盧鐘彥,梁巧蘭,何武學(xué)

(甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 草業(yè)學(xué)院/草業(yè)生態(tài)系統(tǒng)教育部重點實驗室/甘肅省草業(yè)工程實驗室/中-美草地畜牧業(yè)

可持續(xù)發(fā)展研究中心，甘肅 蘭州　730070)

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番茄早疫和晚疫病害病原菌鑒定及室內(nèi)藥劑的篩選

盧鐘彥,梁巧蘭,何武學(xué)

(甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 草業(yè)學(xué)院/草業(yè)生態(tài)系統(tǒng)教育部重點實驗室/甘肅省草業(yè)工程實驗室/中-美草地畜牧業(yè)

可持續(xù)發(fā)展研究中心，甘肅 蘭州730070)

摘要：對蘭州市皋蘭縣高山村番茄連作田病害調(diào)查發(fā)現(xiàn)，其主要病害為早疫病和晚疫病，病原菌鑒定為茄鏈格孢(Alternaria solani)和致病疫霉菌( Phytophthora infestans)；番茄早疫、晚疫病病菌在番茄葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長最好；接種不同方式、番茄不同品種對晚疫病的抗性都存在一定差異，其中在有傷接種條件下番茄果實病斑擴展速度明顯快于無傷接種；巨霸最感病，德富次之；捷美153最抗??；室內(nèi)藥劑篩選結(jié)果表明，10%苯醚甲環(huán)唑和72%霜脲·錳鋅對番茄早疫病菌抑菌效果最好，抑菌率分別為100%和98.35%；10%烯酰嗎啉和72%霜脲·錳鋅對番茄晚疫病菌抑菌效果最好，抑菌率分別為98.71%和100%。

關(guān)鍵詞：茄鏈格孢；致病疫霉菌；室內(nèi)藥劑篩選

番茄是一種重要的蔬菜作物，其適應(yīng)范圍廣，廣泛分布于世界各地，被列為全世界產(chǎn)量最高的30種農(nóng)作物之一，營養(yǎng)豐富，富含維生素和糖類，既可生食又可加工，深受人們喜愛[1-2]，番茄是喜溫、喜光性蔬菜，對土壤條件要求不太嚴(yán)格，但為獲得豐產(chǎn)，促進根系良好發(fā)育，應(yīng)選用土層深厚，排水良好，富含有機質(zhì)的肥沃壤土。番茄原產(chǎn)南美洲，在中國南北地區(qū)均廣泛栽培[3-4]。

近年來，隨著甘肅省農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)的調(diào)整，番茄的栽培面積呈逐年擴大趨勢，實現(xiàn)了周年供應(yīng)。但由于該地相對穩(wěn)定的土壤條件，加上種植年限延長，重茬、連作現(xiàn)象普遍,田間積累了大量的菌源，為各種病害的發(fā)生提供了十分有利的生存環(huán)境，加之一些菜農(nóng)缺乏科學(xué)的病害防治知識，防治不及時、不到位，導(dǎo)致病害種類明顯增多,病害發(fā)生逐年加重[5-7]。

在蘭州市皋蘭縣主要以番茄早疫病、番茄晚疫病為主；番茄早疫病、晚疫病是2種流行性很強的真菌病害，主要為害番茄葉片和果實，嚴(yán)重時葉片脫落，減產(chǎn)30%，不僅影響產(chǎn)量和品質(zhì)，同時給農(nóng)戶造成巨大的經(jīng)濟損失[8-11]。試驗對番茄早疫病(Alternariasolani)和番茄晚疫病(Phytophthorainfestans)病原物進行了分離、純化、培養(yǎng)、鑒定，并對2種病原菌進行了室內(nèi)藥劑篩選，旨在探明2種病害防治方法，以提高番茄的產(chǎn)量、質(zhì)量和經(jīng)濟效益。

1材料和方法

1.1試驗材料

1.1.1病樣采集分別于2013年6～8月，對甘肅省蘭州市皋蘭縣高山村番茄主要病害進行病樣采集，采樣時選擇剛剛發(fā)病的葉片，裝入一次性塑料袋內(nèi)，每只塑料袋裝一片葉子，用橡皮筋系住口部，置于冰盒內(nèi)，帶回實驗室備用。

