曹莉 吳倩 張赟 謝青梅 林永順 黃平 曹穎△

(1.水城礦業(yè)集團(tuán)總醫(yī)院病理科，貴州 六盤水 553001；2.貴州省人民醫(yī)院病理科，貴州 貴陽 550002)

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△通信作者

細(xì)胞塊并免疫細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)在胸水脫落細(xì)胞學(xué)中的診斷價值

曹莉1吳倩2張赟2謝青梅2林永順2黃平2曹穎2△

(1.水城礦業(yè)集團(tuán)總醫(yī)院病理科，貴州 六盤水 553001；2.貴州省人民醫(yī)院病理科，貴州 貴陽 550002)

胸水； 細(xì)胞塊； 免疫細(xì)胞化學(xué)； 診斷

臨床病理細(xì)胞學(xué)診斷中，常常會遇到各種體液找癌細(xì)胞的送檢標(biāo)本，其中較多見的是胸水標(biāo)本。胸水脫落細(xì)胞學(xué)常規(guī)方法為離心后取沉渣涂片并瑞姬染色下光鏡診斷。但常規(guī)制作的涂片細(xì)胞容易堆積，染色后細(xì)胞結(jié)構(gòu)不清，確診困難，導(dǎo)致癌細(xì)胞檢出率低[1]。我們對貴州省人民醫(yī)院病理科2015年1-7月收到的60例胸水標(biāo)本制作胸水沉渣細(xì)胞塊、HE染色并做波形蛋白(Vim)、廣譜細(xì)胞角蛋白(CK)、CK5/6、Wilm’s Tumor(WT-1)、D2-40、Calretinin、癌胚抗原(CEA)、甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-1(TTF-1)及NapsinA免疫細(xì)胞化學(xué)染色，并與常規(guī)制作涂片瑞姬染色比較，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 收集貴州省人民醫(yī)院病理科2015年1-7月胸水標(biāo)本60例。其中男35例，女25例,平均年齡(62±13)歲。

1.2 方法 (1)常規(guī)涂片瑞氏-姬姆莎(瑞姬)染色：取50 mL胸水以2 000 r/min離心15 min，倒去上清液，取沉渣涂片，瑞姬染色，光鏡下觀察；(2)細(xì)胞塊制備及HE染色：取50 mL胸水以2 000 r/min離心15 min，倒去上清液，取沉渣用擦鏡紙包裹固定，放入脫水機(jī)，脫水、包埋、切片后HE染色；(3)免疫細(xì)胞化學(xué)染色：采用EnVision二步法，按照說明書進(jìn)行操作。一抗Vim、CK廣、CK5/6、WT-1、D2-40、Calretinin、CEA、TTF-1及NapsinA工作液購于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。用已知陽性的人肺腺癌組織和胸膜間皮組織作陽性對照，PBS液替代一抗作陰性對照；(4)免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果判定：參照組織學(xué)原則，Vim、CK廣、CK5/6、D2-40、Calretinin、CEA及NapsinA以胞膜/胞質(zhì)著棕黃色判定為陽性，胞膜或胞質(zhì)未見棕黃色判定為陰性；WT-1、TTF-1以胞核著棕黃色判定為陽性，胞核未見棕黃色判定為陰性。

2 結(jié) 果

2.1 常規(guī)涂片瑞姬染色結(jié)果 本組60例胸水中43例出現(xiàn)細(xì)胞堆積，結(jié)構(gòu)不清晰。在常規(guī)涂片下9例報(bào)告為未查見癌細(xì)胞，10例報(bào)告為查見癌細(xì)胞，35例報(bào)告為查見可疑癌細(xì)胞，6例報(bào)告為查見核異質(zhì)細(xì)胞。

2.2 細(xì)胞塊HE染色結(jié)果 本組60例胸水細(xì)胞塊HE染色中，35例能明顯分辯出癌細(xì)胞呈腺泡、腺管和實(shí)性細(xì)胞團(tuán)等排列方式，具細(xì)胞異型性和結(jié)構(gòu)異型性。

