王　發(fā)，王嫦鶴，王　莉，劉雪峰，苗莉莉(陜西省食品藥品檢驗(yàn)所，西安　710061)

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頂空毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定奧硝唑原料的溶劑殘留

王發(fā)，王嫦鶴，王莉，劉雪峰，苗莉莉(陜西省食品藥品檢驗(yàn)所，西安710061)

摘要：目的建立奧硝唑原料藥中5種有機(jī)溶劑殘留量的頂空毛細(xì)管氣相色譜測(cè)定法。方法使用Agilent DB-624毛細(xì)管氣相色譜柱(30 m×0.32 mm×0.18 μm)，F(xiàn)ID檢測(cè)器，進(jìn)樣口溫度150 ℃，檢測(cè)器溫度250 ℃。程序升溫45 ℃，保持15 min，然后以40 ℃·min-1的速率升至220 ℃。頂空進(jìn)樣，平衡溫度85 ℃，平衡時(shí)間30 min。結(jié)果在上述條件下，甲醇，乙醇，乙酸乙酯，二氯乙烷和環(huán)氧氯丙烷的分離度均在2.0以上，線性關(guān)系良好(r在0.997 8～0.999 9之間)，平均回收率(n=6)在100.9%～103.4%之間，RSD在1.4%～3.3%之間。結(jié)論該法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確，可用于奧硝唑原料中殘留溶劑的測(cè)定。

關(guān)鍵詞：奧硝唑；頂空進(jìn)樣法；毛細(xì)管氣相色譜法；溶劑殘留

奧硝唑是繼甲硝唑、替硝唑后上市的抗厭氧菌和抗滴蟲(chóng)藥物，其抗厭氧菌、抗原生質(zhì)感染和抗毛滴蟲(chóng)的作用均高于前兩者。臨床上用于毛滴蟲(chóng)引起的男女泌尿生殖道感染，阿米巴原蟲(chóng)引起的腸、肝阿米巴蟲(chóng)病，賈第鞭毛蟲(chóng)病，厭氧菌感染、術(shù)后感染和口腔感染等。奧硝唑的耐受性良好，不良反應(yīng)較少，主要是皮膚變態(tài)反應(yīng)、消化系統(tǒng)反應(yīng)、循環(huán)系統(tǒng)反應(yīng)等[1-3]。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的查詢情況，現(xiàn)行的USP、EP、BP、JP均沒(méi)有收載奧硝唑原料。《中國(guó)藥典》(2010年版)第二增補(bǔ)本[4]和國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局進(jìn)口藥品標(biāo)準(zhǔn)JX20100049[5]收載有奧硝唑，但未對(duì)殘留溶劑進(jìn)行控制或只對(duì)甲醇、二氯乙烷和環(huán)氧氯丙烷3種殘留溶劑進(jìn)行檢測(cè)。奧硝唑原料在合成、純化及精制過(guò)程中可能使用的溶劑有甲醇、乙醇、乙酸乙酯、二氯乙烷和環(huán)氧氯丙烷等。本實(shí)驗(yàn)參考《中國(guó)藥典》2010年版二部附錄“殘留溶劑測(cè)定法”項(xiàng)下殘留溶劑及限度規(guī)定[6]和部分文獻(xiàn)方法[7-10]，建立了奧硝唑原料藥中甲醇、乙醇、乙酸乙酯、二氯乙烷和環(huán)氧氯丙烷的毛細(xì)管氣相色譜測(cè)定方法，從方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果來(lái)看，該方法簡(jiǎn)便準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于奧硝唑原料藥中殘留溶劑的質(zhì)量控制。

1儀器與試藥

1.1儀器安捷倫6890N氣相色譜儀，氫火焰離子檢測(cè)器(FID)，安捷倫G1888型自動(dòng)頂空進(jìn)樣器，梅特勒AE-240電子分析天平，中惠HA-300氫空一體機(jī)。

1.2試藥甲醇、無(wú)水乙醇、二氯乙烷、乙酸乙酯和環(huán)氧氯丙烷均為分析純，N-N二甲基乙酰胺為色譜純；奧硝唑原料，共21批，分別由8個(gè)不同企業(yè)提供，記作S1～S21。

2方法與結(jié)果

2.1氣相色譜條件檢測(cè)器：氫火焰離子檢測(cè)器(FID)；進(jìn)樣口溫度：150 ℃；檢測(cè)器溫度：250 ℃；色譜柱：DB-624毛細(xì)柱(30 m×0.32 mm×0.18 μm)；程序升溫，初始溫度：45 ℃，保持15 min，然后以40 ℃·min-1的速率升至220 ℃；頂空瓶平衡溫度：85 ℃；平衡時(shí)間：30 min;頂空進(jìn)樣，進(jìn)樣時(shí)間：0.5 min。

