田培燕　羅國忠鄧祖國　張玉娟　楊小軍　(黔南民族醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校生理教研室，貴州　都勻　558000)

?

白花刺對(duì)糖尿病腎病大鼠的降血糖及腎臟保護(hù)作用

田培燕羅國忠1鄧祖國張玉娟楊小軍(黔南民族醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校生理教研室，貴州都勻558000)

〔摘要〕目的研究白花刺對(duì)糖尿病腎病( DN)大鼠降血糖及腎臟保護(hù)作用。方法2014年9月選擇重慶市中藥研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所供應(yīng)的健康清潔級(jí)雄性SD大鼠60只，從中選擇40只大鼠制作DN大鼠模型，根據(jù)隨機(jī)數(shù)字法分成DN組20只及白花刺治療組20只，另20只正常大鼠為正常對(duì)照組。對(duì)比各組的腎重/體重及血漿、腎組織的超氧化物歧化酶( SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶( GSH－Px)活性水平，及治療前后的血糖和體重，以及尿蛋白、尿素氮( BNU)、尿肌酐( Cr)指標(biāo)水平，分析治療后DN大鼠的腎臟形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果白花刺治療組與DN組的腎重/體重顯著大于正常對(duì)照組，血漿、腎組織的SOD和GSH－Px活性水平顯著低于正常對(duì)照組(均P＜0．05)。同時(shí)，白花刺治療組的腎重/體重顯著小于DN組，血漿、腎組織的SOD和GSH－Px活性水平顯著高于DN組(均P＜0．05)。白花刺治療組與DN組在治療前后的血糖、尿蛋白、BNU及Cr水平均分別顯著高于正常對(duì)照組，兩組治療后的體重顯著低于正常對(duì)照組(均P＜0．05)。白花刺治療組在治療后的血糖、尿蛋白、BNU及Cr水平均分別顯著低于DN組，體重顯著高于DN組(均P＜0．05)。利用白花刺治療后DN大鼠后，經(jīng)光鏡和電鏡顯示其腎臟形態(tài)學(xué)變化較正常對(duì)照組不明顯。結(jié)論白花刺對(duì)于DN大鼠具有一定的降血糖功能，還可發(fā)揮腎臟保護(hù)作用，效果明顯，值得深入研究。

〔關(guān)鍵詞〕白花刺;糖尿病大鼠;降血糖;腎臟保護(hù)作用

1黔南州中醫(yī)院病理科

第一作者:田培燕( 1970－)，女，副教授，主要從事內(nèi)分泌代謝基礎(chǔ)與臨床、體質(zhì)人類學(xué)方面的研究。

糖尿病腎病( DN)發(fā)病機(jī)制比較復(fù)雜，可能是由于多因素的共同作用而導(dǎo)致，而自由基的作用相對(duì)更為明顯〔1〕。Kandasamy等〔2，3〕亦指出，未發(fā)生腎臟形態(tài)學(xué)變化的糖尿病早期時(shí)，腎臟超氧化物歧化酶( SOD)及谷胱甘肽過氧化物酶( GSHPx)活性即已明顯下降，此時(shí)，自由基代謝趨于紊亂，機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化進(jìn)程加速，最終損傷基底膜，致使腎功能障礙。白花刺作為一種中藥材，其對(duì)抗氧自由基作用越來越受到學(xué)者重視，本文通過分析其對(duì)于糖尿病大鼠產(chǎn)生的降血糖以及腎臟保護(hù)作用，旨在尋找防治DN的潛在藥物。

1材料和方法

1. 1一般資料2014年9月選擇重慶市中藥研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所供應(yīng)的健康清潔級(jí)雄性SD大鼠60只〔批號(hào): SCXK(渝)〕，體重150～200 g，平均( 183．6±11．4) g。從中選擇40只大鼠制作DN大鼠模型，將大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)5 d后，用0．01%檸檬酸－檸檬酸鈉緩沖液( pH4．5)將STZ配成5%的溶液，按55 mg/kg的劑量尾靜脈注射，正常對(duì)照組注射檸檬酸－檸檬酸鈉緩沖液，每只注射0．25 ml，48 h后尾靜脈采血測空腹血糖，血糖值≥16．7 mmol/L為造模成功。另20只正常大鼠則注射等量的生理鹽水。1 w后，自大鼠尾靜脈采血并檢測血糖水平，40 只DN大鼠模型的空腹血糖水平均＞16．7 mmol/L。將40只DN大鼠模型根據(jù)數(shù)字法分成DN組20只及白花刺治療組20只，另20只正常大鼠為正常對(duì)照組。各組均常規(guī)喂食，不應(yīng)用胰島素，在體重及日常喂養(yǎng)方面，均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異( P＞0．05)，有可比性。

