王巍煒，胡早秀，王德光，張勇

(昆明醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院，昆明650118)

?

云南宣威地區(qū)與其他地區(qū)肺腺癌患者腫瘤組織中ERCC1表達(dá)比較

王巍煒，胡早秀，王德光，張勇

(昆明醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院，昆明650118)

目的 比較云南宣威地區(qū)與其他地區(qū)肺腺癌患者腫瘤組織中核苷酸切除修復(fù)交叉互補(bǔ)組基因1(ERCC1)表達(dá)的差異。方法選擇62例云南宣威地區(qū)肺腺癌患者(觀察組)和87例云南非宣威地區(qū)肺腺癌患者(對照組)，取手術(shù)切除的腫瘤組織標(biāo)本，采用免疫組化方法檢測肺腺癌組織中ERCC1表達(dá)。結(jié)果觀察組與對照組腫瘤組織中ERCC1蛋白表達(dá)的陽性率分別為75.8%、29.9%，觀察組高于對照組(P<0.01)；兩組腫瘤組織中ERCC陽性細(xì)胞的灰度值分別為63±15.8、117±19.4，觀察組低于對照組(P<0.01)。結(jié)論云南宣威地區(qū)肺腺癌患者較其他地區(qū)腫瘤組織中ERCC1呈高表達(dá)。

肺腺癌；核苷酸切除修復(fù)交叉互補(bǔ)組基因1；腫瘤耐藥；云南宣威

肺癌是目前發(fā)病率和病死率最高的惡性腫瘤。我國云南省宣威地區(qū)是世界肺癌高發(fā)地區(qū)之一，其中高發(fā)人群多為農(nóng)村患者，組織學(xué)類型以肺腺癌最常見[1，2]。順鉑是肺癌化療的標(biāo)準(zhǔn)一線用藥之一，然而當(dāng)核苷酸切除修復(fù)交叉互補(bǔ)組基因1(ERCC1)高表達(dá)時(shí)，細(xì)胞容易修復(fù)順鉑所致的DNA損傷，表現(xiàn)為腫瘤耐藥[3，4]。2010年5月～2015年5月，我們對云南宣威地區(qū)與其他地區(qū)肺腺癌患者腫瘤組織中ERCC1的表達(dá)情況進(jìn)行比較。現(xiàn)報(bào)告如下。

1　資料與方法

1.1臨床資料選擇2010年5月～2015年5月在我院接受肺癌根治術(shù)治療的151例患者，均經(jīng)病理檢查證實(shí)為原發(fā)性肺腺癌。其中云南宣威地區(qū)患者64例(觀察組)，男31例、女33例，中位年齡66歲，按照AJCC 2014版肺癌分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ期29例、Ⅱ期35例；云南非宣威地區(qū)患者87例(對照組)，男41例、女46例，中位年齡64歲，肺癌分期Ⅰ期39例、Ⅱ期48例。兩組性別、年齡、腫瘤病理分期具有可比性。

1.2檢測方法取手術(shù)切除的腫瘤組織標(biāo)本，甲醛固定，石蠟包埋。SP免疫組化法染色，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，梯度乙醇干燥，二甲苯透明，以已知陽性切片作為陽性對照，以PBS代替一抗作陰性對照。ERCC1鼠抗人單克隆抗體為美國Labvision生物公司生產(chǎn)?？贵w稀釋度為1∶120，抗原修復(fù)采用檸檬酸緩沖液微波修復(fù)。以已知陽性胃癌片作為陽性對照，以PBS代替一抗作陰性對照。應(yīng)用HPIAS-1000高清晰病理圖像分析系統(tǒng)對免疫組化結(jié)果進(jìn)行分析。以細(xì)胞核呈棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞，每張切片隨機(jī)選取10個(gè)高倍視野，計(jì)數(shù)每個(gè)視野中ERCC1表達(dá)呈陽性的腫瘤細(xì)胞數(shù)和該視野下腫瘤細(xì)胞總數(shù)，計(jì)算腫瘤細(xì)胞ERCC1陽性表達(dá)率。使用HPIAS-1000高清晰病理圖像分析系統(tǒng)測定每張切片陽性細(xì)胞的灰度值，計(jì)算平均灰度。平均灰度值越高提示其表達(dá)越弱。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS13.5統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

