梁寶權(quán)，侯順玉，金蘊(yùn)潔

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬蘇州醫(yī)院，江蘇蘇州215000)

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細(xì)胞色素P450基因多態(tài)性與宮頸上皮內(nèi)瘤變遺傳易感性的關(guān)系

梁寶權(quán)，侯順玉，金蘊(yùn)潔

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬蘇州醫(yī)院，江蘇蘇州215000)

目的探討細(xì)胞色素P450基因多態(tài)性與宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)遺傳易感性的關(guān)系。方法用等位基因特異性PCR方法檢測100例CIN患者(觀察組)和100例健康體檢者(對照組)的CYP1A1 Exon7位點多態(tài)性。結(jié)果對照組和觀察組的CYP1A1 Exon7基因多態(tài)性為野生基因型、雜合型、突變型基因型頻率分別為48%、37%、15%和29%、48%、23%。觀察組雜合型和突變型基因頻率高于對照組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。觀察組雜合型+突變型的基因頻率高于對照組(P<0.05)。結(jié)論細(xì)胞色素P450的Exon7基因多態(tài)性是CIN的危險因素，有可能成為CIN遺傳易感標(biāo)記物。

宮頸上皮內(nèi)瘤變；細(xì)胞色素P450；基因多態(tài)性；遺傳易感性

宮頸癌居女性癌癥病死率第2位[1]。全世界每年約有50萬人罹患宮頸癌，30萬患者死亡，其中80%發(fā)生在發(fā)展中國家[2]。宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)是宮頸癌前病變，探討CIN的易感性有助于早期發(fā)現(xiàn)高?；颊?，及早干預(yù)。細(xì)胞色素P450(CYP450)以膜蛋白的形式存在于生物體的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上，是混合功能氧化酶系統(tǒng)的末端氧化酶，影響內(nèi)源性和外源性物質(zhì)代謝，與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。CYP1A1 Exon7基因作為編碼CYP450蛋白的基因，其基因的多態(tài)性決定了CYP450蛋白的活性與功能。CYP1A1 Exon7基因多態(tài)性包括野生型(IIe/IIe)、雜合型(IIe/Val)、突變型(Val/Val),已有報道其與胃癌、乳腺癌等的易感性相關(guān)[4]，但其與宮頸病變關(guān)系的研究少見。2013年9月～2014年9月，我們觀察了CIN患者CYP1A1 Exon7位點多態(tài)性與CIN遺傳易感性的關(guān)系。

1　資料與方法

1.1臨床資料收集南京醫(yī)科大學(xué)附屬蘇州醫(yī)院初診CIN患者100例(觀察組)，年齡25～48歲，中位年齡38歲。均經(jīng)病理學(xué)檢查確診，其中CINⅠ級12例、Ⅱ級68例、Ⅲ級20例。選擇同期健康體檢者100例作為對照組，兩組年齡具有可比性。

1.2檢測方法采集受試者外周靜脈血5 mL，EDTA抗凝，4 ℃保存。使用血液基因組DNA提取試劑盒提取DNA，采取等位基因特異性PCR方法(ASA-PCR)檢測Exon7位點多態(tài)性。反應(yīng)引物序列：公共引物：5′-AGACTGCACCTTCGACTGTCT-3′；IIe引物：5′-AAGACCCTCCAGCGGGCAAT-3′；Val引物：5′-AAGACCCTCCAGCGGGCAAC-3′。PCR擴(kuò)增體系終體積均為50 μL，反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性2 min，94 ℃變性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共30個循環(huán)，72 ℃延伸10 min，4 ℃保存。將PCR產(chǎn)物用2%瓊脂糖凝膠電泳，經(jīng)EB染色后在紫外燈凝膠成像儀上。IIe/IIe、IIe/Val、Val/Val基因型擴(kuò)增條帶長度均為210 bp。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件。率的比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

兩組CYP1A1 Exon7基因IIe/IIe、IIe/Val、Val/Val基因型頻率分別為48%、37%、15%和29%、48%、23%。觀察組IIe/Val和Val/Val基因頻率分別高于對照組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。合并IIe/Val和Val/Val后，觀察組IIe/Val+Val/Val基因頻率高于對照組(P<0.05)。

