丁雪晴, 徐紅珍, 劉俊慧

(江蘇省泰州市第二人民醫(yī)院 檢驗科, 江蘇 泰州, 225500)

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乙肝血清學標志物與HBV-DNA含量檢測的臨床意義

丁雪晴, 徐紅珍, 劉俊慧

(江蘇省泰州市第二人民醫(yī)院 檢驗科, 江蘇 泰州, 225500)

關鍵詞:乙肝病毒; 乙肝血清學標志物; 酶聯(lián)免疫吸附法; 時間分辨熒光免疫分析; HBV-DNA含量

乙肝血清學標志物檢測已從酶聯(lián)免疫吸附法定性試驗發(fā)展到時間分辨熒光免疫分析定量分析，為臨床判斷患者的病情、傳染性和療效提供重要的依據(jù)。本研究采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、時間分辨熒光免疫分析(TRFIA)、熒光定量法PCR(FQ-PCR)分別檢測492例乙肝患者血清學標志物與HBV- DNA含量，探討三者的關系和臨床意義，現(xiàn)報告如下。

1資料與方法

1.1臨床資料

采集本院感染科2014年5月—2015年4月收治的492例乙肝患者的靜脈血樣本，其中男316例，女176例。于當日分離血清，-70℃保存，并于1周內(nèi)檢測。

1.2研究方法

1.2.1HBVm檢測方法：采用酶聯(lián)免疫吸附法( ELISA)和時間分辨熒光免疫分析(TRFIA)檢測HBVm，包括乙肝病毒表面抗原(HBsAg)、乙肝病毒表面抗體(HBsAb)、乙肝病毒e抗原(HBeAg)、乙肝病毒e抗體(HBeAb)、乙肝病毒核心抗體(HBcAb)。TRFIA乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的檢測范圍0.030～150 IU/mL，乙肝病毒e抗原(HBeAg)檢測范圍0.02～120 PEIU/mL。

1.2.2HBV-DNA檢測：HBV-DNA采用實時熒光定量PCR(FQ-PCR)濃縮提純裂解法。循環(huán)參數(shù)：37℃5 min，94℃ 1 min，95℃ 5 s，60℃ 30 s，共42個循環(huán)。熒光信號收集在反應體系溫度60℃，由儀器軟件自動分析出結果。線性范圍為1×(102～108)copies/mL，小于102copies/mL為陰性。

1.2.3儀器和試劑：上海新波EFFICUTA 全自動時間分辨儀及其配套試劑，上海新波ANYTEST全自動熒光儀。ELISA法診斷試劑盒購自北京萬泰生。Rotor-Gene Q熒光PCR儀；凱杰生物工程(深圳)有限公司 HBV DNAv3核酸擴增檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)及標準品，試劑批號：20141202。

1.3分組方法

分別采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和時間分辨熒光免疫分析(TRFIA)對492例血清進行HBVm的檢測，為表述方便，設定乙肝病毒五項血清學標志物第1～5項的排列順序為[2]: ① 乙肝表面抗原(HBsAg); ② 乙肝表面抗體(抗-HBs); ③ 乙肝e抗原(HBeAg); ④ 乙肝e抗體(抗-HBe); ⑤ 乙肝核心抗體(抗-HBe)。本次檢測共有7種乙肝病毒五項血清學標志物組合模式，分別是①③⑤，①④⑤，②④⑤，①⑤，①②④⑤，①②③⑤，①。依據(jù)HVB-DNA載量將患者分為5個級別：小于102copies/mL，102～103copies/mL，104～105copies/mL，106～107copies/mL，108copies/mL。

2結果

ELISA和TRFIA共檢出HBVm的7種不同模式。兩種方法檢測①③⑤，①④⑤，①⑤，②④⑤，①的結果比較無顯著差異(P>0.05)，檢測①②④⑤，①③④⑤的結果比較有顯著差異(P<0.05)。見表1。TRFIA 7種不同的血清HBVm模式HBV-DNA檢測的陽性率具有顯著差異，其中①④⑤，①⑤，②④⑤，①這4種模式與①③⑤比較有顯著差異(P<0.05)，①②④⑤，①③④⑤這2種模式與①③⑤比較無顯著差異。見表2。

對時間分辨熒光免疫分析(TRFIA)檢測HBsAg和HBeAg為反應性的142例患者進行了HBsAg和HBeAg含量與HBV-DNA載量之間的關系分析。隨著HBsAg、HBeAg含量的增高，HBV-DNA載量也增高，說明二者存在一定的相關性。但同數(shù)量級HBV-DNA載量HBsAg、HBeAg含量個體差異較大，表現(xiàn)為異常高于或低于相同數(shù)量級標本的平均水平。見表3。