1. 2研究方法將白花刺干燥后，打碎，適量水量煎煮，過濾，藥渣加水煎煮，過濾，合并兩次提取液進(jìn)行濃縮至濃度為0．35 mmol/L，保存?zhèn)溆谩０谆ù讨委熃M給予120 mg·kg－1·d－1灌胃治療8 w。DN組及正常對(duì)照組予以等量生理鹽水灌胃處理8 w，期間各組均常規(guī)飼養(yǎng)。治療第8周后，通過代謝籠采集24 h尿液樣本，稱重之后股動(dòng)脈穿刺取血將所有大鼠斷頭處死，將其一側(cè)腎臟取出，并除去包膜稱重，采集3～5塊1 mm× 1 mm的腎皮質(zhì)，經(jīng)生理鹽水沖洗、磷酸鹽緩沖液進(jìn)行沖洗，再利用4%甲醛固定1．25%的戊二醛液進(jìn)行固定，行光電鏡檢查。其中血糖檢測通過德國保靈曼公司生產(chǎn)的快速血糖儀操作，尿蛋白檢測使用MA－4210尿液分析儀測定，尿素氮( BNU)使用酶耦聯(lián)速率法測定，尿肌酐( Cr)通過苦味酸法檢測，而血漿及腎組織勻漿SOD活性通過鄰苯三酚氧化法檢測，GSH－Px通過硫代巴比妥酸比色法檢測。

1. 3觀察指標(biāo)對(duì)比各組糖尿病大鼠在治療前后的腎重/體重及血漿、腎組織的SOD和GSH－Px活性水平，治療前后的血糖和體重以及尿蛋白、BNU、Cr指標(biāo)水平，分析治療后糖尿病大鼠的腎臟形態(tài)學(xué)變化。

1. 4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS13．0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2. 1各組治療后的腎重/體重及血漿、腎組織的SOD和GSHPx活性水平對(duì)比白花刺治療組與DN組的腎重/體重顯著大于正常對(duì)照組，血漿、腎組織的SOD和GSH－Px活性水平顯著低于正常對(duì)照組(均P＜0．05)。同時(shí)，白花刺治療組的腎重/體重顯著小于DN組，血漿、腎組織的SOD和GSH－Px活性水平顯著高于DN組(均P＜0．05)，見表1。

2. 2各組治療前后的血糖、體重及尿蛋白、BNU、Cr指標(biāo)水平對(duì)比白花刺治療組與DN組在治療前后的血糖、尿蛋白、BNU 及Cr水平均分別顯著高于正常對(duì)照組，兩組治療后的體重顯著低于正常對(duì)照組(均P＜0．05)。白花刺治療組與DN組在治療前的血糖、體重及尿蛋白、BNU、Cr等指標(biāo)水平相比，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異( P＞0．05)。白花刺治療組在治療后的血糖、尿蛋白、BNU及Cr水平均分別顯著低于DN組，體重顯著高于DN組(均P＜0．05)，見表2，表3。

2. 3治療后糖尿病大鼠的腎臟形態(tài)學(xué)變化分析治療后經(jīng)光鏡檢查結(jié)果顯示，DN組大鼠的腎小球體積較正常對(duì)照組普遍更大，而白花刺治療組則介于DN組及正常對(duì)照組之間。DN組大鼠的系膜細(xì)胞及基質(zhì)細(xì)胞增多，但白花刺治療組則與正常對(duì)照組相比差異不大。電鏡檢查結(jié)果顯示，DN組腎小球基底膜發(fā)生彌漫性增厚，且系膜區(qū)擴(kuò)大，白花刺治療組發(fā)生輕度的系膜增生，且基底膜增厚并不明顯，較正常對(duì)照組差異不明顯。

