張 鑫 楊廣燕 韓聲遷 耿 霞

快速實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)主要是指免疫滲濾試驗(yàn)法、免疫層析試驗(yàn)法等固相膜免疫檢測法，其內(nèi)容涉及細(xì)菌學(xué)、免疫學(xué)及分子生物學(xué)等范疇?？焖賹?shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)主要用于檢測患者呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)及生殖系統(tǒng)等系統(tǒng)所感染的細(xì)菌、病毒、支原體、寄生蟲等病原體[1]。隨著社會的發(fā)展、醫(yī)學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，我國居民所感染的細(xì)菌、病毒、支原體、寄生蟲等病原體的種類也在逐漸增多?？焖俅_認(rèn)患者感染的病原體有利于臨床醫(yī)師準(zhǔn)確地判定其病情，為其制定合理的治療方案。目前，使用快速實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)診斷傳染病已經(jīng)成為醫(yī)學(xué)工作者研究的重點(diǎn)。近幾年，我實(shí)驗(yàn)室使用快速診斷技術(shù)對感染性疾病患者進(jìn)行了病原體檢測，獲得了很好的效果，顯著降低了患者病情的誤診率及漏診率。本文主要對使用快速實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)的原理、優(yōu)點(diǎn)及存在的問題進(jìn)行了總結(jié)，以供相關(guān)醫(yī)學(xué)工作者參考和借鑒。

1 膠體金免疫層析快速診斷技術(shù)

膠體金免疫層析快速診斷技術(shù)能將特異性抗原或抗體以條帶樣固定在硝酸纖維膜上，將乳膠微球等可顯色的標(biāo)記物吸附在結(jié)合墊上。在使用膠體金免疫層析快速診斷技術(shù)進(jìn)行病原體檢測時，檢測人員需將樣品加到試紙條的一端，使樣品能夠通過毛細(xì)作用前移，并溶解固化，與結(jié)合墊上的標(biāo)記物形成復(fù)合物，移動至固定抗原或抗體區(qū)域，發(fā)生特異性結(jié)合，并被截留、顯色[2]。膠體金免疫層析快速診斷技術(shù)具有操作簡便、檢驗(yàn)的速度快、靈敏度和特異度高、試劑和樣品的用量較小等優(yōu)點(diǎn)[3]。使用該技術(shù)進(jìn)行病原體檢測一般在10～15分鐘之內(nèi)便可完成，其檢測結(jié)果直觀，可作為臨床醫(yī)師診斷患者病情的直接依據(jù)[4]。因此，該檢測方法在臨床上得到了較快的發(fā)展和廣泛的應(yīng)用。

膠體金免疫層析快速診斷技術(shù)在臨床上可用于定性診斷病毒性疾病、細(xì)菌性疾病、寄生蟲病等傳染性疾病及腫瘤，也可用于定量診斷機(jī)體的激素水平、心血管疾病中心肌酶標(biāo)志物的水平等。該技術(shù)可用于進(jìn)行流行病普查或快速診斷急重癥。

2 蛋白質(zhì)組快速診斷技術(shù)

2.1 蛋白質(zhì)組雙向電泳技術(shù)

蛋白質(zhì)組雙向電泳技術(shù)主要是將樣品通過蛋白質(zhì)溶解與細(xì)胞裂解技術(shù)將非蛋白質(zhì)成分去除，并依據(jù)不同的蛋白質(zhì)電點(diǎn)特性進(jìn)行分階段分離的一種技術(shù)。其中第一相為等電聚焦電泳，第二相為基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）。該技術(shù)是一項(xiàng)優(yōu)質(zhì)的二維分離技術(shù)。臨床醫(yī)師可依據(jù)不同的雙向電泳技術(shù)建立細(xì)胞或特定組織的雙向電泳數(shù)據(jù)庫和蛋白質(zhì)組圖譜，并進(jìn)行圖像分析[5-6]。

2.2 電噴霧質(zhì)譜（ESI-MS）技術(shù)與質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜（MALDI-TOF-MS）技術(shù)

ESI-MS與MALDI-TOF-MS是一類“軟電離”技術(shù)，可在電離的過程中有效地保留分子的完整性，是一種比較理想的對蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定的核心檢測技術(shù)。該技術(shù)可依據(jù)電場將液相多肽樣品進(jìn)行離子化處理，并利用基質(zhì)吸收激光的能量，使固相多肽樣品離子化，從而測得肽段離子參數(shù)，得到相對完整的蛋白質(zhì)分子量，實(shí)現(xiàn)對蛋白質(zhì)的鑒定[7-8]。

蛋白質(zhì)組雙向電泳技術(shù)和ESI-MS與MALDI-TOF-MS技術(shù)均利用了大多數(shù)疾病的患者都會出現(xiàn)特異性蛋白生物標(biāo)志的特點(diǎn)來診斷疾病。使用這兩項(xiàng)技術(shù)進(jìn)行病原體檢測的靈敏度和特異度較高。該技術(shù)可用于診斷前列腺癌、卵巢癌、白血病、心血管疾病、肝膽疾病及肺結(jié)核等疾病。