2.3 免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果 本組60例胸水中，查見腺癌細(xì)胞49例，癌細(xì)胞CK廣、CEA、TTF-1、NapsinA陽性，Vim、CK5/6、WT-1、D2-40、Calretinin陰性。11例胸水未查見癌細(xì)胞，胸水見增生的間皮細(xì)胞，間皮細(xì)胞Vim、CK廣、CK5/6、WT-1、D2-40、Calretinin陽性，CEA、TTF-1、NapsinA陰性。

3 討 論

正常胸腔內(nèi)有少許漿液，起到潤滑作用。在病理狀態(tài)下漿液可明顯增多后出現(xiàn)胸水。隨著惡性腫瘤發(fā)病率的不斷升高，惡性胸水不斷增多。脫落細(xì)胞學(xué)檢查一直是惡性胸水的主要診斷手段，但常規(guī)離心后涂片細(xì)胞容易堆積，染色后結(jié)構(gòu)不清，影響診斷準(zhǔn)確性；此外，腺癌細(xì)胞與增生或變性的間皮細(xì)胞在形態(tài)學(xué)上有交叉，也造成部分病例確診困難[2]。本組60例常規(guī)涂片瑞姬染色中，僅10例可明確診斷為癌細(xì)胞，35例查見可疑癌細(xì)胞，6例查見核異質(zhì)細(xì)胞。上述結(jié)果顯示常規(guī)診斷方法難以做出十分準(zhǔn)確的判斷，從而影響患者的診斷及治療。我們對本組60例胸水沉渣制作細(xì)胞塊，切片后HE染色，光鏡下部分病例可分辯出異型癌細(xì)胞，呈腺泡、腺管和實(shí)性細(xì)胞團(tuán)等方式排列。我們分別采用腺癌細(xì)胞標(biāo)記物(CK廣、CEA)和間皮細(xì)胞標(biāo)記物(Vim、CK5/6、WT-1、D2-40、Calretinin)進(jìn)行免疫標(biāo)記，可很好的將胸水中的間皮與腺癌細(xì)胞區(qū)分開，此外再選用肺組織標(biāo)記物TTF-1、NapainA幫助明確腺癌細(xì)胞可能來源于肺組織。本組35例常規(guī)涂片瑞姬染色查見可疑癌細(xì)胞病例，經(jīng)細(xì)胞塊并免疫細(xì)胞化學(xué)染色均明確為腺癌細(xì)胞；6例查見核異質(zhì)細(xì)胞病例，經(jīng)細(xì)胞塊并免疫細(xì)胞化學(xué)染色4例明確為腺癌細(xì)胞，2例明確為增生的間皮細(xì)胞。本組49例胸水查見腺癌細(xì)胞患者中有15例患者做支纖鏡檢測或經(jīng)皮肺穿刺后病理證實(shí)為腺癌，5例患者由于自身原因出院未做進(jìn)一步的檢查及治療，另外29例患者由于臨床分期較晚，臨床未做支纖鏡檢測或肺部包塊切除，根據(jù)胸水結(jié)果做了相應(yīng)的化療；11例胸水未查見癌細(xì)胞患者有5例患者做支纖鏡檢測未見異常，經(jīng)抗炎治療后胸水減少，復(fù)查胸部CT未見明顯腫塊。本組常規(guī)胸水涂片瑞姬染色9例未查見癌細(xì)胞，經(jīng)細(xì)胞塊并免疫細(xì)胞化學(xué)染色明確為間皮細(xì)胞，10例常規(guī)胸水涂片瑞姬染色查見癌細(xì)胞，經(jīng)細(xì)胞塊并免疫細(xì)胞化學(xué)染色明確為腺癌細(xì)胞。對胸水脫落細(xì)胞制作細(xì)胞塊，制作方法簡單，設(shè)備要求低，同時以免疫細(xì)胞化學(xué)染色標(biāo)記進(jìn)行輔助診斷，可以明顯提高癌性胸腹水的陽性診斷率，具有較好的臨床應(yīng)用價值。

[1] 郭智俊.胸腹水沉淀物瓊脂石蠟雙包埋切片法與常規(guī)涂片法的對比[J]. 臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志, 2012, 18(4): 437.

[2] 謝深科，舒千玉，姚軍．細(xì)胞塊免疫標(biāo)記在胸腹水細(xì)胞病理診斷與鑒別診斷中的價值[J]. 中國醫(yī)療前沿, 2011, 6(4):73-74.

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2016-03-19)