鄭益紅 溫美福 葉新橋 鄒欣 鄧儲(chǔ)婷

腫瘤浸潤(rùn)T淋巴細(xì)胞在乳腺癌原發(fā)灶中的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

鄭益紅 溫美福 葉新橋 鄒欣 鄧儲(chǔ)婷

目的 分析腫瘤浸潤(rùn)T淋巴細(xì)胞在乳腺癌原發(fā)灶中的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系。方法 對(duì)105例乳腺癌患者的臨床資料和石蠟包埋病理標(biāo)本進(jìn)行分析，利用免疫組化檢測(cè)患者CD3+T、CD4+T、CD8+T淋巴細(xì)胞在乳腺癌原發(fā)灶中的表達(dá)，利用COX多因素和單因素分析患者總生存率和無(wú)病生存率的相關(guān)因素。結(jié)果 CD8+T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)和SBR分級(jí)具有相關(guān)性（P＜0.05）。CD4+T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)與HER-2表達(dá)、SBR分級(jí)有關(guān)（P＜0.05），CD3+T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)和淋巴結(jié)狀態(tài)、HER-2表達(dá)、PR表達(dá)、ER表達(dá)、SBR分級(jí)、臨床分期、腫瘤直徑、年齡等無(wú)關(guān)。結(jié)論 CD3+T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)廣泛存在于乳腺癌原發(fā)灶中，病變程度受到CD8+T淋巴細(xì)胞和CD4+T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)的影響，CD3+T、CD4+T、CD8+T淋巴細(xì)胞都關(guān)系著乳腺癌的較好預(yù)后。

腫瘤浸潤(rùn)；T淋巴細(xì)胞；乳腺癌；原發(fā)灶；預(yù)后

腫瘤浸潤(rùn)T淋巴細(xì)胞就是從腫瘤組織中分離出的富含腫瘤特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞，T淋巴細(xì)胞是機(jī)體重要的抗腫瘤免疫應(yīng)答細(xì)胞，主要介導(dǎo)細(xì)胞免疫抑制或殺傷腫瘤細(xì)胞[1]。腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞與患者的生存率和手術(shù)治療效果有很大的關(guān)系[2]。

1 資料與方法

1.1 一般資料 對(duì)本院2013年3月～2015年3月接收的

100例乳腺癌患者的臨床資料和石蠟包埋病理標(biāo)本進(jìn)行回顧性分析，患者平均年齡（52.61±5.14）歲，所有患者均為原發(fā)乳腺癌，手術(shù)進(jìn)行前均沒(méi)有進(jìn)行靶向治療、化療、免疫調(diào)節(jié)劑治療、放療，都完成了根治乳腺癌的手術(shù)，所有資料均完整。