3　討論

惡性腫瘤的發(fā)生是多種因素共同作用的結(jié)果，不同個體在相同的致癌環(huán)境作用下并非都患腫瘤，這種差異性被稱為腫瘤易感性。不同人群對外源性致癌物代謝能力的差異性可造成腫瘤易感性的不同。CYP450是廣泛存在于動植物和微生物體內(nèi)的代謝酶系，因其可在還原狀態(tài)下與CO結(jié)合并在450 mm有特殊吸收光譜而命名。該酶具有廣泛的底物特異性和多樣性，可催化體內(nèi)各種藥物、化學(xué)毒物以及具有重要生理功能的內(nèi)源性物質(zhì)的生物轉(zhuǎn)化。CYP450主要是以膜蛋白的形式存在于生物體的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上，是混合功能氧化酶系統(tǒng)的末端氧化酶，影響內(nèi)源性和外源性物質(zhì)代謝[5]。目前約有300余種同工酶cDNA被克隆和測序，并廣泛表達(dá)。CPY450基因多態(tài)性的表象差異與基因缺失、單核苷酸多態(tài)性、基因重復(fù)等導(dǎo)致酶活性的個體差異有關(guān)，使得個體在腫瘤易感性的藥物毒性反應(yīng)上有不同的結(jié)局。目前已證實，CYP1A1、CYP1A2、CYP1B1、CYP2A6、CYP2C9、CYP2C19等基因存在多態(tài)性，并且特定代謝酶的表型在不同地區(qū)、不同種族、不同人群中的分布不同[6]。目前對基因多態(tài)性的研究多集中在CYP1A1 3′末端Msp1基因多態(tài)和Exon7(第7外顯子)中A到G的點突變上，這兩種基因已被證實與多種腫瘤的易感性密切相關(guān)，CYP450基因多態(tài)性可能促進(jìn)腫瘤的發(fā)生[7，8]。研究發(fā)現(xiàn)，CYP1A1是參與雌激素代謝的關(guān)鍵酶之一，將雌激素代謝生成的代謝產(chǎn)物兒茶酚胺進(jìn)一步氧化成不穩(wěn)定的苯醌，從而引起細(xì)胞DNA的損傷[9]。1997年Esteller等[10]在研究CYP1A1與子宮內(nèi)膜癌的關(guān)系中發(fā)現(xiàn)，Exon7基因位點的密碼子461和462同時發(fā)現(xiàn)突變時，罹患子宮內(nèi)膜癌的概率明顯升高。Esinler等[11]報道，IIe/Val基因型患者，子宮內(nèi)膜異常增生的概率是IIe/IIe基因型的5倍，而子宮內(nèi)膜異常增生患者的Val突變頻率更高(IIe/Val和Val/Val)，認(rèn)為攜帶Val等位基因更易引起病變。Seremak-Mrozikiewicz等[12]對71例波蘭子宮內(nèi)膜癌患者進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)CYP1A1等位基因在癌癥患者中過度表達(dá)，認(rèn)為基因突變引起CYP1A1代謝活性的改變可能是引起腫瘤的重要因素。

本研究觀察了CYP1A1 Exon7位點多態(tài)性與CIN的關(guān)系，結(jié)果顯示觀察組Exon7基因頻率以IIe/Val和Val/Val為主，明顯多于對照組；兩組IIe/Val+Val/Val所占比例高于IIe/IIe所占比例。提示Exon7多態(tài)性與CIN遺傳易感性可能有關(guān)，與國內(nèi)報道[13]一致。因CIN是子宮頸癌癌前病變，但并不是CIN均會發(fā)展為子宮頸癌，其發(fā)病與患者之間的個體差異、疾病易感性相關(guān)。有報道認(rèn)為，Exon7 A到G的點突變上不但能提高CYP1A1酶活性，而且能提高酶誘導(dǎo)性。本研究還發(fā)現(xiàn)，觀察組Exon7的雜合型和突變型頻率較對照組增多，但無統(tǒng)計學(xué)差異。我們將以此為線索，增大樣本量繼續(xù)深入研究。

[1] Chan PK, Chang AR, Cheung JL, et al. Determinants of cervical human papillomavirus infection: differences between high- and low-oncogenic risk types[J]. J Infect Dis, 2002,185(1):28-35.

[2] Forman D, de Martel C, Lacey CJ, et al. Global burden of human papillomavirus and related diseases[J]. Vaccine, 2012,30(Suppl 5):F12-F23.

[3] Vaccarella S, Lortet-Tieulent J, Plummer M, et al. Worldwide trends in cervical cancer incidence: impact of screening against changes in disease risk factors[J]. Eur J Cancer, 2013,49(15):3262-3273.

[4] Agorastos T, Papadopoulos N, Lambropoulos AF, et al. Glutathione-S-transferase M1 and T1 and cytochrome P1A1 genetic polymorphisms and susceptibiliy to cervical intraepithelial neoplasia in Greek women[J]. Eur J Cancer Prev, 2007,16(6):498-504.

[5] Ahn T, Yun CH. Molecular mechanisms regulating the mitochondrial targeting of microsomal cytochrome P450enzymes[J]. Curr Drug Metab, 2010,11(10):830-839.

[6] 黃聰,黃毅,石欣,等.細(xì)胞色素P450:腫瘤研究中的新熱點[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2011,11(8):1591-1593.

[7] 劉群,劉杰,宋寶,等.CYP1A1、GSTM1基因多態(tài)性與肺癌遺傳易感性的關(guān)系[J].山東醫(yī)藥,2008,48(9):32-34.

[8] Singh N, Mitra AK, Kumar V, et al. Association of CYP1A1 polymorphisms with breast cancer in north Indian women[J]. Oncol Res, 2008,16(12):587-597.

[9] 周小華,韓曉.AhR途徑、CYP1A1、CYP1B1、雌激素代謝及作用過程的調(diào)節(jié)[J].醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志，2005,2(3):236-239.

[10] Esteller M, Garcia A, Martinez-Palones JM, et al. Germ line polymorphisms in cytochrome-P450 1A1(CA887 CYP1A1)and methlenetetrahydrofolate reduetase(MTHFR)genes and endometrial cancer susceptibility[J]. Carcinogenesis, 1997,18(12):2307-2311．

[11] Esinler I, Aktas D, Alikasifoglu M, et al. CYP1A1 gene polymorphism and risk of endometrial hyperplasia and endometrial carcinoma[J]. J Gynecol Cancer, 2006,16(3):1407-1411.

[12] Seremak-Mrozikiewicz A, Drews K, Semczuk A, et al. CYP1A1 alleles in female genital cancers in the Polish population[J]. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol, 2005,118(2):246-250.

[13] 石玉榮,耿建,章堯,等.細(xì)胞色素P4501A1基因多態(tài)性與宮頸癌的相關(guān)性[J].復(fù)旦學(xué)報醫(yī)學(xué)版,2011,38(5):428-431.

江蘇省蘇州市科教興衛(wèi)青年科技項目資助(SWKQ1024)；江蘇省蘇州市臨床重點病種診療技術(shù)專項項目(LCZX201410)。

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.22.031

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1002-266X(2016)22-0081-02

2015-10-06)