表1各組腎重/體重以及血漿、腎組織的SOD和GSH-Px活性水平對(duì)比(±s，n=20)

表1各組腎重/體重以及血漿、腎組織的SOD和GSH-Px活性水平對(duì)比(±s，n=20)

與正常對(duì)照組比較: 1) P＜0．05;與DN組比較: 2) P＜0．05;下表同

組別　　腎重/體重(×10－3)血漿( IU/ml)腎組織( IU/100 mg) SOD　GSH－Px SOD　GSH－Px正常對(duì)照組　6．1±1．4　30．9±5．4　49．6±2．4　28．7±3．5　43．7±3．7 DN組　10．9±1．81)　15．3±4．81)　29．8±4．11)　11．9±3．41)　24．8±2．61)白花刺治療組　8．4±0．61) 2)　25．1±3．61) 2)　40．4±5．31) 2)　21．6±4．31) 2)　37．8±1．81) 2)

表2各組治療前后的BUN、Cr等指標(biāo)水平對(duì)比(±s，n=20)

表2各組治療前后的BUN、Cr等指標(biāo)水平對(duì)比(±s，n=20)

組別　　尿蛋白( mg/24 h)BUN( mmol/L)Cr( mmol/L)治療前　　治療后　治療前　　治療后　治療前　　治療后正常對(duì)照組　3．1±1．4　3．1±1．4　6．3±0．5　6．3±0．5　84．6±12．3　84．6±12．3 DN組　22．3±11．71)　19．7±13．21)　25．8±2．41)　23．3±5．11)　168．2±15．41)　156．4±20．21)白花刺治療組　21．9±10．51)　9．5±2．61) 2)　25．6±3．11)　19．7±3．31) 2)　169．1±12．31)　132．3±12．61) 2)

表3各組治療前后血糖、體重比較(±s，n=20)

表3各組治療前后血糖、體重比較(±s，n=20)

組別　　血糖( mmol/L)體重( g)治療前　　治療后　治療前　　治療后正常對(duì)照組　7．5±2．5　 7．5±2．5　 300．6±23．7 300．6±23．7 DN組　28．3±2．71)　26．2±4．61)298．9±15．6 204．9±32．51)白花刺治療組28．5±3．21)23．7±2．71) 2)302．4±21．2277．6±27．41) 2)

3討論

臨床上，DN通常是糖尿病的一種常見微血管并發(fā)癥，具有高達(dá)45%的發(fā)病率〔4〕。而若糖尿病患者發(fā)生腎小球基底膜的增厚及系膜區(qū)等處細(xì)胞外基質(zhì)增厚等相關(guān)病理改變，往往預(yù)示著病情已難以逆轉(zhuǎn)，甚至是導(dǎo)致患者死亡的重要誘因〔5〕。加之DN發(fā)病機(jī)制至今尚未完全明晰，且無理想治療措施，缺乏藥效針對(duì)性強(qiáng)的藥物，因此，尋找對(duì)DN疾病更為有效的藥物已成為臨床重點(diǎn)關(guān)注的課題之一。近年來，隨著國內(nèi)學(xué)者對(duì)祖國醫(yī)學(xué)的深入了解，傳統(tǒng)中藥材的降血糖作用已越來越廣泛地應(yīng)用于臨床治療過程中〔6〕。本研究結(jié)果提示DN大鼠的腎功能已發(fā)生一定程度的損害，雖經(jīng)過白花刺等藥物治療，較正常大鼠的腎功能仍有差距。同時(shí)，經(jīng)過白花刺治療后的DN大鼠其腎臟功能有所恢復(fù)，亦提示了白花刺對(duì)于DN大鼠的腎臟具有較大的保護(hù)作用，其提升了大鼠的血漿和腎臟的抗氧化活性，緩解了大鼠自由基代謝的紊亂狀態(tài)，并抑制脂質(zhì)的過氧化進(jìn)程，最終抑制了基底膜增厚和系膜增生，有效避免病情進(jìn)一步發(fā)展而造成的腎臟損害〔7，8〕。此外，本研究結(jié)果還表明對(duì)DN大鼠實(shí)施白花刺治療，具有效果一定的降血糖作用，同時(shí)還可改善DN大鼠的腎功能指標(biāo)水平。究其原因，筆者認(rèn)為這主要是白花刺中富含維生素C、B2、B3、B6、D3以及β－胡蘿卜素等物質(zhì)，均為有效的抗氧化劑，能夠較好地對(duì)抗氧自由基，抑制機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)的過氧化，強(qiáng)化免疫系統(tǒng)功能，提升抵抗力，還可轉(zhuǎn)化為維生素A，有效保持器官內(nèi)腔黏膜的正常功能，增強(qiáng)泌尿系統(tǒng)的相關(guān)功能〔9，10〕。本研究結(jié)果提示應(yīng)用白花刺治療DN時(shí)可聯(lián)用其他如胰島素等降糖藥物，從而獲得最佳療效。此外，白花刺可以較好地延緩DN大鼠的DN進(jìn)展〔11〕。Zhou等〔12〕報(bào)道，利用白花刺提取物對(duì)糖尿病實(shí)驗(yàn)大鼠進(jìn)行處理，能獲得較好的防治DN的作用，與本文的報(bào)道基本一致。