與TRFIA法比較, *P<0.05。

與①③⑤模式比較, *P<0.05。

3討論

乙型肝炎是一種嚴重危害人類健康的疾病，血清學標志物乙肝兩對半的檢測為臨床醫(yī)師提供了可靠的依據(jù)[1]。ELISA法對乙肝兩對半血清標志物定性測定是傳統(tǒng)的方法，其只能提供“陰”、“陽”性的定性結果，并不能給臨床診斷和治療提供更多的信息。TRFIA是一種能定量檢測HBV標志物的檢測方法，它的靈敏度高于ELISA法，且具有較寬的線性范圍[2]。通過對492例血清樣本采用兩種方法對比研究發(fā)現(xiàn)，兩種方法檢測①③⑤，①④⑤，①⑤，②④⑤，①時無顯著差異(P>0.05)，檢測①②④⑤，①③④⑤時差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。TRFIA法高于ELISA法。①②④⑤的模式可能是新的亞型再感染，或病毒發(fā)生變異后。表達量低也有可能是①④⑤向②④⑤的轉(zhuǎn)變過程，①③④⑤模式可能是新的亞型感染病毒發(fā)生變異后表達；或者急性HBV感染趨向恢復慢性攜帶者，①③⑤模式向①④⑤模式的轉(zhuǎn)換過程，ELISA法不能檢出低濃度的HbeAg、HBeAb。ELISA法靈敏度低，存在前滯現(xiàn)象，易受環(huán)境、操作等多種因素的影響。TRFIA法能較為準確地反映其血清中HBV抗原抗體的含量。并且能檢出低水平復制的標本，避免漏檢，可以診斷出隱源性肝炎[3-4]。

患者血清中 HBV-DNA的存在是HBV 感染最為直接、靈敏和特異的指標，是判定體內(nèi)HBV感染、復制及傳染性強弱的金標準。本研究中，患者為①③⑤模式時HBV-DNA的陽性率為80.3%，明顯高于其他組合模式，說明e抗原是乙肝病毒在體內(nèi)復制的標志，e抗原含量的增高也提示乙肝病毒復制的活躍程度，患者為①③⑤模式時具有較強的傳染性[5-6]。作者發(fā)現(xiàn)這一數(shù)據(jù)較以往的研究報道低，可能是由于患者經(jīng)抗病毒藥物治療后，體內(nèi)HBV被抑制，而體內(nèi)之前產(chǎn)生的HBeAg未被完全降解；亦可能患者體內(nèi)的HBV-DNA載量已經(jīng)很低，超出本研究的檢測范圍。①④⑤模式時HBV-DNA的陽性率為55.4%，這與張代春[7]報道的54%相符，HBeAb的出現(xiàn)不能說明無傳染性，病毒復制終止。作者注意到有患者的HBV-DNA的載量較高，說明患者的傳染性還很強。以HBeAg轉(zhuǎn)換為HBeAb作為判斷病毒復制、有無傳染性的標準不可靠。②④⑤模式時HBV-DNA的陽性率為18.7%，這組模式中HBV-DNA陽性的患者多為慢性乙肝患者、肝硬化、原發(fā)性肝癌患者，HBV-DNA的載量多為102～103，說明患者仍有低水平的病毒復制，應引起醫(yī)生和患者的重視。①②④⑤和①③④⑤這兩種模式HBV-DNA陽性率分別為70%和80%，雖然這兩種模式只占乙肝的少數(shù)，但HBV-DNA陽性率高，且HBV-DNA的載量也較高。可能是病毒發(fā)生變異，多種亞型并存。ELISA法因試劑方法的局限性，對這兩種模式檢出率低，需做TRFIA法定量檢測，評價HBV- DNA病毒載量。

探討HBV-DNA載量與HBsAg、HBeAg含量的關系。作者發(fā)現(xiàn)隨著HBsAg、HBeAg含量的增高，HBV-DNA載量也增高，說明二者存在一定的相關性。但同數(shù)量級HBV-DNA載量HBsAg、HBeAg含量個體差異較大，表現(xiàn)為異常高于或低于相同數(shù)量級標本的平均水平，與岳峰等[8]報道相符。作者跟蹤檢測①③⑤和①③④⑤這兩種模式患者各1例，①③⑤患者的HBV-DNA載量從106降到102，HBsAg含量從177 IU/mL降至3.06 IU/mL，HBeAg含量從171 IU/mL降至7.17 IU/mL。①③④⑤患者的HBV-DNA載量從106降到102，HBsAg、HBeAg含量未出現(xiàn)明顯下降。HBV-DNA載量與HBsAg、HBeAg含量之間的關系仍需進一步探討。

參考文獻

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[8]岳峰, 劉婕, 沈敦. 熒光定量PCR檢測HBVDNA與血清HBV標志物的關系[J]. 中國誤診學雜志, 2002, 11(2): 1628-1630.

收稿日期:2016-03-20

中圖分類號:R 512.6

文獻標志碼:A

文章編號:1672-2353(2016)11-209-03

DOI:10.7619/jcmp.201611079