呂鎮(zhèn)城，彭永宏

（1.惠州學(xué)院生命科學(xué)系，廣東 惠州 516007；2.華南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，廣東 廣州 510631）

頂空固相微萃取—?dú)庀嗌V—質(zhì)譜聯(lián)用法分析西山烏欖果揮發(fā)性成分

呂鎮(zhèn)城，彭永宏1，2*

（1.惠州學(xué)院生命科學(xué)系，廣東 惠州 516007；2.華南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，廣東 廣州 510631）

采用頂空固相微萃取法結(jié)合氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法對西山烏欖果的揮發(fā)性成分進(jìn)行分析，從中鑒定出45種揮發(fā)性成分，占揮發(fā)性成分總量的90.21％。其中，萜烯類化合物占73.80％，芳香類化合物占7.68％、醇類化合物占4.59％。各組分中，含量較高的分別為順-羅勒烯（21.01％），D-檸檬烯（18.04％）和α-水芹烯（17.64％）等。本研究可以為下一步探討烏欖精油的功效提供參考。

西山烏欖果；揮發(fā)性成分；頂空固相微萃取法；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

烏欖（Canarium pimelaLeenhouts.）屬于橄欖科（Burseraceae）橄欖屬（Canarium）常綠喬木，別名木威子、黑欖，是中國南方的亞熱帶常綠果樹之一〔1〕，主要分布在我國廣東、廣西、海南、福建、云南等地，為嶺南果品之一。研究表明，烏欖果具有快速降壓和減慢心率的作用〔2〕。除了藥理功能之外，烏欖果因其風(fēng)味獨(dú)特而深受廣大消費(fèi)者喜愛，在廣東潮汕地區(qū)常用于制作欖角，幾乎每家每戶都食用。果實(shí)揮發(fā)性成分是其重要的品質(zhì)性狀之一，現(xiàn)已從廣東普寧地區(qū)和潮州地區(qū)產(chǎn)的烏欖果分別鑒定出32和41種揮發(fā)性成分，主要是萜類化合物崖柏烯、α-水芹烯、檸檬烯、α-側(cè)柏烯和α-蒎烯等〔3-4〕。植物精油是一類植物次生代謝物質(zhì)，是具有揮發(fā)性的油狀液體，因呈現(xiàn)多種特殊的芳香氣味，并具有不同的生物活性，例如抗腫瘤、抗炎、抑菌和抗氧化功效等，在香料、食品和醫(yī)藥等領(lǐng)域受到廣泛關(guān)注[5-7]。但是，廣東廣州地區(qū)產(chǎn)的西山烏欖果揮發(fā)性成分的組成，尚未見文獻(xiàn)報(bào)道，制約了其生物學(xué)功效的深入研究。因此，本文采用頂空固相微萃取法（HS-SPME）結(jié)合氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）分析西山烏欖果的揮發(fā)性成分，以期為烏欖資源在食品和醫(yī)藥領(lǐng)域的開發(fā)利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

西山烏欖果于2015年9月采自廣東廣州，憑證標(biāo)本（編號20150902）保存于惠州學(xué)院生命科學(xué)系。

QP-2010-Plus型氣質(zhì)聯(lián)用儀（日本島津公司）；手動(dòng)頂空固相微萃取裝置（德國IKA公司）；65μm PDMS/ DVB萃取纖維頭（美國Supelco公司）；Rtx-5MS色譜柱（美國安捷倫公司）。

1.2 HS-SPME法

稱取10 g果肉在液氮中研磨，置20 mL萃取瓶中，加入3 mL飽和NaCl溶液，加入轉(zhuǎn)子后加蓋封口。使用手動(dòng)固相微萃取進(jìn)樣器及萃取頭進(jìn)行吸附。萃取頭在使用前在氣相色譜進(jìn)樣口老化2 h，老化溫度為250℃。將老化好的萃取頭插入樣品瓶的頂空部分，室溫下吸附30 min。吸附完成后插入GC進(jìn)樣口，進(jìn)行解吸附。

