原料藥(陜西錦泰生物工程有限公司，批號：JT20091205，質量分數(shù)：98%)；穿心蓮內酯對照品(中國藥品生物制品檢定院，批號：0797-9302)；介孔二氧化硅納米粒(自制)；甲醇(江蘇漢邦科技有限公司，色譜純)；其他試劑均為市售分析純。

2 方法與結果

2.1 穿心蓮內酯介孔二氧化硅納米粒(MSNs-AND)的制備

精密稱取適量穿心蓮內酯原料藥于錐形瓶中，加入適量的無水乙醇使其質量濃度為20 mg/mL，于60 ℃水浴加熱使藥物溶解，再加入不同比例的介孔二氧化硅納米粒，密封條件下，于60 ℃下攪拌4 h。敞口條件下繼續(xù)加熱攪拌，使乙醇慢慢揮發(fā)至使納米粒呈濕潤狀態(tài)，用約5 mL熱無水乙醇洗滌殘余藥物，最后置真空干燥箱中過夜，即得到MSNs-AND。

按照藥物與材料的質量比為1∶9、1∶4、1∶3、3∶7的比例，即投藥量為10%、20%、25%、30%，分別制得MSNs-AND，分別命名為MSNs-AND(10)、MSNs-AND(20)、MSNs-AND(25)、MSNs-AND(30)。

2.2 MSNs-AND的表征測試

2.2.1 掃描電鏡分析 取樣品放于樣品臺上，置于離子濺射儀中噴金15 s，并于掃描電鏡中觀察拍照，結果見圖1。結果顯示，介孔二氧化硅納米粒粒徑在100 nm左右，外觀規(guī)則、圓整，且分散較均勻。載藥后MSNs-AND外觀形狀、大小均無較大變化，未發(fā)現(xiàn)穿心蓮內酯晶體結構，原因可能是藥物被吸附在介孔二氧化硅材料的表面及被裝載進介孔二氧化硅納米粒的孔道里。另外，載藥后的納米材料邊緣較未載藥的模糊，且隨著載藥量的增大，該現(xiàn)象越明顯，原因可能是由于材料的孔道和表面吸附藥物所造成的。

2.2.2 比表面及孔隙度分析(BET) 測定MSNs和MSNs-AND(30)載藥前后的氮吸附脫附等溫線(見圖2)，并計算相應的孔型、孔徑、比表面積、孔容量等信息，結果見表1?？梢姡d藥前的介孔二氧化硅納米粒(MSNs)呈現(xiàn)出典型的Ⅳ型等溫吸附線，具有Ⅳ型等溫吸附線2個典型拐點，說明具有介孔結構。但載藥后，即MSNs-AND(30)等溫吸附線與空白介孔二氧化硅納米材料有偏差，其Ⅳ型等溫吸附線的特征減弱，第1個拐點不明顯，可能是載藥后藥物填充于孔道中，甚至是堵塞孔道所致。另外，根據(jù)吸附曲線計算MSNs載藥后的比表面積為616.98 m2/g，較載藥前降低了40.7%，孔容量、孔徑則較載藥前分別降低了50%、21.5%，進一步證明藥物已經(jīng)裝載到MSNs的介孔中。

A.MSNs-AND(10)； B.MSNs-AND(20)； C.MSNs-AND(25)； D.MSNs-AND(30)； E.MSNs。

圖1 介孔二氧化硅納米粒載藥前后的掃描電鏡圖

Figure 1 The results of SEM before and after loading of MSNs

圖2 MSNs、MSNs-AND(30) N2等溫吸附曲線

Figure 2 The result of N2adsorption isotherm of MSNs and MSNs-AND(30)

表1 MSNs、MSNs-AND(30) N2等溫吸附結果

Table 1 The result of nitrogen adsorption isotherm of MSNs and MSNs-AND(30)

樣品比表面積/(m2·g-1)孔容量/(cm3·g-1)孔徑/nmMSNs1040.520.883.39MSNs-AND(30)616.980.412.66

2.2.3 DSC熱分析 穿心蓮內酯原料藥、空白材料、藥物與材料(質量比1∶9)的物理混合物、MSNs-AND(30)、MSNs-AND(25)、MSNs-AND(20)、MSNs-AND(10)的DSC熱分析結果見圖3?？梢姡┬纳弮弱ピ?30 ℃處有1個吸熱峰，而MSNs在整個升溫過程中均無放熱或吸熱峰。

