唐德智

南寧食品藥品檢驗(yàn)所，廣西　南寧　530001

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HPLC法測定正胃片中沒食子酸及橙皮苷的含量

唐德智

南寧食品藥品檢驗(yàn)所，廣西南寧530001

【摘要】目的：建立同時(shí)測定正胃片中沒食子酸、橙皮苷含量的HPLC方法。方法：采用Waters SunFireTM C18(4.6×150mm, 5μm )色譜柱；流動(dòng)相為甲醇(A)-0.2%磷酸水溶液(B)系統(tǒng)梯度洗脫；流速為1.0ml/min；檢測波長:272 nm(0～6 min，沒食子酸)，283 nm(6～30 min，橙皮苷)。結(jié)果： 沒食子酸進(jìn)樣量在0.128～2.302 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9999，n=6)，平均回收率為99.64%，RSD為1.2%(n=9) ；橙皮苷進(jìn)樣量在0.099～1.777μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9997，n=6)，平均回收率為99.84%，RSD為0.8%(n=9)。結(jié)論：該方法簡便、快捷、準(zhǔn)確，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】正胃片；沒食子酸；橙皮苷；HPLC

正胃片是由猴耳環(huán)、陳皮、木香、七葉蓮、甘草、次硝酸鉍、氧化鎂、氫氧化鋁等制成的中西藥復(fù)方制劑，具有清熱涼血、健脾和胃、制酸止痛的功效，臨床用于胃熱燒灼、脘腹刺痛、嘔惡吞酸、食少倦怠、慢性胃炎、胃及十二指腸潰瘍等疾病，并收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第十七冊[1]。方中猴耳環(huán)、陳皮為君藥，猴耳環(huán)的主要有效成分為沒食子酸[2]，陳皮的主要有效成分為橙皮苷[3]。正胃片中沒食子酸、橙皮苷的含量測定方法已有文獻(xiàn)報(bào)道[4-5]，但同時(shí)測定這2種成分尚無報(bào)道。研究建立高效液相色譜法同時(shí)測定正胃片中沒食子酸、橙皮苷含量。該方法簡便、準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

1儀器與材料

1.1儀器Waters 2695 高效液相色譜儀；Waters2489紫外檢測器(美國沃特斯公司)；UV-2501紫外可見分光光度計(jì)(日本島津公司)；S180H型超聲波清洗器(德國Elma公司)；XS205DU型電子分析天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)。

1.2材料沒食子酸對(duì)照品(批號(hào)：110831-201204)、橙皮苷對(duì)照品(批號(hào)：110721-201316)均購自中國食品藥品檢定研究院；正胃片(批號(hào)：20120706、20120815、20130101、20130326、20130514，廣西醫(yī)科大學(xué)制藥廠)。甲醇、磷酸為色譜純，水為超純水。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱: Waters SunFireTM C18(4.6mm×150mm，5μm )；流動(dòng)相：A為甲醇，B為0.2%的磷酸水溶液；0～6 min，19%A，6～10 min，19%→40%A；檢測波長：272 nm(0～6 min，沒食子酸)，283 nm(6～30 min，橙皮苷)；流速為 1.0 ml/min；柱溫為30℃；進(jìn)樣量：10μl。

2.2樣品的制備

2.2.1對(duì)照品溶液的制備精密稱取沒食子酸對(duì)照品和橙皮苷對(duì)照品適量，置于50 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成1ml含沒食子酸255.8μg、橙皮苷197.4μg 的混合對(duì)照品溶液。

2.2.2供試品溶液的制備取本品10片，研細(xì)，取約0.5 g，精密稱定，置25 ml量瓶中，加入50%甲醇溶液約20 ml，超聲處理(功率300W，頻率33kHz)30 min，放置至室溫，加50%甲醇溶液定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3陰性樣品溶液的制備按正胃片處方及制備工藝，分別制備缺猴耳環(huán)和陳皮的陰性樣品，并按供試品溶液制備方法制備陰性樣品溶液。

2.3專屬性試驗(yàn)分別精密吸取供試品溶液、混合對(duì)照品溶液的稀釋液和陰性樣品溶液各10μl，在上述色譜條件下，注入液相色譜儀，記錄液相色譜圖。由圖1可見，在與對(duì)照品色譜峰相應(yīng)的位置上供試品具有相同保留時(shí)間的色譜峰，陰性樣品對(duì)測定無干擾。

