何君，吳學(xué)春，邢艷

(1.南京市職業(yè)病防治院 檢驗(yàn)科，江蘇 南京　210004; 2.南京市職業(yè)病防治院 皮膚科，江蘇 南京　210004)

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探討溶血、乳糜血、自身抗體對(duì)HIV抗體初篩結(jié)果的影響

何君1，吳學(xué)春2，邢艷1

(1.南京市職業(yè)病防治院 檢驗(yàn)科，江蘇 南京210004; 2.南京市職業(yè)病防治院 皮膚科，江蘇 南京210004)

[摘要]目的:探討溶血、乳糜血、自身抗體陽(yáng)性標(biāo)本對(duì)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定人類免疫缺陷病毒 (enzyme linked immunosorbent assay- human immunodeficiency virus，ELISA- HIV)抗體初篩結(jié)果的影響。方法:對(duì)80份對(duì)照血樣本、80份不同程度的溶血、240份不同程度的乳糜血以及80份自身抗體陽(yáng)性血樣本同時(shí)用兩種ELISA檢測(cè)試劑檢測(cè)HIV抗體，并對(duì)ELISA- HIV抗體待復(fù)檢的血樣本用蛋白質(zhì)印跡法(Western blotting，WB)進(jìn)行復(fù)檢。結(jié)果:80份溶血標(biāo)本和240份乳糜血樣本中，分別有3份樣本ELISA- HIV抗體結(jié)果待復(fù)檢，造成ELISA- HIV假陽(yáng)性率分別為3.75%(3/80)和1.25%(3/240)；80份自身抗體陽(yáng)性血清樣本檢測(cè)后顯示，4份樣本HIV抗體結(jié)果待復(fù)檢，它們分別來源于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、銀屑病和特發(fā)性血小板減少性紫癜患者血清，自身抗體造成ELISA- HIV抗體假陽(yáng)性率為5.00%(4/80)。結(jié)論:溶血、乳糜血、自身抗體對(duì)ELISA- HIV抗體初篩結(jié)果均有一定的影響，均可提高其假陽(yáng)性率。

[關(guān)鍵詞]溶血； 乳糜血； 自身抗體； HIV抗體初篩； 假陽(yáng)性

艾滋病 (acquired immuno- deficiency syndrome，AIDS)是艾滋病病毒(human immuno- deficiency virus，HIV)侵犯人的免疫系統(tǒng)，造成以免疫功能下降和各種感染為主要特征的一組綜合征[1]。HIV抗體篩查是發(fā)現(xiàn)HIV感染的有效途徑，是了解和掌握HIV感染情況的必要手段，所以HIV抗體初篩結(jié)果的準(zhǔn)確性顯得尤為重要，其結(jié)果不僅影響到受檢者個(gè)人，還會(huì)涉及家屬及社會(huì)的和諧穩(wěn)定。然而，ELISA- HIV抗體初篩有相當(dāng)多的影響因素，文獻(xiàn)[2]報(bào)道：HIV篩查實(shí)驗(yàn)室人員、實(shí)驗(yàn)環(huán)境、試劑盒都可能影響HIV抗體初篩結(jié)果。作者在工作過程中發(fā)現(xiàn)ELISA雙抗原夾心法檢測(cè)HIV抗體結(jié)果容易受血液內(nèi)源性因素(如溶血、乳糜血、自身抗體等)的影響。查閱相關(guān)文獻(xiàn)后發(fā)現(xiàn)，對(duì)于溶血、乳糜血、自身抗體能否引起ELISA- HIV抗體初篩結(jié)果假陽(yáng)性的報(bào)道不完全一致。在本文中作者針對(duì)溶血、乳糜血、自身抗體對(duì)ELISA- HIV抗體初篩結(jié)果是否有影響進(jìn)行了進(jìn)一步探討，現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1標(biāo)本來源

1.1.1對(duì)照標(biāo)本制備選取80份無(wú)脂血、黃疸、溶血以及自身抗體陰性且ELISA- HIV抗體結(jié)果為陰性的新鮮非抗凝血各8 ml分別加入兩個(gè)不同的試管中，一管放在室溫靜置60 min后3 000 r·min-1離心10 min，留取上層血清分裝并密封冷凍保存作為試驗(yàn)對(duì)照血清，另一管留著制備溶血標(biāo)本。