1.3 GC-MS分析條件

升溫程序如下：起始溫度40℃，保留2 min，以4℃/min升溫到220℃，再以15℃/min升到250℃，保留2 min。進(jìn)樣口溫度250℃，連接口溫度280℃，解吸附5 min。載氣為高濃度He（99.99％），不分流進(jìn)樣，流速為1 mL/min。質(zhì)譜條件：連接口溫度280℃，電離方式EI，離子源溫度為230℃，四級桿溫度150℃；電子能量70 eV，Scan模式全程掃描。樣品經(jīng)過氣相色譜進(jìn)行分離后，形成不同的色譜峰。

2 結(jié)果與分析

采用GC-MS計(jì)算機(jī)聯(lián)用儀分析西山烏欖果揮發(fā)性成分，經(jīng)NIST/WILEY檢索及面積歸一化法計(jì)算，確定了45種組分。GC-MS總離子流圖見圖1，各組分見表1。

圖1 西山烏欖果揮發(fā)性成分總離子流圖

表1 西山烏欖果揮發(fā)性成分及相對百分含量

續(xù)表1

由圖1和表1可知，通過GC-MS分析、計(jì)算機(jī)檢索和質(zhì)譜庫比對，從西山烏欖果中共鑒定出45個(gè)化合物，占揮發(fā)性成分總量的90.21％，主要成分為萜烯類（73.8％）、芳香類（7.68％）、醇類（4.59％）化合物等。其中，相對含量較高的組分是順-羅勒烯（21.01％），D-檸檬烯（18.04％）和α-水芹烯（17.64％），這三種組分占總烏欖果總揮發(fā)性成分56.69％。

3 討論

在西山烏欖果的主要揮發(fā)性成分中，順-羅勒烯呈草香、花香氣味，該香氣成分在羅勒油中含量較高；D-檸檬烯呈檸檬香氣味，是柑橘類水果果皮的主要揮發(fā)性成分；α-水芹烯呈松香、丁香氣味，在桉葉油和月桂油等含量較高。這三種成分占西山烏欖果總揮發(fā)性成分的56.69％，構(gòu)成了烏欖的主要香氣特征。從主要組分及構(gòu)成比例來看，廣東普寧地區(qū)的三角車心欖的主要揮發(fā)性成分為崖柏烯（32.64％）、α-水芹烯（30.78％）和D-檸檬烯（18.77％）〔3〕，而廣東潮州地區(qū)的烏欖果主要揮發(fā)性成分為D-檸檬烯（10.20％）、α-側(cè)柏烯（8.86％）、α-蒎烯（7.25％）等〔4〕。從表1可以看出，西山烏欖的主要揮發(fā)性成分為順-羅勒烯（21.01％），D-檸檬烯（18.04％）和α-水芹烯（17.64％），說明西山烏欖和三角車心欖的主要揮發(fā)性成分較為相似，含有兩種共同組分，分別為α-水芹烯和D-檸檬烯；此外，二者D-檸檬烯的比例也非常接近，約為18％左右。但是，潮州烏欖的揮發(fā)性成分與西山烏欖或三角車心欖相比，無論是主要組分還是構(gòu)成比例，均存在較大差異，表明廣東省不同產(chǎn)地的烏欖果揮發(fā)性成分存在一定的區(qū)別。目前，對烏欖的研究報(bào)道主要集中在營養(yǎng)成分及烏欖葉水提物的降壓作用等方面，而對其揮發(fā)性成分的功效研究較少[8-10]。研究表明，D-檸檬烯在臨床上可用于治理膽囊炎，拮抗酒精性肝損傷大鼠的鐵過載，還有抗菌以及緩解心絞痛等功效[11-12]；α-水芹烯具有提升免疫應(yīng)答，促進(jìn)人類肝癌細(xì)胞凋亡等作用[13-14]。本文研究結(jié)果提示，西山烏欖果具有潛在的藥用功效，有待后續(xù)進(jìn)一步研究。

[1]中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會(huì).中國植物志[M].第43卷.北京：科學(xué)出版社，1997：27.

[2]董艷芬，梁燕玲，羅艷，等.烏欖果降壓作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐，2006，19（8）：880-882.

[3]謝惜媚，陸慧寧，馮順卿.烏欖果揮發(fā)性成分及脂肪酸的GC-MS分析[J].分析測試學(xué)報(bào)，2008，27（S1）：83-85.