2.4線性關(guān)系的考察精密吸取混合對(duì)照品溶液0.5、1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 ml分別置于10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，制成系列質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品溶液，按照上述色譜條件，每個(gè)質(zhì)量濃度分別測定3次，每次進(jìn)樣10μl，記錄峰面積。以峰面積的平均值Y為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量x(μg)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程，結(jié)果沒食子酸的回歸方程為：Y=3.415×106x+5.146×104，r=0.999 9，橙皮苷的回歸方程為：Y=2.046×106x+3.367×104，r=0.9997。表明沒食子酸進(jìn)樣量在0.128～2.302 μg范圍內(nèi)，橙皮苷進(jìn)樣量在0.099～1.777 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5儀器精密度試驗(yàn)精密吸取“2.4”項(xiàng)下中間質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品溶液10μl，在上述色譜條件下, 重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄色譜峰峰面積，結(jié)果沒食子酸、橙皮苷峰面積的RSD分別為1.2%、0.9%。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液(批號(hào)：20130101)，按上述色譜條件，分別于配制后0、2、4、8、12、24h進(jìn)樣，記錄色譜峰面積，結(jié)果沒食子酸、橙皮苷峰面積的RSD分別為1.6%、1.3%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7重復(fù)性試驗(yàn)稱取同一批樣品(批號(hào)：20130101)0.5 g，平行稱取6份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,在上述色譜條件下測定，測得沒食子酸平均含量為6.44 mg/g，RSD為1.5%；橙皮苷平均含量為4.83 mg/g，RSD為1.3%。

2.8回收率試驗(yàn)精密稱取已知含量的同一批號(hào)樣品(批號(hào)：20130101 )約0.25g，平行稱取9份，置25 ml量瓶中，分別加入沒食子酸和橙皮苷混合對(duì)照品溶液(含沒食子酸0.3268mg/ml、含橙皮苷0.2434mg/ml)適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定，計(jì)算回收率。結(jié)果沒食子酸平均回收率為99.64%，RSD為1.2%；橙皮苷平均回收率為99.84%，RSD為0.8%。

2.9樣品測定取5批正胃片，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)色譜條件測定，將測得峰面積代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品中沒食子酸、橙皮苷含量，結(jié)果見表1。

表1　樣品測定結(jié)果　(n=5)

3結(jié)果與討論

3.1提取條件的選擇實(shí)驗(yàn)對(duì)不同濃度的甲醇和乙醇進(jìn)行了提取效率的比較實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明甲醇提取效果優(yōu)于乙醇。采用不同濃度的甲醇提取，考察結(jié)果表明：采用50%甲醇提取，提取效率最高。另對(duì)比了不同提取方法(超聲、回流、索氏提取)對(duì)正胃片的提取效果，結(jié)果表明：超聲提取的效率高，方法簡便。

3.2提取時(shí)間的選擇以沒食子酸、橙皮苷為指標(biāo)，對(duì)提取時(shí)間進(jìn)行了考察，結(jié)果表明：提取30min后有效成分峰面積達(dá)到最大，確定提取30min作為提取時(shí)間。

3.3檢測波長的確定分別取沒食子酸、橙皮苷對(duì)照品溶液在200～400nm波長范圍進(jìn)行紫外光譜掃描，結(jié)果顯示沒食子酸和橙皮苷分別在272nm和283nm處有最大吸收。為提高分析靈敏度和準(zhǔn)確度，宜盡量選擇在最大吸收波長下測定沒食子酸和橙皮苷的含量。實(shí)驗(yàn)采用程序波長切換技術(shù)，根據(jù)各組分的出峰順序，在不同時(shí)間段分別用其相應(yīng)的最大吸收波長同時(shí)測定含量。

3.4流動(dòng)相的選擇參考藥典及相關(guān)文獻(xiàn)中沒食子酸、橙皮苷的含量測定方法[6-7]，采用等度洗脫法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，但分離結(jié)果均不理想，故考慮梯度洗脫。實(shí)驗(yàn)分別考察了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.2%磷酸水溶液、乙腈-0.1%磷酸水溶液等不同比例的流動(dòng)相，最終采用甲醇-0.2%水磷酸溶液作為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，可將2個(gè)組分完全分離，且基線穩(wěn)定，峰形好，出峰快。

參考文獻(xiàn)

[1]衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)[S].中藥成方制劑.第17冊.1998:58-59.

[2]江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典[S].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1999:1183-1184.

[3]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(一部)[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[4]何連枝, 丘振文, 羅丹冬. HPLC法測定正胃片中橙皮苷的含量[J].中華實(shí)用中西醫(yī)雜質(zhì),2007,20(17) :1549-1550.

[5]陳業(yè)光,李德潮.HPLC法測定正胃片中沒食子酸的含量[J].中成藥，2008,30(9)：13-14.

[6]徐海燕,金藝,張紅霞,等.HPLC同時(shí)測定胃力片中柚皮苷、橙皮苷與新橙皮苷的含量[J].中成藥,2010,32(8):1355-1356.

[7]陳艷偉,張歡,楊世磊,等.HPLC同時(shí)測定猴耳環(huán)消炎膠囊中沒食子酸與槲皮素的含量[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2013,19(9):126-127.

(收稿日期：2015.12.17)

【中圖分類號(hào)】R284.1

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號(hào)】1007-8517(2016)03-0012-02

作者簡介：唐德智，男，副主任中藥師，主要從事中藥制劑質(zhì)量控制研究。E-mai:tangdz7497@163.com