1.1.2溶血標(biāo)本制備將上面留置的另一試管全血置37 ℃水浴鍋中根據(jù)血紅蛋白(Hb)測(cè)定結(jié)果調(diào)整水浴時(shí)間，然后3 000 r·min-1離心10 min，分別取上清液在血細(xì)胞分析儀上測(cè)試Hb含量并做好記錄，同時(shí)留取500 μl上清液于壓蓋帶刻度離心管中密封冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.3乳糜血標(biāo)本制備留取240份生化檢測(cè)為乳糜血的血清標(biāo)本，按照 GB18469- 2001《全血及成分血質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》，將標(biāo)本分為輕、中、重度乳糜血各80份，離心后分離血清密封冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.4自身抗體血清制備80份自身抗體陽(yáng)性血清(標(biāo)本分別來源于中大醫(yī)院、南京軍區(qū)總院、南京市第二院以及南京市職業(yè)病防治院)，其中類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎24例，系統(tǒng)性紅斑狼瘡24例，銀屑病12例，特發(fā)性血小板減少性紫癜12例，皮肌炎8例。血清分離后密封冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2儀器與試劑

1.2.1儀器酶標(biāo)儀(生產(chǎn)廠家：美國(guó)伯樂，型號(hào)：Model680)；全自動(dòng)生化分析儀(生產(chǎn)廠家：日立，型號(hào)：H7080)；全自動(dòng)血液分析儀(生產(chǎn)廠家：日本希森美康，型號(hào)：XT- 4000i)；洗板機(jī)(生產(chǎn)廠家：北京宏潤(rùn)達(dá)科技發(fā)展有限公司，型號(hào)：ZS- 5)。

1.2.2試劑英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司提供的ELISA試劑盒(在表格中簡(jiǎn)稱“新”)；北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)股份有限公司提供的ELISA試劑盒(在表格中簡(jiǎn)稱“萬(wàn)”)。室內(nèi)質(zhì)控品：南京市疾病預(yù)防控制中心HIV確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室提供。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

嚴(yán)格按照試劑盒使用說明書和《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》2009年修訂版[3]進(jìn)行操作，分別用英科新創(chuàng)和北京萬(wàn)泰HIV初篩試劑進(jìn)行檢測(cè)，每種試劑試驗(yàn)設(shè)陽(yáng)性對(duì)照2孔，陰性對(duì)照3孔，室內(nèi)質(zhì)量控制2孔，實(shí)驗(yàn)標(biāo)本每次試驗(yàn)平行做兩孔。用洗板機(jī)洗板，洗板機(jī)的洗板次數(shù)設(shè)定為6次。

1.4結(jié)果判斷

兩種試劑均按照說明書判定結(jié)果：S/CO≥1為陽(yáng)性，0.9≤S/CO<1為灰區(qū)，S/CO<0.9為陰性。上面兩種試劑檢測(cè)結(jié)果，根據(jù)參考文獻(xiàn)[3]規(guī)定，兩項(xiàng)全陽(yáng)或者一陰一陽(yáng)都判斷為HIV抗體待復(fù)檢，送HIV確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行Western blotting(WB)確認(rèn)。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1溶血組HIV檢測(cè)結(jié)果

80份溶血標(biāo)本，Hb檢測(cè)結(jié)果在11~118 g·L-1之間。由于國(guó)內(nèi)外對(duì)于溶血的分度無(wú)明確的標(biāo)準(zhǔn)，所以作者根據(jù)Hb結(jié)果人為將其分為3個(gè)組：輕度溶血組(Hb≤20 g·L-1，簡(jiǎn)稱輕度)，中度溶血組(60 g·L-1>Hb>20 g·L-1，簡(jiǎn)稱中度)，重度溶血組(Hb≥60 g·L-1，簡(jiǎn)稱重度)。輕度、中度溶血組ELISA- HIV抗體均陰性，在重度溶血組中有3例ELISA- HIV抗體待復(fù)檢，溶血造成ELISA- HIV抗體初篩假陽(yáng)性率為3.75%(3/80)，重度溶血造成ELISA- HIV抗體假陽(yáng)性率為7.14%(3/42)，詳見表1。

表1對(duì)照組、溶血組ELISA- HIV抗體初篩結(jié)果

例

注：輕度、中度溶血組與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；但重度溶血組與對(duì)照組比較，χ2=5.810，P=0.039，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

2.2乳糜血組HIV檢測(cè)結(jié)果

240份乳糜血標(biāo)本中，80份輕度乳糜標(biāo)本ELISA- HIV抗體初篩全陰性，160份中、重度乳糜標(biāo)本中分別檢測(cè)到1例和2例ELISA- HIV抗體待復(fù)檢。ELISA- HIV乳糜血造成初篩假陽(yáng)性率為1.25%(3/240)，中、重度乳糜血造成假陽(yáng)性率為1.88%(3/160)，結(jié)果詳見表2。

表2對(duì)照組、乳糜血組ELISA- HIV抗體初篩結(jié)果

例

注：輕度乳糜血組與正常組比較，χ2=1.009，P=0.315，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；中、重度乳糜血組與正常組比較，χ2=1.513，P=0.553，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