圖3 MSNs的DSC曲線圖
Figure 3 DSC spectrum of MSNs

2.2.4 X線粉末衍射分析(XRPD) 穿心蓮內酯原料藥、空白材料、藥物與材料(1∶9)的物理混合物、MSNs-AND(30)、MSNs-AND(25)、MSNs-AND(20)、MSNs-AND(10)的X線粉末衍射分析結果見圖4?？梢?，物理混合物和原料藥在11°左右有1個強的晶體衍射峰，在16～18°之間有2個較強的晶體衍射峰，而MSNs材料僅有1個很弱的彌散峰。MSNs-AND(10)、MSNs-AND(20)無明顯的藥物特征峰出現(xiàn)，與空白MSNs相近，說明藥物是以無定形形式存在，該結果與DSC分析結果相一致。MSNs-AND(25)則與MSNs-AND(30)不同，并沒有呈現(xiàn)出較明顯的藥物衍射峰，而僅在11°、16～18°處呈現(xiàn)3個非常小的衍射峰。

2.3 載藥量和體外釋放試驗

2.3.1 載藥量的測定 精密稱取適量樣品置于50 mL容量瓶中，加入甲醇40 mL，超聲15 min，定容至刻度。用0.45 μm微孔濾膜濾過后，參考2015年版《中國藥典》一部穿心蓮內酯項下含量測定方法進行測定[5]，其標準曲線為y=97 906x+25 113，R2=0.999 9，線性范圍為2.94～39.23 μg。MSNs-AND(10)、MSNs-AND(20)、MSNs-AND(25)、MSNs-AND(30)藥物質量分數(shù)分別為6.89%、14.8%、19.6%、22.3%。MSNs-AND中的穿心蓮內酯質量分數(shù)均比投藥量低，分別下降了31.1%、26%、21.6%、25.7%，原因主要是：用熱乙醇洗滌時，將大部分沒有被MSNs吸附的藥物及部分材料表面的藥物洗滌，造成了藥物的損失；由于載藥過程時間較長，且在加熱條件下進行，可能會使部分藥物降解，導致最終藥物質量分數(shù)降低。

圖4 MSNs的X線衍射圖譜
Figure 4 X ray diffraction pattern of MSNs

2.3.2 體外釋放研究 DSC熱分析結果可知，MSNs材料對穿心蓮內酯的較佳載投藥量為10%、20%，而DSC與XRPD結果均表明MSNs-AND(30)出現(xiàn)明顯的藥物特征峰，說明該投藥量大于MSNs材料的裝載能力。因此選擇MSNs-AND(10)、MSNs-AND(20)、MSNs-AND(25)3種載藥MSNs材料進行體外釋放的研究。

以pH6.8磷酸鹽緩沖溶液900 mL作為溶出介質，溫度保持在(37±0.5)℃。取穿心蓮內酯原料藥20 mg，含有20 mg藥物的MSNs-AND(10)、MSNs-AND(20)和MSNs-AND(25)，每個樣品平行操作3份，分別投入溶出杯中，立即啟動旋轉并開始計時，轉速為100 r/min，分別在5、10、15、20、30、45、60、75、90、120 min吸取溶液5 mL，同時補入等溫等量的空白介質溶液。樣品立即經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過。樣品按文獻[5]方法進行測定，標準曲線方程為y=1.0×105+20 008，R2=0.999 9，線性范圍為0.30～8.06 μg。溶出曲線見圖5。根據(jù)文獻[6]，分別選用各組在15、30、60、120 min的數(shù)據(jù)利用SPSS軟件進行重復測量數(shù)據(jù)的兩因素多水平分析。結果表明MSNs-AND(10)、MSNs-AND(20)、MSNs-AND(25)的溶出效果比穿心蓮內酯原料藥好，差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

圖5 MSNs-AND的溶出曲線

Figure 5Invitrorelease profiles of MSNs-AND (n=3)