1.1.2供試藥劑72%的霜脲·錳鋅可濕性粉劑，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植保所廊坊農(nóng)藥中試廠；10%的苯醚甲環(huán)唑微乳劑，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植保所廊坊農(nóng)藥中試廠；722 g/L的霜霉威鹽酸鹽水劑，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植保所廊坊農(nóng)藥中試廠；10%的烯酰嗎啉水乳劑，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植保所廊坊農(nóng)藥中試廠。

1.1.3供試幼苗播種番茄(品種巨霸、感病)于花盆，在實驗室條件培養(yǎng),待幼苗長到3～5片真葉時，備用。

1.1.4供試培養(yǎng)基(1)馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基：200 g馬鈴薯，18 g瓊脂，20 g葡萄糖，1 000 mL蒸餾水；(2)燕麥片瓊脂培養(yǎng)基：30 g燕麥片，18 g瓊脂，1 000 mL蒸餾水；(3)玉米粉瓊脂培養(yǎng)基:30 g玉米粉，17 g瓊脂，1 000 mL蒸餾水；(4)番茄葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基：200 g番茄，18 g瓊脂，20 g葡萄糖，1 000 mL蒸餾水。

1.2試驗方法

1.2.1病原菌分離純化將采集到的病葉組織切成1 mm×2 mm正方形小塊，先用75%乙醇溶液消毒30 s，然后再浸入15%的次氯酸中漂洗3 min，最后用無菌水沖洗3～4次，經(jīng)表面消毒的病組織放置在PDA(含鏈霉素10 μg/1 000 mL)平板培養(yǎng)基，于25℃恒溫箱培養(yǎng)，當(dāng)產(chǎn)生孢子或菌絲時(約4～5 d)，用滅菌的接種針挑取菌絲，移到新的PDA平板培養(yǎng)基上，直至菌落生長整齊一致無雜菌出現(xiàn)為止。

1.2.2致病性測定分離物采用赫柯氏法則進行致病性測定，將分離反復(fù)純化好的2種典型分離物在超凈工作臺上用0.5 cm打孔器在菌落邊緣打成菌餅，再回接到實驗室種植的番茄幼苗葉片上，然后逐天觀察番茄幼苗的發(fā)病情況，并且與田間發(fā)病癥狀作對照。

1.2.3病原菌鑒定根據(jù)病樣分離物在PDA上菌落形態(tài)及光學(xué)顯微鏡(Nikon E200)進行形態(tài)特征觀察，查閱相關(guān)文獻，結(jié)合《真菌鑒定手冊》[12]進行鑒定。

1.2.4不同培養(yǎng)基對番茄早疫、晚疫病菌生長的影響觀察室將分離得到的番茄早疫、晚疫病菌在PDA上培養(yǎng)5 d后，在超凈工作臺上用0.5 cm的打孔器在菌落邊緣上打取菌餅，分別轉(zhuǎn)接到4種供試培養(yǎng)基中，每皿1塊，3次重復(fù)，置于25℃恒溫下培養(yǎng)，5 d后觀察菌落生長情況，用十字交叉法測量培養(yǎng)基平板上的菌落直徑，記錄數(shù)據(jù),并用SPSS軟件進行處理。

1.2.5番茄不同品種對番茄晚疫病抗病性測定番茄不同品種巨霸、捷美153、德富各分成9份，其中3份采用無傷接菌，3份采用有傷接菌(用昆蟲針刺傷)，剩余3份作為對照，重復(fù)3次。在室溫保濕的條件下培養(yǎng)，觀察發(fā)病情況，每隔24 h測1次病斑，連測7 d。