ERCC1陽性表達(dá)主要定位于細(xì)胞核，呈棕黃色顆粒狀。151例云南肺腺癌標(biāo)本中ERCC1陽性表達(dá)73例，陽性表達(dá)率為48.3%。其中觀察組陽性表達(dá)47例，陽性表達(dá)率為73.4%；對照組為26例、29.9%。兩組陽性表達(dá)率比較，P<0.05。兩組平均灰度分別為63±15.8、117±19.4，組間比較P<0.05。

3　討論

順鉑作為一種非特異性細(xì)胞周期藥物，可作用于肺癌細(xì)胞周期的各個(gè)階段，尤其是在DNA合成期和有絲分裂期其作用更強(qiáng)[5]。因此，順鉑聯(lián)合第三代化療藥物對晚期非小細(xì)胞肺癌進(jìn)行治療已經(jīng)成為標(biāo)準(zhǔn)的一線治療方案[6，7]。然而，仍有部分患者對鉑類表現(xiàn)為原發(fā)性和繼發(fā)性的耐藥。研究顯示，腫瘤細(xì)胞過強(qiáng)的DNA損傷修復(fù)與腫瘤耐藥形成有關(guān)，核酸切除修復(fù)(NER)是DNA損傷修復(fù)的重要途徑。順鉑主要通過和細(xì)胞DNA雙鏈偶合形成加合物或形成鏈間交叉連接而損傷DNA，進(jìn)而誘導(dǎo)凋亡，殺滅腫瘤細(xì)胞。而ERCC1在NER途徑中起著DNA損傷識別和鏈間切割的關(guān)鍵作用?；A(chǔ)研究表明，將敲除ERCC1基因的肺癌細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，該細(xì)胞不能修復(fù)順鉑所致的DNA損傷[8，9]。臨床研究也證實(shí)，當(dāng)肺癌組織中ERCC1表達(dá)過強(qiáng)時(shí)，采用順鉑為基礎(chǔ)的化療聯(lián)合方案療效較差[10～12]。

宣威地區(qū)作為世界肺癌點(diǎn)狀高發(fā)區(qū)域，前期研究已發(fā)現(xiàn)其在致病因素、遺傳易感性等諸多方面有自身的特點(diǎn)。在宣威地區(qū)煤層中發(fā)現(xiàn)了高致癌的納米級石英，這種納米級石英具有放射性，樹鼩極易被其誘導(dǎo)患肺癌[13]。而在前期研究中也發(fā)現(xiàn)，宣威地區(qū)患者中制止細(xì)胞凋亡蛋白家族中的生存素也呈現(xiàn)出高表達(dá)的狀態(tài)，提示宣威地區(qū)患者可能在基因方面存在易感性[14，15]。本研究顯示，不論是宣威地區(qū)還是非宣威地區(qū)的肺腺癌患者，都存在不同程度的ERCC1蛋白表達(dá)；宣威地區(qū)肺腺癌患者ERCC1表達(dá)陽性率明顯高于非宣威地區(qū)肺腺癌患者。提示我們在宣威肺腺癌患者的治療策略選擇上要多加考慮，特別是在目前以表皮生長因子接受器的酪氨酸激酶抑制劑為代表的靶向藥物取得良好效果的時(shí)候[16]。對于ERCC1表達(dá)陽性、EGFR突變表達(dá)也為陽性的患者，如果一線治療仍然采用傳統(tǒng)的鉑類聯(lián)合第三代化療藥物，可能因耐藥造成療效不佳，那么一線使用TKI治療應(yīng)該能取得更好的療效。對于ERCC1表達(dá)陽性的肺腺癌患者，采用培美曲塞聯(lián)合非鉑藥物治療能否取得更好的治療效果也值得進(jìn)一步研究證實(shí)。

綜上所述，宣威地區(qū)肺腺癌患者中ERCC1呈現(xiàn)高表達(dá)，導(dǎo)致了鉑類藥物的耐藥。提示我們在制定這類患者的治療策略時(shí)要給予更高的關(guān)注。

[1] 唐睿珠,雷雨,李繼梅,等.HLA-A*02等位基因與云南宣威肺癌相關(guān)性研究[J].中國免疫學(xué)雜志,2010,26(7):624-626.