3 討論

本文DSC熱分析結果顯示，物理混合物和原料藥均有明顯的藥物峰出現(xiàn)，而MSNs-AND(10)、MSNs-AND(20)與空白MSNs均無藥物吸熱峰出現(xiàn)，說明MSNs-AND并不是一個簡單的物理混合物，二者結合方式發(fā)生了變化，且藥物可能以無定形方式存在；而MSNs-AND(25)與MSNs-AND(30)則有較弱的藥物峰出現(xiàn)，其原因可能是MSNs-AND(25)和MSNs-AND(30)中的藥物含量較大，載藥時溶劑與介孔存在表面張力，使得藥物不能進入到孔道的最中心而在近孔道口端處及孔道口周邊處堆積，藥物堆積過多時便形成藥物晶體。MSNs-AND(30)的吸熱峰比MSNs-AND(25)明顯，前者載藥量較后者多，說明載藥量增加后，孔道口周邊及近孔道口端藥物堆積增多形成了藥物結晶。從DSC熱分析結果可以觀察到物理混合物、MSNs-AND(25)、MSNs-AND(30)的藥物吸熱峰時間均比原料藥峰延后，其原因可能由于介孔二氧化硅材料主要成分是SiO2，屬惰性材料，穩(wěn)定性好，阻礙了藥物的傳熱，呈現(xiàn)出吸熱峰延后的現(xiàn)象。

X線粉末衍射分析結果與DSC結果并不完全一致，說明MSNs-AND(25)與MSNs-AND(30)存在不同的藥物晶體量，其原因可能是MSNs-AND(25)藥物含量較低，藥物在近口端或孔道口的堆積并沒有形成較大的晶核，而MSNs-AND(30)的藥物含量較高，藥物堆積程度較大，形成了較大的晶核，故MSNs-AND(30)不僅在11°、16～18°處有3個明顯的藥物峰出現(xiàn)，且在20～25°間還有一些微弱的藥物衍射峰出現(xiàn)。

本文的體外溶出試驗結果證明，具有較大比表面積及孔容量的介孔二氧化硅確可顯著提高水難溶性藥物穿心蓮內酯的溶出度，但存在溶出不完全的問題。以MSNs-AND(20)為例，120 min時的累積溶出度僅為89.52%。其原因可能與溶出介質的表面張力有關。在293 K即19.85 ℃下，水的表面張力系數(shù)為72.75×10-3N/m ,乙醇為22.32×10-3N/m，即乙醇的表面張力明顯比水?。磺译S著溫度的升高，溶劑的表面張力下降[7]。本研究采用60 ℃乙醇將藥物溶解后進行載藥，溶出介質是37 ℃的pH6.8緩沖鹽溶液，載藥時，藥物溶液可以進入到介孔二氧化硅孔道的更內部，并將藥物分散在孔道上。但是溶出介質由于其表面張力較60 ℃乙醇的大，導致進入孔道較短，因此內部的藥物因溶出介質沒有浸潤而停留在介孔二氧化硅載體材料上，最終導致藥物溶出不完全。

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(責任編輯：陳翔)

Effects of mesoporous silica nanoparticles on the drug loading and release of andrographolide

LYU Jieqiong,LIN Junhong,CUI Shengmiao

(SchoolofTraditionalChineseMedicine,GuangdongPharmaceuticalUniversity,Guangzhou510006,China)

Objective To prepare mesoporous silica nanoparticles and study their effects on Andrographolide (AND) drug loading and release. Methods The mesoporous silica nanoparticles loaded with AND were prepared. Nitrogen adsorption,DSC,SEM and XRPD were used for characterization. The drug loadings and the cumulative release percentage of MSNs-AND were determined. Results The content of the dosage of 10%,20%,25% and 30% were 6.89%,14.8%,19.6% and 22.3%. After loaded,the dispersion of MSNs-AND was more uniform,but there were no significant changes in their appearance and size. But after loaded,the specific surface area,pore volume and pore size were reduced. The dissolution of the MSNs-AND was higher than AND crude drug and the difference was significant. Conclusion The mesoporous silica nanoparticles can help to achieve a high drug loading of AND，and increase its dissolution rate significantly.

andrographolid; mesoporous silica; nanoparticles;invitrodrug release

2016-06-24

國家自然科學基金青年基金項目(81302715)；2015年廣東省大學生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓練計劃項目(201510573033)

呂潔瓊(1994—)，2013級中藥學專業(yè)本科生；通信作者:崔升淼(1974—)，女，博士，教授，碩士生導師，從事中藥新劑型與新技術研究，電話: 020-39352169,E-mail: cuishengmiao@qq.com。

時間：2016-10-08 14:54

http://www.cnki.net/kcms/detail/44.1413.R.20161008.1454.004.html

R944

A

1006-8783(2016)05-0555-04

10.16809/j.cnki.1006-8783.2016062401