1.2.6室內(nèi)藥劑篩選采用生長速率法測定4種殺菌劑對番茄早疫、晚疫病菌的抑菌率。采用各藥劑的推薦濃度進行試驗，藥劑濃度分別為10%苯醚甲環(huán)唑0.5 μg/mL、722 g/L霜霉威鹽酸鹽4.8 μg/mL、72%霜脲·錳鋅0.4 μg/mL、10%烯酰嗎啉0.65 μg/mL，然后按藥劑濃度的50倍用滅菌水分別配制成藥液，各取1 mL藥液加到滅菌冷卻至45℃的49 mL PDA 培養(yǎng)基中，搖勻，分別倒入3個滅菌培養(yǎng)皿中制成含藥培養(yǎng)基，以加1 mL無菌水的PDA為對照，用0.5 cm 打孔器分別在預(yù)先培養(yǎng)好的番茄早疫、晚疫病菌菌落邊緣打取菌餅，置于以上配制的含藥PDA平板上，每皿1個菌餅，最后將培養(yǎng)基置于25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5 d后，采用十字交叉法測量菌落直徑，并按公式計算藥劑抑菌率。

2結(jié)果與分析

2.1病原菌分離純化及鑒定

通過致病性測定，表明這2種分離物均能使番茄發(fā)病，將分離純化的分離菌1和2在超凈工作臺上用0.5 cm打孔器在菌落邊緣打成菌餅接種在供試幼苗的健康葉片上，室溫下保濕培養(yǎng)5 d，觀察發(fā)現(xiàn)接種分離菌1、分離菌2的供試幼苗葉片發(fā)病，且癥狀表現(xiàn)(圖1A,B)分別與田間早疫病、晚疫病發(fā)病癥狀一致(圖1C,D)。對接種發(fā)病的葉片進行再分離，獲得了與供試病樣一致的分離物。

分離菌1在PDA培養(yǎng)基上，菌絲初期生長呈灰白色，隨即向培養(yǎng)基呈圓形擴散，成圓后邊緣仍為白色，中間顏色逐漸變深最后成褐色、黑色。菌絲生長快，在25℃下培養(yǎng)5 d，菌落直徑在6 cm以上(圖2 A)。經(jīng)誘導(dǎo)處理可產(chǎn)生分生孢子，分生孢子梗單生或叢生，分生孢子單生，褐色，倒棍棒形至長橢圓形，大小(150～300) μm×(15～19) μm，一般有多個縱橫隔膜，有長喙(一般孢身長度)(如圖2 B)。分離菌2在PDA培養(yǎng)基上，菌絲絲狀，初無色透明，后變褐色，菌落近圓形(如圖2 C)分生孢子為無色透明，鴨梨型或慈姑型。成熟孢子有2～3個隔膜，大小為(17～33)μm×(6.5～11)μm，萌發(fā)時兩端細(xì)胞產(chǎn)生芽管，芽管的頂端產(chǎn)生附著孢，球形或橢圓型，深褐色，壁厚，直徑8～12 μm，緊貼在寄主體上產(chǎn)生侵入絲，入侵寄主組織(圖2 D)。

圖1　致病性測定Fig.1　Pathogenicity test注：A、B分別為接種分離物1、2供試幼苗發(fā)病癥狀;C、D分別為番茄早疫、晚疫病田間發(fā)病癥狀

圖2　病原菌鑒定Fig.2　The pathogen identification of tomato early blight and late blight注：分離菌1(A、B)和分離菌2(C、D)菌落培養(yǎng)形狀和分生孢子形態(tài)

根據(jù)病原形態(tài)特征、菌落形態(tài)及光學(xué)顯微鏡(Nikon E200)下孢子形態(tài),并參考相關(guān)文獻[13-15]，初步鑒定分離菌1為茄鏈格孢(Alternariasolani)，分離菌2為致病疫霉菌(Phytophthorainfestans)。

2.2不同培養(yǎng)基對番茄早疫、晚疫病菌生長的影響

通過不同培養(yǎng)基對番茄早疫、晚疫病菌生長影響試驗，結(jié)果表明番茄早疫菌和晚疫菌均可在4種供試培養(yǎng)基上生長，但存在一定差異，其中番茄早疫病菌在番茄葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長最快，玉米粉瓊脂培養(yǎng)基上最慢，馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基和燕麥片瓊脂培養(yǎng)基上菌落直徑介于兩者之間(表1)。方差分析表明,該菌在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基和番茄葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基、燕麥片瓊脂培養(yǎng)基和玉米粉瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌落直徑之間差異不顯著，但前兩種培養(yǎng)基和后兩種培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌落直徑之間差異顯著(P<0.05)；晚疫病菌在番茄葡萄糖瓊脂和玉米粉瓊脂培養(yǎng)基上生長最好，3 d后菌落直徑均為6.33 cm，燕麥片瓊脂培養(yǎng)基生長最慢，菌落直徑均為0.53 cm，馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上的介于這兩者之間；該菌除了在玉米粉瓊脂和番茄葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上的菌落直徑差異不顯著外，在其他培養(yǎng)基上培養(yǎng)的菌落直徑差異極顯著(P<0.05)。