1.2 免疫組化檢測(cè) 將所有患者的石蠟包埋病理標(biāo)本切成4μm厚度的薄片，將其中具有明顯病灶特征的薄片進(jìn)行烘烤，利用甲苯脫去表層的蠟，利用梯度酒精對(duì)其進(jìn)行水化，然后用高壓將其修復(fù)，利用濃度為3%的雙氧水對(duì)內(nèi)源性過(guò)氧化物酶進(jìn)行孵育滅活等。然后再加入鼠抗人CD8+、CD4+、CD3+單克隆抗體（均購(gòu)自福建邁新公司）作為一抗，并在4℃的溫度下孵育過(guò)夜，再進(jìn)行漂洗、復(fù)溫到37℃，加入生物素標(biāo)記二抗工作液，在溫度為37℃的情況下，孵育30 min，采用PBS緩沖液進(jìn)行漂洗、蘇木素復(fù)染、DAB顯色，在高倍顯微鏡下進(jìn)行鏡檢，并采用PBS替代一抗進(jìn)行陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定[3]采取高倍視野，在病灶中隨機(jī)選擇五個(gè)視野，并保證所選視野分布在病灶的各個(gè)部位，CD8+、CD4+、 CD3+染色都定位在淋巴細(xì)胞的胞膜之中。（1）對(duì)顯色強(qiáng)度進(jìn)行觀察：深棕色計(jì)3分、棕色計(jì)2分、淺棕色或黃色計(jì)1分、無(wú)顯色計(jì)0分；（2）對(duì)顯色面積進(jìn)行觀察：對(duì)視野淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)，＞50%計(jì)3分，25%～50%計(jì)2分，＜25%計(jì)1分，＜5%計(jì)0分。將顯色面積與顯色強(qiáng)度得分相乘，≥2分為陽(yáng)性，＜2分為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法[4]采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)進(jìn)行分析，計(jì)量資料用“x±s”表示，等級(jí)資料采用秩和檢驗(yàn)，用Spearman秩對(duì)連續(xù)變量和分類(lèi)變量進(jìn)行相關(guān)性分析，Kaplan-Meier法進(jìn)行生存分析，COX風(fēng)險(xiǎn)比例模型進(jìn)行單因素分析。α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌OS和DFS影響因素COX單因素分析 隨訪期間13例復(fù)發(fā)，9例死亡，通過(guò)Kaplan-Meier法進(jìn)行分析，5年生存率為84.92%，無(wú)病生存率為76.23%。3年生存率為89.93%，無(wú)病生存率為81.23%，2年生存率為93.23%，無(wú)病生存率為85.45%。將臨床及病理相關(guān)因素帶入COX模型作為自變量，以總生存率（OS）與無(wú)病生存率（DFS）分別作為因變量，進(jìn)行單因素分析，結(jié)果顯示，OS保護(hù)因素為CD8+T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)、CD4+T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)（HR=0.565、0.622，P＜0.05），OS危險(xiǎn)因素為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、HER-2陽(yáng)性、SBR分級(jí)、臨床分期（HR=3.024、4.251、3.562、3.251，P＜0.05）。DFS保護(hù)因素為CD8+T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)、CD4+T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)（HR=0.513、0.636，P＜0.05），DFS危險(xiǎn)因素為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、HER-2陽(yáng)性、SBR分級(jí)、臨床分期（HR=2.105、3.025、2.936、2.351，P＜0.05）。

2.2 CD8+、CD4+、CD3+在乳腺癌原發(fā)灶的表達(dá)與病理特征的關(guān)系 105例患者中，71例（67.62%）為CD8+陽(yáng)性，55例（52.38%）為CD4+陽(yáng)性，101例（96.19%）乳腺癌原發(fā)灶為

CD3+陽(yáng)性。CD8+T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)和SBR分級(jí)具有相關(guān)性（P＜0.05）。CD4+T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)與HER-2表達(dá)、SBR分級(jí)有關(guān)（P＜0.05），CD3+T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)和淋巴結(jié)狀態(tài)、HER-2表達(dá)、PR表達(dá)、ER表達(dá)、SBR分級(jí)、臨床分期、腫瘤直徑、年齡等無(wú)關(guān)。

3 討論

T淋巴細(xì)胞主要由重要TILs組成，并且各亞群在腫瘤免疫中都發(fā)揮著重要作用[5]。CD8+T淋巴細(xì)胞對(duì)殺死和溶解腫瘤細(xì)胞、微生物、異體細(xì)胞有直接的作用，是機(jī)體細(xì)胞免疫的一種主要力量[6]。CD4+T淋巴細(xì)胞在乳腺癌灶內(nèi)的作用對(duì)抗腫瘤免疫有很大的幫助作用，并和CD8+T淋巴細(xì)胞的表達(dá)相符[7]。在大腸癌組織中，CD8+T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)與組織分型、臨床分期等有關(guān)，其惡性程度越高，CD8+細(xì)胞的表達(dá)越高，CD8+T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)程度越高，預(yù)后也相應(yīng)的越好[8]。

本研究結(jié)果顯示，OS保護(hù)因素為CD8+T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)、CD4+T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)（HR=0.565、0.622，P＜0.05），OS危險(xiǎn)因素為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、HER-2陽(yáng)性、SBR分級(jí)、臨床分期（HR=3.024、4.251、3.562、3.251，P＜0.05）。DFS保護(hù)因素為CD8+T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)、CD4+T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)（HR=0.513、0.636，P＜0.05），DFS危險(xiǎn)因素為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、HER-2陽(yáng)性、SBR分級(jí)、臨床分期（HR=2.105、3.025、2.936、2.351，P＜0.05）。CD8+T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)和SBR分級(jí)具有相關(guān)性（P＜0.05）。CD4+T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)與HER-2表達(dá)、SBR分級(jí)有關(guān)（P＜0.05），CD3+T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)和淋巴結(jié)狀態(tài)、HER-2表達(dá)、PR表達(dá)、ER表達(dá)、SBR分級(jí)、臨床分期、腫瘤直徑、年齡等無(wú)關(guān)。