2.2對(duì)照品溶液制備精密稱取環(huán)氧氯丙烷0.999 5 g，二氯乙烷0.053 80 g，置于100 mL量瓶中，用N，N-二甲基乙酰胺(以下簡(jiǎn)稱溶解介質(zhì))稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液①。精密稱取甲醇1.507 8 g、無(wú)水乙醇2.468 5 g和乙酸乙酯2.527 4 g，置于同一100 mL量瓶中，精密加入對(duì)照品儲(chǔ)備液① 5 mL，用溶解介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液②。

精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液② 10 mL，置于100 mL量瓶中，用溶解介質(zhì)稀釋至刻度，即得對(duì)照品溶液(甲醇、乙醇、乙酸乙酯、二氯乙烷和環(huán)氧氯丙烷的質(zhì)量濃度分別為1.507 8，2.468 5 ，2.527 4，0.002 690 和0.049 98 g·L-1)。

2.3樣品溶液制備取奧硝唑原料1.0 g，精密稱重，置于頂空瓶中，加入溶解介質(zhì)2.0 mL，密封，即得。

2.4系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)精密量取上述對(duì)照品溶液和溶解介質(zhì)各2.0 mL，置于頂空瓶中，密封，按照上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，該色譜條件下各組分分離度均符合要求，溶解介質(zhì)對(duì)樣品的測(cè)定無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。

2.5標(biāo)準(zhǔn)曲線制備精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液②適量，用溶解介質(zhì)逐步稀釋制成質(zhì)量濃度(以甲醇計(jì))為0.904 7，1.206 2，1.507 8，1.809 4和2.110 9 g·L-1的溶液，作為線性對(duì)照溶液，按照上述氣相色譜條件測(cè)定，以對(duì)照品溶液峰面積為縱坐標(biāo)(Y)、質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X)，建立線性方程，結(jié)果見(jiàn)表1。

圖1GC圖

a.溶解介質(zhì)；B.對(duì)照品；C.樣品；1.甲醇；2.乙醇；3.乙酸乙酯；4.二氯乙烷；5.環(huán)氧氯丙烷

Fig.1 GC chromatograms

a. blank solvent；B. reference substances；C .sample；1.methanol；2.ethanol；3.ethyl acetate；4.dichloroethane；5.epichlorohydrin

表15種殘留溶劑的線性方程和線性范圍

Tab.1 Regression equations and linear ranges of calibration curves of 5 residual solvents

成分線性方程r線性范圍/g·L-1甲醇(methanol)Y=665．47X+61．920．99780．9047～2．1109乙醇(ethanol)Y=706．11X+95．410．99791．4811～3．4559乙酸乙酯(ethylacetate)Y=1515．72X+255．100．99851．5164～3．5384二氯乙烷(dichloroethane)Y=402．52X+0．090．99990．001614～0．003766環(huán)氧氯丙烷(epichlorohydrin)Y=193．54X+0．360．99910．02998～0．06996

2.6精密度實(shí)驗(yàn)精密量取對(duì)照品溶液6份，每份2.0 mL，按照上述色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果測(cè)得6次甲醇、乙醇、乙酸乙酯、二氯乙烷和環(huán)氧氯丙烷峰面積的RSD分別為2.0%，2.4%，2.2%，3.9%和3.4%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本方法精密度良好。

2.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn)制備同一樣品溶液6份，按照上述色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果本品中乙醇的含量為0.014%，RSD為2.3%，甲醇、乙酸乙酯、二氯乙烷和環(huán)氧氯丙烷均未檢出。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本方法重復(fù)性良好。

2.8檢測(cè)限實(shí)驗(yàn)精密量取不同體積的對(duì)照品溶液，用溶解介質(zhì)逐步稀釋，按照上述色譜方法進(jìn)樣，記錄色譜圖，當(dāng)所測(cè)殘留溶劑的信噪比為3∶1時(shí)，甲醇、乙醇、乙酸乙酯、二氯乙烷和環(huán)氧氯丙烷對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度分別為0.000 60，0.000 99，0.001 0，0.001 1和0.004 0 g·L-1。

2.9回收率實(shí)驗(yàn)精密稱取已知甲醇、乙醇、乙酸乙酯、二氯乙烷、環(huán)氧氯丙烷含量的同一奧硝唑原料6份，每份1.0 g，分別置于頂空瓶中，分別精密加入對(duì)照品溶液2.0 mL，密封，按照上述色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。甲醇、乙醇、乙酸乙酯、二氯乙烷和環(huán)氧氯丙烷的回收率分別為100.9%，101.0%，101.4%，103.4%和102.1%，RSD分別為1.5%，1.7%，1.4%，2.4%和3.3%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本方法回收率良好。