2.3自身抗體組HIV檢測(cè)結(jié)果

80份自身抗體陽(yáng)性血清HIV抗體初篩結(jié)果顯示4份標(biāo)本ELISA- HIV抗體待復(fù)檢，分別來源于是類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、銀屑病和特發(fā)性血小板減少性紫癜患者，用ELISA方法檢測(cè)HIV抗體時(shí)，自身抗體造成初篩實(shí)驗(yàn)假陽(yáng)性率達(dá)到5.00%(4/80)，結(jié)果詳見表3。

表3對(duì)照組、自身抗體組HIV抗體初篩結(jié)果

例

注：對(duì)照組與自身抗體陽(yáng)性組比較，χ2=4.103，P=0.043，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

3討論

艾滋病是我國(guó)重點(diǎn)預(yù)防與控制的傳染病之一，HIV抗體檢測(cè)在臨床診斷、實(shí)驗(yàn)室血液篩查、疾病監(jiān)測(cè)及流行病學(xué)調(diào)查等方面發(fā)揮著重要的作用[4]。血清HIV抗體初篩是發(fā)現(xiàn)HIV感染的主要依據(jù)。所以快速準(zhǔn)確地檢測(cè)HIV抗體并為臨床診斷和治療艾滋病提供可靠的依據(jù)，已成為檢驗(yàn)工作者刻不容緩的責(zé)任。但HIV初篩試驗(yàn)影響因素很多，尤其是患者血清本身的內(nèi)源性因素[5- 6]。

本研究結(jié)果顯示，溶血標(biāo)本對(duì)ELISA- HIV抗體初篩檢測(cè)結(jié)果有一定的影響，容易造成一定的假陽(yáng)性。本研究選擇了80例溶血標(biāo)本進(jìn)行HIV抗體檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)有3例HIV抗體待復(fù)檢，均在重度溶血組。輕、中度溶血組沒有發(fā)現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果，這提示溶血不是特別嚴(yán)重的標(biāo)本并不影響ELISA- HIV抗體初篩結(jié)果，這與張利泉等[7]的報(bào)道基本一致。雖然本次研究結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較在統(tǒng)計(jì)學(xué)上并無(wú)差異，但研究發(fā)現(xiàn)溶血標(biāo)本的OD值有隨溶血程度的增加而輕微升高的趨勢(shì)，分析可能是溶血后釋放出來的Hb有極少量非特異性吸附到反應(yīng)孔上，而這種非特異性吸附的量隨著溶血程度的增加而增加，在洗板機(jī)洗滌不徹底的情況下Hb中的亞鐵血紅素依靠其過氧化物酶樣活性作用于底物，使底物顯色從而導(dǎo)致標(biāo)本OD值的升高。本次研究結(jié)果與陸亭屹等[8]報(bào)道不相一致，他們認(rèn)為溶血不會(huì)對(duì)HIV抗體檢測(cè)造成假陽(yáng)性。而本研究發(fā)現(xiàn)重度溶血標(biāo)本會(huì)提高HIV抗體初篩假陽(yáng)性率。

本研究結(jié)果顯示，80份對(duì)照標(biāo)本和240份乳糜血標(biāo)本進(jìn)行ELISA- HIV抗體初篩，輕度乳糜血HIV抗體均為陰性，中、重度乳糜血中分別有1例和2例HIV抗體待復(fù)檢，與對(duì)照組比較雖然差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意，但根據(jù)結(jié)果初步推測(cè)，隨著乳糜血程度的加重，ELISA- HIV抗體假陽(yáng)性率會(huì)提高。這與夏冰等[9]報(bào)道的結(jié)果基本一致。本次實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)中、重度乳糜血可以造成HIV抗體初篩結(jié)果假陽(yáng)性率達(dá)到1.88%(3/160)，與文獻(xiàn)[10- 11]中提到乳糜血可能引起其檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)假陽(yáng)性觀點(diǎn)基本一致。

本研究結(jié)果顯示,自身抗體對(duì)ELISA- HIV抗體初篩有一定的影響，容易造成假陽(yáng)性。本次選擇了80例自身抗體陽(yáng)性血作為研究對(duì)象， 4例HIV抗體待復(fù)檢，分別來源于是類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、銀屑病和特發(fā)性血小板減少性紫癜患者血清。自身抗體陽(yáng)性組與對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，這與鐘敏等[12]報(bào)道的基本一致。自身抗體造成HIV抗體初篩假陽(yáng)性的原因主要是交叉反應(yīng)引起的。作者認(rèn)為，導(dǎo)致這種假陽(yáng)性的原因可能是類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血液里存在類風(fēng)濕因子，它能與包被在固相載體上的抗原形成非特異性結(jié)合，導(dǎo)致假陽(yáng)性的出現(xiàn)。系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者體內(nèi)含有高滴度的抗各種逆轉(zhuǎn)錄病毒蛋白的抗體，包括HIV與HTLV的Gag，Env和Nef等?？赡艿臋C(jī)制是HTLV- 1相關(guān)的內(nèi)源性序列缺氧反應(yīng)元件(hypoxia response elements，HREs) 與小核糖體核蛋白復(fù)合物之間的分子模擬啟動(dòng)了自身抗體的產(chǎn)生，這些自身抗體不僅導(dǎo)致免疫復(fù)合物的沉積、補(bǔ)體結(jié)合及組織病理?yè)p傷，還能與各種逆轉(zhuǎn)錄病毒蛋白產(chǎn)生交叉抗體反應(yīng)[13]。