綜上所述，CD3+T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)廣泛存在于乳腺癌原發(fā)灶中，病變程度受到CD8+T淋巴細(xì)胞和CD4+T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)的影響，CD3+T、CD4+T、CD8+T淋巴細(xì)胞都關(guān)系著乳腺癌的較好預(yù)后。

[1] 于海明,焦順昌,楊俊蘭,等.乳腺癌原發(fā)灶T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)與預(yù)后的關(guān)系[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào),2013，35(2)：199-206.

[2] 于海明,楊俊蘭,焦順昌,等.乳腺癌原發(fā)灶B淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)與預(yù)后的關(guān)系[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2013，33(5)：750-755.

[3] 爭(zhēng)鳴,張欣,郭慧芳,等.CD147介導(dǎo)CD4+腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞促進(jìn)乳腺癌進(jìn)展[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志,2015，31(7)：961-964.

[4] 何建明,黃湛,吳家豪,等.CD8+腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞與乳腺癌預(yù)后的關(guān)系[J].中國(guó)普通外科雜志,2013，22(11)：1475-1478.

[5] 任偉民,張友元,董軍明,等.老年女性原發(fā)乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中FoxP3表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性[J].中國(guó)老年學(xué)雜志,2014，34(2)：385-387.

[6] 薛聰,彭柔君,安欣,等.CD8+淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)對(duì)可手術(shù)乳腺癌預(yù)后的影響[J].臨床腫瘤學(xué)雜志,2014，19(10)：896-900.

[7] 于海明,楊俊蘭,焦順昌,等.增殖誘導(dǎo)配體在乳腺癌原發(fā)灶表達(dá)及與預(yù)后的關(guān)系[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2015，35(2)：185-190.

[8] 付云霞,王弦,朱敬鳳,等.乳腺癌間質(zhì)中腫瘤相關(guān)性巨噬細(xì)胞和T細(xì)胞浸潤(rùn)及其臨床病理意義[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2015，31(2)：256-258.

Objective To analyze the relationship between the expression of tumor inf i ltrating T lymphocytes in breast cancer and prognosis. Methods The clinical data of 100 patients with breast cancer

from March 2013 to March 2015 were analyzed. The expression of CD3+T, CD4+T, CD8+T lymphocytes in the primary foci of breast cancer were detected by immunohistochemistry. The correlation factors were analyzed by COX multiple factors and single factor analysis. Results CD8+T lymphocyte inf i ltration and SBR classif i cation had correlation (P＜0.05). CD4+T lymphocyte inf i ltration and HER -2 expression, SBR grade (P＜0.05), CD3+T lymphocyte inf i ltration and lymph node status, HER-2 expression, PR expression, ER expression, SBR grading, clinical staging, tumor diameter, age, etc. Conclusion CD3+T lymphocyte inf i ltration was found in the primary foci of breast cancer, and the extent of lesion was affected by the inf i ltration of CD8+T lymphocytes and CD4+T lymphocytes, CD3+T, CD4+T, and CD8+T lymphocytes were related to the prognosis of breast cancer.

Tumor inf i ltration; T lymphocyte; Breast cancer; Primary tumor; Prognosis

10.3969/j.issn.1009-4393.2016.32.009

探討應(yīng)用免疫組化標(biāo)記檢測(cè)乳腺髓樣癌周邊淋巴細(xì)胞亞群及臨床意義 (G220142SF274)

江西 341000 江西省贛州市市立醫(yī)院病理科 （鄭益紅）342700 江西省贛州市石城縣人民醫(yī)院普外科 （溫美福） 341000 江西贛州市立醫(yī)院胸外科（葉新橋） 贛州市立醫(yī)院病理科（鄒欣 鄧儲(chǔ)婷）