[4]郭守軍，楊永利，黃佳紅，等.烏欖果實(shí)揮發(fā)性化學(xué)成分的GC-MS分析[J].食品科學(xué)，2009，30（12）：251-253.

[5]HAJLAOUI H，MIGHRI H，AOUNI M.，et al.Chemical composition and in vitro evaluation of antioxidant，antimicrobial，cytotoxicity and anti-acetylcholinesterase properties of Tunisian Origanum majorana L.essential oil[J]. Microbial Pathogenesis，2016（95）：86-94.

[6]MOIRANGTHEM D S，LAISHRAM S，RANA V S.，et al.Essential oil of Cephalotaxus griffithii needle inhibits proliferation and migration of human cervical cancer cells：involvement of mitochondria-initiated and death receptormediated apoptosis pathways[J].Natural Product Research，2015，29（12）：1161-1165.

[7]SUN Z，WANG H，WANG J.，et al.Chemical Composition and Anti-Inflammatory，Cytotoxic and Antioxidant Activities of Essential Oil from Leaves of Mentha piperita Grown in China[J].PLoS One，2014，9（12）：e114767.

[8]梁燕玲，董艷芬，羅艷，羅集鵬.烏欖葉水提物對大鼠血壓和心率的實(shí)驗(yàn)研究[J].江西醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，46（3）：42-45.

[9]董艷芬，梁燕玲，羅艷，李永亮.烏欖葉對血管平滑肌的作用及機(jī)制探討[J].廣東醫(yī)學(xué)，2008，11（29）：1780-1783.

[10]岑柏宏，江維寧，劉萍芬，等.烏欖葉水提取物對心臟血流動(dòng)力學(xué)的作用探究[J].醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐，2012，25（7）：747-749.

[11]孫婷婷，梁惠，劉穎，等.D-檸檬烯對酒精性肝損傷大鼠鐵過載調(diào)節(jié)作用[J].中國公共衛(wèi)生，2015，31（9）：1176-1179.

[12]盧海燕，徐重新，張宵，等.檸檬烯對食源性病原菌的抑菌活性[J].浙江大學(xué)學(xué)報(bào)，2016，42（3）：306-312.

[13]HSIEH S L，LI Y C，CHANG W C.，et al.Induction of necrosis in human liver tumor cells by alpha-phellandrene[J].Nutrition and Cancer，2014，66（6）：970-979.

[14]LIN J J，LINJ H，HSU S C.，et al.Alpha-phellandrene promotes immune responses in normal mice through enhancing macrophage phagocytosis and natural killer cell activities[J].In Vivo，2013，27（6），809-814.

【責(zé)任編輯：吳躍新】

Study on Volatile Components ofCanarium pimelaLeenhouts Fruits by HS-SPME-GC-MS Method

LV Zhen-cheng1，PENG Yong-hong1，2
（1.Department of Life Science，Huizhou University，Huizhou 516007；2.College of Life Science，South China Normal University，Guangzhou 510631，Guangdong China）

Volatile components of C.pimela L.fruits were analyzed by HS-SPME-GC-MS method.Forty-five compounds were identified which account for 90.21％of total volatile components.Major volatile components include Terpenes，aromatics and alcohols，which account for 73.80％，7.68％，and 4.59％respectively.The volatile components are rich in cis-Ocimene（21.01％），dl-Limonene（18.04％）and alpha.Phellandrene（17.64％）.The present result may be beneficial for the research on effects of C.pimela L.fruits essential oil.

Canarium pimelaL.fruits；volatile components；HS-SPME；GC-MS

R284.1

A

1671-5934（2016）03-0005-04

2016-06-20

惠州學(xué)院博士啟動(dòng)項(xiàng)目（C513.0204）；惠州市科技計(jì)劃項(xiàng)目（2013W11）

呂鎮(zhèn)城（1982-），男，廣東汕尾人，講師，博士，研究方向?yàn)橹参锾烊划a(chǎn)物研究

＊通訊作者：彭永宏，教授，博士生導(dǎo)師，E-mail:pengyh@scnu.edu.cn。