2.3番茄不同品種對番茄晚疫病抗病性測定

番茄品種對番茄晚疫病抗病性測定結(jié)果表明(表2)，不同接種方式和不同番茄品種對晚疫病的抗性都存在一定差異，其中在有傷接種條件下番茄果實上病斑擴展速度明顯快于無傷接種方式；同一時間，捷美153在有傷、無傷的接種條件下，病斑擴展速度最慢；不同品種，隨著時間的變化病斑擴展速度遞增，其中巨霸發(fā)病最快，4 d后有傷、無傷病斑直徑分別為2.74 cm、1.80 cm；德富次之，4 d后有傷、無傷病斑直徑分別為3.23 cm、1.00 cm；捷美153最慢，4 d后有傷、無傷病斑直徑分別為2.78 cm、1.40 cm。

表1　不同培養(yǎng)基處理下的番茄早疫、晚疫病菌生長

注明：同列不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05),不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)

通過不同番茄品種接種番茄晚疫病菌果實發(fā)病率試驗(表3)，結(jié)果表明同種番茄品種在發(fā)病初期有傷接種均比無傷接種發(fā)病快，比如德富3 d后有傷接種發(fā)病率為100%，3 d無傷接種的發(fā)病率為50%；不同番茄品種，在同一種接種方式下，捷美153均比德富、巨霸發(fā)病率低，有傷接菌初期(1 d、2 d、3 d)，捷美153發(fā)病率分別為0、33.33%、50.00%，發(fā)病率比德富低50.00%、50.00%、50.00%，比巨霸低100.00%、66.67%、50.00%，在后期均發(fā)病。

表2　番茄不同品種接種番茄晚疫病菌后病斑擴展

表3　不同番茄品種接種番茄晚疫病菌果實發(fā)病率

2.4室內(nèi)藥劑篩選

通過室內(nèi)藥劑篩選試驗，結(jié)果表明，不同殺菌劑對番茄早、晚疫病均具有一定的抑制作用，其中4種供試藥劑在推薦濃度下，10%苯醚甲環(huán)唑微乳劑和72%霜脲·錳鋅可濕性粉劑對番茄早疫病菌抑菌效果最好，抑菌率都在98%以上，722 g/L霜霉威鹽酸鹽水劑抑菌率次之，為80.82%，10%烯酰嗎啉水乳劑抑菌效果最差，為26.80%(表4，5)，方差分析表明，10%苯醚甲環(huán)唑ME和72%霜脲·錳鋅WP對該病菌的抑菌率之間差異不顯著，但2種藥劑和其他2種殺菌劑對該病菌的抑菌率之間差異顯著(P<0.05)；72%霜脲·錳鋅可濕性粉劑和10%烯酰嗎啉水乳劑對番茄晚疫病菌抑菌效果最好，抑菌率都在98%以上，而722 g/L霜霉威鹽酸鹽水劑次之，抑菌率為55.67%，10%苯醚甲環(huán)唑微乳劑最差，抑菌率為27.84%，10%烯酰嗎啉EW和72%霜脲·錳鋅WP對該病菌的抑菌率之間差異不顯著，但2種藥劑和其他2種殺菌劑的抑菌率之間差異極顯著(P<0.05)。

表4　4種殺菌劑對番茄早疫病菌抑菌效果

注：同列不同小寫字母表示差異顯著(P<0.01)，不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.05)