4參考文獻(xiàn)

1王曉靜，秦貴軍，王芳，等．骨化三醇對(duì)糖尿病大鼠腎臟白細(xì)胞介素17表達(dá)的影響〔J〕．中華糖尿病雜志，2014; 6( 4) : 255－9．

2 Kandasamy N，Ashokkumar N．Renoprotective effect of myricetin restrains dyslipidemia and renal mesangial cell proliferation by the suppression of sterol regulatory element binding proteins in an experimental model of diabetic nephropathy〔J〕．Eur J Pharmacol，2014; 15( 743) : 53－62．

3王艷，李柯楨，宋起，等．厄貝沙坦對(duì)血管生成素樣蛋白2在糖尿病大鼠腎臟表達(dá)的影響〔J〕．中華腎臟病雜志，2014; 30( 8) : 609－13．

4 Parvizi MR，Parviz M，Tavangar SM，et al．Protective effect of magnesium on renal function in STZ－induced diabetic rats〔J〕．J Diabetes Metab Disord，2014; 13( 1) : 84－5．

5趙曉露，謝淑華，潘慶軍，等．蟬花對(duì)糖尿病大鼠腎小球沉默信息調(diào)節(jié)因子1表達(dá)的影響〔J〕．中華實(shí)用診斷與治療雜志，2014; 28( 12) : 1168－71．

6馬海建，巫冠中．糖尿病腎病發(fā)病分子機(jī)制〔J〕．現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2014; 14( 16) : 3184－7．

7馬丹，謝曉娜，鄒敬韜，等．黃芪注射液對(duì)糖尿病大鼠腎臟的保護(hù)作用及其機(jī)制〔J〕．吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2014; 40( 2) : 271－5．

8王自潤，張慧宇，郭敏芳，等．糖克煎劑對(duì)糖尿病大鼠腎保護(hù)作用及TGF－β1/smad4表達(dá)的影響〔J〕．中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2014; 34( 7) : 826－32．

9匡蕾，葉山東，邢燕，等．吡格列酮對(duì)糖尿病大鼠足細(xì)胞的保護(hù)作用〔J〕．中華全科醫(yī)學(xué)，2013; 11( 7) : 999－1000．

10 Peng T，Wang J，Zhen J，et al．Effect of benazepril on the transdifferentiation of renal tubular epithelial cells from diabetic rats〔J〕．Biomed Rep，2014; 2( 4) : 490－4．

11 Hartner A，Cordasic N，Klanke B，et al．Renal protection by low dose irbesartan in diabetic nephropathy is paralleled by a reduction of inflammation，not of endoplasmic reticulum stress〔J〕．Biochim Biophys Acta，2014; 1842( 4) : 558－65．

12 Zhou Y，Wang F，Hao L，et al．Effects of magnoline on P－selectin's expression in diabetic rats and its reno－protection〔J〕．Kidney Blood Press Res，2013; 37( 2－3) : 211－20．

〔2015－03－26修回〕

(編輯李相軍)

基金項(xiàng)目:黔南民族醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)?？蒲谢? No．QNYZ2O13－14)

〔中圖分類號(hào)〕R587. 1

〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

〔文章編號(hào)〕1005-9202( 2016) 02-0301-03;

doi:10. 3969/j. issn. 1005-9202. 2016. 02. 022