[2] 黃云超,趙光強(qiáng),肖一澤,等.云南肺癌高發(fā)地區(qū)肺癌死亡趨勢分析[J].腫瘤防治研究,2011,38(1):98-103.

[3] Olaussen KA, Dunant A, Fouret P, et al. DNA repair by ERCC1 in non-small-cell lung cancer and cisplatin-based adjuvant chemotherapy[J]. N Engl J Med, 2006,355(10):983-991.

[4] Tan DS, Ng QS, Tan IB, et al. Truth about ERCC1 in lung cancer[J]. J Clin Oncol, 2010,28(10):e162.

[5] 彭錚,史惠蓉,謝婭,等.二甲雙胍通過抑制p38MAPK信號通路逆轉(zhuǎn)卵巢癌細(xì)胞對順鉑的耐藥性[J].腫瘤,2015,35(2):129-137.

[6] Matsui K, Hirashima T, Nitta T, et al. A phase Ⅰ/Ⅱ study comparing regimen schedules of gemcitabine and docetaxel in Japanese patients with stage ⅢB/Ⅳ non-small cell lung cancer[J]. Jpn Clin Oncol, 2005,35(4):181-187.

[7] 江濱,陳書長.抗腫瘤藥物臨床應(yīng)用指南[M].北京:中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社,2005:679.

[8] Bernstein C, Bernstein H, Payne CM, et al. DNA repair pro-apop totic dual-role p roteins in five major DNA repair pathways: fail-safe protection against carcinogenesis[J]. Mutat Res, 2002,511(2):1452178.

[9] Perez-Oliva AB, Lachaud C, Szyniarowski P, et al. USP45 deubiquitylase controls ERCC1-XPF endonuclease-mediated DNA damage responses[J]. Embo J, 2015,34(3):326-343.

[10] 王巍煒,李高峰,巫正偉,等.ERCC1表達(dá)在Ⅲ期非小細(xì)胞肺癌含鉑方案新輔助化療中的意義[J].山東醫(yī)藥,2009,49(52):3-5.

[11] Holm B, Mellemgaard A, Skov T, et al. Different impact of excision repair cross-complementation group 1 on survival in male and female patients with inoperable non-small-cell lung cancer treated with carboplatin and gemcitabine[J]. J Clin Oncol, 2009,27(26):4254-4259.

[12] Bepler G, Williams C, Schell MJ, et al. Randomized international phase III trial of ERCC1 and RRM1 expression-based chemotherapy versus gemcitabine/carboplatin in advanced non-small-cell lung cancer[J]. J Clin Oncol, 2013,31(19):2404-2412.

[13] 陳小波,賀猛,李光劍,等.宣威煙煤粉塵誘發(fā)樹鼩支氣管黏膜上皮改變的研究[J].中國肺癌雜志,2015,18(8):469-474.

[14] 任永永,孔祥陽,伍超群,等.宣威肺癌的致病環(huán)境因子研究和診治進(jìn)展[J].腫瘤,2015,35(4):467-472.

[15] 王巍煒,李高峰,洪志鵬,等.宣威昆明兩地區(qū)肺腺癌中survivin表達(dá)的比較研究[J].醫(yī)學(xué)研究雜志,2010,39(7):61-62.

[16] Mok TS, Wu YL, Thongprasert S, et al. Gefitinib or carboplatinpaclitaxel in pulmonary adenocarcinoma[J]. N Engl J Med, 2009,361(10):947-957.

云南省科技廳-昆明醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合專項(xiàng)基金(2013FB164)；昆明醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院博士研究基金(BS55201510)。

張勇(E-mail: zhangyonghh@126.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.22.025

R734.2

B

1002-266X(2016)22-0067-02

2015-12-19)