3討論與結(jié)論

對番茄晚疫病菌的分離培養(yǎng)在國內(nèi)外早有研究，菜豆、燕麥、V8汁、馬鈴薯等培養(yǎng)基都有培養(yǎng)晚疫病菌的報道，番茄晚疫病菌在這幾種培養(yǎng)基上均可生長，在菜豆、V8汁、馬鈴薯培養(yǎng)基上的生長速度非常緩慢，在燕麥培養(yǎng)基上生長得快一些[16-18]。試驗表明，甘肅省蘭州市皋蘭縣高山村連作田中番茄的主要病害為早疫病和晚疫病，其病原菌分別為茄鏈格孢(Alternariasolani)和致病疫霉菌(Phytophthorainfestans)；番茄早疫、晚疫病病菌在番茄葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長最好；接種不同方式、番茄不同品種對晚疫病的抗性都存在一定差異，其中在有傷接種條件下番茄果實病斑擴展速度明顯快于無傷接種；巨霸最感病，德富次之；捷美153最抗??；室內(nèi)藥劑篩選結(jié)果表明，10%苯醚甲環(huán)唑和72%霜脲·錳鋅對番茄早疫病菌抑菌效果最好，抑菌率分別為100%和98.35%；10%烯酰嗎啉和72%霜脲·錳鋅對番茄晚疫病菌抑菌效果最好，抑菌率分別為98.71%和100%。

番茄早疫、晚疫病是發(fā)生普遍而且較嚴(yán)重的病害,生產(chǎn)中對其主要進行綜合防治,應(yīng)用科學(xué)栽培管理技術(shù),加強田間管理,及時摘除病葉,尤其搞好田園的衛(wèi)生、清理工作,創(chuàng)造適宜番茄生育的生態(tài)環(huán)境,在此基礎(chǔ)上應(yīng)用藥劑防治,來提高防效,收到防病、保產(chǎn)的效果[19-21]。試驗僅對4種培養(yǎng)基對病原菌的培養(yǎng)情況、3種番茄品種的抗病性和4種藥劑對番茄晚疫病的室內(nèi)抑菌作用進行了測定，對于其他培養(yǎng)基、番茄品種和藥劑對病原菌的培養(yǎng)情況、抗病性和抑菌作用等問題及各藥劑的田間防效等問題尚未涉及，有關(guān)這些問題還有待進一步探討。

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Identification on pathogen of two main tomato diseases and fungicides screening in laboratory

LU Zhong-yan,LIANG Qiao-lan,HE Wu-xue

(CollegeofPrataculturalScience,GansuAgriculturalUniversity/KeyLaboratoryofGrasslandEcosystem，MinistryofEducation/PrataculturalEngineeringLaboratoryofGansuProvince/Sino-U.S.CentersforGrazinglandEcosystemSustainability,Lanzhou730070,China)

Abstract：The main tomato diseases in continuous planting field were early blight and late blight by the field survey in Gaoshan Village，Gaolan County of Lanzhou City. The pathogens were identified as Alternaria solani and Phytophthora infestans. Tomato glucose agar medium was the best to culture tomato early and late blight pathogens. The inoculation methods and tomato varieties showed differences on resistance of tomato to late blight. The disease spot on injury fruit expaned faster than that of no injury fruit. Juba was more susceptible to Phytophthora infestans than Defu and Jiemei 153. Jiemei 153 was the best for resisting Phytophthora infestans.The best fungicdes against early blight were 10% difenoconazole and 72% cymoxanic·mancozeb and the inhibition ratios reached 100% and 98.35% respectively；10% dimethomorph and 72% cymoxanic·mancozeb showed the best inhibitory effect to late blight and the inhibition ratios were 98.71% and 100% respectively.

Key words：Alternaria solani;Phytophthora infestans；fungicides screened in laboratory

中圖分類號：S 436.412

文獻標(biāo)識碼：A

文章編號：1009-5500(2016)01-0083-06

作者簡介：盧鐘彥(1989-),男,甘肅武威人，在讀碩士。

基金項目：甘肅省農(nóng)業(yè)綜合開發(fā)項目“皋蘭縣蔬菜優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)栽培技術(shù)示范與推廣(2013)”，皋蘭縣生物農(nóng)藥示范推廣(2014年)資助

收稿日期：2015-03-02； 修回日期：2015-03-23

E-mail：1245376164@qq.com

梁巧蘭為通訊作者。