邱孫全

浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院 浙江省杭州市 310000

程序化和玻璃化凍融人卵裂期胚胎的臨床應(yīng)用效果比較

邱孫全

浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院 浙江省杭州市 310000

目的：探討程序化和玻璃化凍融卵裂期胚胎的效果及臨床結(jié)局。方法：結(jié)果：玻璃化組的胚胎復(fù)蘇存活率高于程序化組，而周期取消率較低。在臨床結(jié)局上，玻璃化組的胚胎植入率與程序化組無(wú)顯著差異，而臨床妊娠率相比較高。結(jié)論：玻璃化法凍融卵裂期胚胎優(yōu)于程序化法，可獲得更高的臨床妊娠率。

玻璃化；程序化；卵裂期胚胎；體外受精-胚胎移植

自1984年首例凍融人類(lèi)胚胎成功妊娠后，胚胎冷凍-復(fù)蘇技術(shù)不斷發(fā)展。目前應(yīng)用于臨床的胚胎凍融方法主要有慢速程序化冷凍和玻璃化冷凍。相比程序化，玻璃化冷凍操作時(shí)間短，并且不需要價(jià)格高昂的程序化冷凍儀。而短時(shí)間內(nèi)高濃度的玻璃化冷凍液是否會(huì)影響胚胎的發(fā)育潛能，仍有待更多的研究。本研究回顧性分析本中心的1154例胚胎凍融周期的臨床結(jié)果，比較兩種凍融方法的冷凍復(fù)蘇效果及臨床結(jié)局，以期為臨床上選擇適宜的凍融方法提供參考。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

對(duì)2015年1月至2015年6月期間在本中心接受體外受精-胚胎移植（IVF-ET）的1154個(gè)冷凍-復(fù)蘇周期。其中程序化冷凍813例，玻璃化冷凍341例。

1.2 研究方法

1.2.1 程序化冷凍

試劑為FreezeKit Cleave和ThawKit Cleave（Vitrolife, 瑞典）。使用英國(guó)Planer程序降溫儀進(jìn)行程序化冷凍。將胚胎置入ES3min，移入FS放置8min后裝管并放入程序降溫儀，以-2℃/min降溫至-7℃，植冰，然后以-0.3℃/min降溫至-30℃，之后以-30℃/min降溫至-150℃，取出迅速投入液氮中保存。解凍時(shí)，將麥管從液氮中取出，室溫30s，30℃水浴40s，取出將胚胎按序移入TS1、TS2和ES各5min，轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中置于CO2培養(yǎng)箱。

1.2.2 玻璃化冷凍

試劑為MediCult Vitrifcation Cooling和Medicult Vitrifcation Warming（Origio，丹麥）。冷凍時(shí)，將胚胎放入BS 1min，轉(zhuǎn)入ES 7min，然后移入VS漂洗數(shù)次并于1min內(nèi)將胚胎滴在載桿上，迅速投入液氮保存。解凍時(shí)，將裝有胚胎的載桿從液氮中取出，迅速置入37℃的VS1,1min后按順序移入VS2、VS3、VS4，分別放置3min，轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中置于CO2培養(yǎng)箱。

1.2.3 胚胎移植

采用自然周期、激素替代法或hMG/ hCG促排卵周期準(zhǔn)備內(nèi)膜。移植后進(jìn)行黃體支持，至4周后行B超檢查妊娠囊。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

（1）將1154例胚胎凍融移植周期分為程序化和玻璃化冷凍組，周期數(shù)分別為813和341。比較兩組的患者基本資料，包括年齡（31.18±3.37～30.92±3.71，P>0.05）、不孕年限（3.98±2.15～3.77±2.56，P>0.05）和內(nèi)膜厚度（9.16±1.64～9.32±1.73，P>0.05）等，均無(wú)顯著差異。

（2）比較兩組的胚胎冷凍-復(fù)蘇存活率和移植周期取消率，以及行胚胎移植術(shù)后的胚胎植入率和臨床妊娠率。結(jié)果顯示，玻璃化組的胚胎復(fù)蘇存活率高于程序化組（93.0%～81.2%，P<0.05），而周期取消率較低（2.6%～4.9%，P<0.05）。在臨床結(jié)局上，玻璃化組的胚胎植入率與程序化組無(wú)顯著差異（26.3%～25.3%，P>0.05），而臨床妊娠率相比較高（51.2%～45.9%，P<0.05）。

3 討論

胚胎凍融技術(shù)可最大限度地利用胚胎，使一次取卵周期可能獲得多次胚胎移植機(jī)會(huì)，提高臨床累計(jì)妊娠率。目前，常用的胚胎冷凍為程序化冷凍法和玻璃化冷凍法。程序化法臨床應(yīng)用較早，主要通過(guò)使用程序降溫儀來(lái)實(shí)現(xiàn)胚胎細(xì)胞的脫水。然而冷凍過(guò)程難以完全避免胞內(nèi)冰晶的產(chǎn)生從而對(duì)胚胎造成損傷。玻璃化冷凍室利用高濃度的冷凍保護(hù)劑，使胚胎胞內(nèi)液體變?yōu)椴ＡЩ癄顟B(tài)，從而避免冰晶形成。與程序化法相比，玻璃化冷凍法無(wú)需昂貴的設(shè)備，操作簡(jiǎn)便，冷凍過(guò)程耗時(shí)較短[1]。而高濃度冷凍保護(hù)劑的使用會(huì)加大細(xì)胞毒性，其對(duì)胚胎后續(xù)發(fā)育的影響有待研究。

本研究選取1154例冰凍胚胎移植周期，并根據(jù)冷凍方法進(jìn)行分組分析，發(fā)現(xiàn)玻璃化凍融法獲得的胚胎復(fù)蘇存活率比程序化法高（93.0%～81.2%），而移植周期取消率較低（2.6%～4.9%）。這一結(jié)果與國(guó)內(nèi)外多數(shù)學(xué)者的研究結(jié)果一致[2-4]。臨床結(jié)局方面，比較兩組的胚胎植入率，結(jié)果顯示無(wú)顯著差異（26.3%～25.3%，P>0.05）?？赡艿脑蚴牵焊邼舛鹊腄MSO（二甲基砜）作為冷凍保護(hù)劑，對(duì)細(xì)胞具有潛在的毒性，研究表明DMSO可提高胚胎的甲基化水平，從而影響胚胎的發(fā)育過(guò)程。相比程序化法，玻璃化法凍融的胚胎可獲得更高的臨床妊娠率（51.2%～45.9%）。這可能是因?yàn)椴ＡЩ瘍鋈诘呐咛ゴ婊盥氏啾瘸绦蚧ㄝ^高。

程序化凍融胚胎在臨床的應(yīng)用已有30多年時(shí)間，其安全性已得到公認(rèn)。而玻璃化法的應(yīng)用時(shí)間較短，其安全性一直為輔助生殖領(lǐng)域所關(guān)注，包括嬰兒出生缺陷、體重、發(fā)育等健康狀況[5-7]。其后續(xù)影響值得進(jìn)一步研究。

綜上所述，玻璃化凍融胚胎技術(shù)比程序化法具有較高的冷凍-復(fù)蘇率，且可獲得更高的臨床妊娠率。而對(duì)于后代安全性，仍需長(zhǎng)期隨訪(fǎng)和后續(xù)研究。

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