綜上所述，影響ELISA- HIV抗體初篩結(jié)果來自檢測(cè)標(biāo)本內(nèi)源性因素主要見于中、重度溶血，中、重度乳糜血和自身抗體陽(yáng)性血清。當(dāng)然，對(duì)于血液內(nèi)源性因素對(duì)抗- HIV初篩實(shí)驗(yàn)(ELISA法)檢測(cè)結(jié)果的影響，也有文獻(xiàn)報(bào)道惡性腫瘤、心血管疾病、透析患者及妊娠者體內(nèi)含有某些治療性抗體、類脂嗜異性抗體、類風(fēng)濕因子、甲胎蛋白等，這些物質(zhì)會(huì)與試劑中的抗原成分非特異性結(jié)合，從而發(fā)生假陽(yáng)性[14- 15]。所以，作為HIV初篩實(shí)驗(yàn)室的工作人員，在平時(shí)的HIV初篩工作中不光要注重自身責(zé)任心和專業(yè)能力的培養(yǎng)，購(gòu)買合格的HIV初篩試劑，最重要的是要有相當(dāng)?shù)慕?jīng)驗(yàn)和能力排除血液內(nèi)、外源性因素(尤其是溶血、乳糜血和自身免疫性疾病患者標(biāo)本)干擾造成的假陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果，在出具HIV抗體初篩報(bào)告時(shí)，如果發(fā)現(xiàn)結(jié)果陽(yáng)性，一定要檢查患者的血清是否有溶血、乳糜血，詢問患者是否有自身免疫性疾病，從而才能盡可能地減少或避免HIV抗體初篩結(jié)果的假陽(yáng)性率，提高HIV抗體初篩結(jié)果的準(zhǔn)確性，減少對(duì)受檢者及其家人帶來的不良影響和進(jìn)一步穩(wěn)定社會(huì)因素。

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Explore the influences of hemolysis，chyle blood，autoantibodies on HIV antibody screening results

HE Jun1，WU Xue- chun2，XING Yan1

(1.DepartmentofClinicalLaboratory，NanjingOccupationalDiseasePreventionandTreatmentHospital，Nanjing210004，China; 2.DermatologicalDepartment，NanjingOccupationalDiseasePreventionandTreatmentHospital，Nanjing210004，China)

[Abstract]Objective: To explore the influences of hemolysis， chyle blood， autoantibodies on ELISA- HIV antibody screening results. Methods: 80 control blood samples， 80 different degrees of hemolysis samples， 240 different levels of chyle blood samples and 80 autoantibody positive samples were detected by two kinds of ELISA- HIV antibody detection reagent， and the blood samples of ELISA- HIV antibody positive were reviewed by the Western blotting (WB) method. Results: There were 3 sample ELISA- HIV antibody screening test results were to be reviewed， respectively in 80 hemolysis samples and 240 chyle blood samples.ELISA- HIV false positive rate were 3.75%(3/80) and 1.25%(3/240)，respectively. Within 80 serum samples of autoantibody positive 4 samples HIV antibody screening results were to be reviewed.They were rheumatoid arthritis(RA)， systemic lupus erythematosus (SLE)，Psoriasis(PsA) and idiopathic thrombocytopenic purpura(ITP)，respectively.Autoantibodies cause HIV antibody screening test false positive rate was 5.00%(4/80). Conclusion: Hemolysis， chyle blood， autoantibodies have a certain influence on ELISA- HIV antibody screening test.They may lead to the false positive results in ELISA- HIV antibody screening test．

[Key words]hemolysis； chyle blood； autoantibodies； HIV antibody screening； false positive

doi:10.3969/j.issn.1671- 6264.2016.01.012

[中圖分類號(hào)]R512.91; R446.61

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1671- 6264(2016)01- 0054- 04

[作者簡(jiǎn)介]何君(1975-)，女，四川廣安人，副主任技師，醫(yī)學(xué)碩士。E- mail:he_jun_001@163.com

[收稿日期]2015- 06- 29[修回日期] 2015- 11- 22

[引文格式] 何君，吳學(xué)春，邢艷.探討溶血、乳糜血、自身抗體對(duì)HIV抗體初篩結(jié)果的影響[J].東南大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版，2016，35(1)：54- 57.

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