3 使用快速實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)進(jìn)行病原體檢測時存在的問題

在使用快速實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)檢查病原體時，檢測儀器的質(zhì)量、試紙的質(zhì)量、檢測人員的技術(shù)都嚴(yán)重影響著檢測的結(jié)果。其中任何一項(xiàng)因素出現(xiàn)偏差，都有可能導(dǎo)致檢測結(jié)果出錯。因此，相關(guān)的醫(yī)療衛(wèi)生部門應(yīng)盡量選擇質(zhì)量較好的儀器和設(shè)備進(jìn)行病原體檢測。同時，相+ 關(guān)的醫(yī)療衛(wèi)生部門還需要定期對檢測人員進(jìn)行培訓(xùn)和考核，以提高其專業(yè)素質(zhì)及對檢測知識的認(rèn)知水平，能夠嚴(yán)格遵守相關(guān)的操作規(guī)范和流程完成檢測工作，從而有效地提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確率[9-10]。在采用快速實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)對患者進(jìn)行相關(guān)的檢測時，應(yīng)根據(jù)為其采集樣品基質(zhì)形式（如痰液、血清、血液、尿液及固體組織等）的不同應(yīng)用不同的試紙條、樣品墊及結(jié)合墊等檢測物品，以免樣品的粘稠度及酸堿度對檢測結(jié)果造成影響。

4 小結(jié)

快速實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)是臨床上常用的診斷技術(shù)，在進(jìn)行病原體檢測方面具有較高的準(zhǔn)確率。臨床實(shí)踐證實(shí)，使用快速實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)進(jìn)行病原體檢測能快速確認(rèn)患者感染的病原體，有利于臨床醫(yī)師準(zhǔn)確地判定其病情和為其制定合理的治療方案。同時，使用快速實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)檢測病原體還具有操作簡單、得出實(shí)驗(yàn)結(jié)果的速度快等優(yōu)點(diǎn)。目前，臨床上主要使用膠體金免疫層析快速診斷技術(shù)、蛋白質(zhì)組快速診斷技術(shù)等實(shí)驗(yàn)室快速診斷技術(shù)進(jìn)行病原體檢測。快速實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)的應(yīng)用在一定程度上緩解了基層醫(yī)院診斷疾病困難、誤診率高及漏診率高等問題。需要注意的是，用快速實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)進(jìn)行病原體檢測時，可受到檢測儀器的質(zhì)量、試紙的質(zhì)量、檢測人員的技術(shù)等因素的影響。相關(guān)的醫(yī)療衛(wèi)生部門應(yīng)盡量選擇質(zhì)量較好的儀器和設(shè)備進(jìn)行病原體檢測，并定期對檢測人員進(jìn)行培訓(xùn)和考核，以有效地提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確率。

總之，膠體金免疫層析快速診斷技術(shù)、蛋白質(zhì)組快速診斷技術(shù)等快速實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)在進(jìn)行病原體檢測方面具有較高的應(yīng)用價值，值得在臨床上推廣應(yīng)用。

[1] 馮曉平,石鋒,楊玥濤，等.一種膠體金免疫層析試條檢測犬利什曼原蟲感染的效果評價[J].國際醫(yī)學(xué)寄生蟲病雜志,2015,42(4):189-192.

[2] 楊玥濤,石鋒,高春花，等.快速檢測內(nèi)臟利什曼病特異抗體膠體金免疫層析試條方法的建立與效果評價[J].國際醫(yī)學(xué)寄生蟲病雜志,2014,41(3):121-124.

[3] 陳陽,曹向可,朱壯春，等.DIGFA檢測牙鲆腹水病病原的初步研究[J].畜牧與飼料科學(xué),2010,31(9):97-98.

[4] 高春花,石鋒,楊明濤，等.膠體金免疫層析試條法檢測囊型棘球蚴病患者血清特異性抗體效果評價[J].國際醫(yī)學(xué)寄生蟲病雜志,2010,37(1):21-24.

[5] 楊銘,章粉明,單國棟等.蛋白指紋圖譜技術(shù)分析炎癥性腸病血清蛋白質(zhì)組學(xué)特征的診斷價值[J].中華消化雜志,2015,35(9):615-619.

[6] 黃華,陳林興.蛋白質(zhì)指紋圖譜技術(shù)在診斷白血病四種分型中的應(yīng)用[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2015,30(2):173-176.

[7] 王琳,翁麗珍,陳曉紅等.應(yīng)用蛋白質(zhì)指紋圖譜技術(shù)快速鑒別診斷菌陰肺結(jié)核[J].中國人獸共患病學(xué)報,2014,30(7):688-691.

[8] 溫春麗,蔚洪恩,胡風(fēng)云.難治性癲癎患者血清蛋白質(zhì)指紋圖譜及與預(yù)后的臨床研究[J].癲癇與神經(jīng)電生理學(xué)雜志,2013,22(5):267-270.

[9] 薛添,趙軼君,董潔，等.斑點(diǎn)酶免疫滲濾法定量檢測雌三醇的實(shí)驗(yàn)研究[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志,2013,29(8):874-876,881.

[10] 賈寧,劉剛,索繼江，等.免疫滲濾法在甲型流感病毒篩查中的應(yīng)用[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2010,20(19):2914-2915.