2.10奧硝唑樣品的測(cè)定按照2.2和2.3項(xiàng)下方法，分別制備對(duì)照品溶液和樣品溶液，按照上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果顯示，甲醇、乙酸乙酯、二氯乙烷和環(huán)氧氯丙烷在全部21批樣品中均未檢出。乙醇有10批樣品檢出，檢出量遠(yuǎn)小于《中國(guó)藥典》2010年版二部的限度規(guī)定，最高含量為0.02%，為藥典對(duì)乙醇規(guī)定限度的4%。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2奧硝唑溶劑殘留測(cè)定結(jié)果

Tab.2 Results of residual solvents in ornidazole

樣品編號(hào)甲醇/%乙醇/%乙酸乙酯/%二氯乙烷/%環(huán)氧氯丙烷/%限度0．30．50．50．00050．01S1-0．0003---S2-----S3-----S4-0．0002---S5-0．0002---S6-----S7-0．02---S8-0．01S9-0．01---S10-----S11-----S12-----S13-----S14-0．007---S15-0．01---S16-0．0009---S17-----S18-----S19-0．0009---S20-----S21-----

注：-表示未檢出。

3討論

3.1溶解介質(zhì)的選擇頂空進(jìn)樣通常以水為溶解介質(zhì)，對(duì)于非水溶性藥物，多采用N，N-二甲基甲酰胺或其他適宜溶劑。溶解性實(shí)驗(yàn)表明，奧硝唑在水中微溶，在N，N-二甲基甲酰胺和N，N-二甲基乙酰胺中均極易溶解。根據(jù)奧硝唑和5種待測(cè)殘留溶劑的溶解性，應(yīng)選擇N，N-二甲基甲酰胺或N，N-二甲基乙酰胺。因N，N-二甲基甲酰胺中常含有微量的甲醇，對(duì)測(cè)定有干擾，因此選擇N，N-二甲基乙酰胺作為溶解介質(zhì)。實(shí)驗(yàn)表明，奧硝唑原料和5種殘留溶劑對(duì)照品均在N，N-二甲基乙酰胺中完全溶解，且N，N-二甲基乙酰胺作為溶解介質(zhì)對(duì)實(shí)驗(yàn)無(wú)干擾。

3.2頂空溫度的選擇頂空平衡溫度的選擇主要根據(jù)樣品中待測(cè)溶劑的沸點(diǎn)和溶解介質(zhì)的沸點(diǎn)而定。殘留溶劑的沸點(diǎn)越高，需要選擇的頂空平衡溫度也較高。但隨著溫度的升高，樣品熱分解產(chǎn)物對(duì)測(cè)定干擾的風(fēng)險(xiǎn)增大，因此，在保證檢測(cè)方法靈敏度的基礎(chǔ)上，應(yīng)選擇較低的頂空平衡溫度，以避免樣品熱降解產(chǎn)物的干擾。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本方法在85 ℃時(shí)即可保證檢測(cè)的靈敏度，因此選擇85 ℃作為頂空溫度，選擇較低的頂空溫度可以有效避免奧硝唑原料在較高溫度時(shí)產(chǎn)生熱降解產(chǎn)物對(duì)測(cè)定的干擾。

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Determination of the residual solvents in ornidazole by headspace capillary GC

WANG Fa，WANG Changhe，WANG Li，LIU Xuefeng，MIAO Lili (Shaanxi Province Institute for Food and Drug Control，Xi′an 710061，China)

Abstract:Objective To establish a headspace capillary GC method for the determination of the residual solvents in ornidazole．Methods An Agilent DB-624 capillary column(30 m×0.32 mm×0.18 μm) was used. The inlet temperature was 150 ℃ and the FID detector temperature was 250 ℃.The oven temperature was initially held at 45 ℃ for 15 min and then programmed to 220 ℃ at 40 ℃·min-1. The headspace sampling was used at heated temperature 85 ℃ for 30 min. Results The linear correlation cofficients of this method for methanol，ethanol， ethyl acetate，dichloromethane，epichlorohydrin were between 0.997 8-0.999 9，respectively. All the average recoveries were between 100.9%-103.4%，RSDs were between 1.4%-3.3%.Conclusion The method was simple，accurate，so it is proposed for the determination of the residual solvents in ornidazole．

Key words:ornidazole；headspace injecting；capillary GC； residual solvents

(收稿日期：2015-06-23)

中圖分類號(hào)：R927.2

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1004-2407(2016)02-0146-03

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2016.02.011