李晨陽(yáng)　高慧　陳燕　譚為　趙軍　徐芳

摘要：目的 建立新疆圓柏葉中蘆丁的含量測(cè)定方法，為其質(zhì)量控制提供依據(jù)。方法 采用高效液相色譜法測(cè)定。色譜條件：Phenomenex ODS-A色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.036 mol/L磷酸二元梯度洗脫；流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)：266 nm。結(jié)果 蘆丁在0.022～0.88 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系（r=0.999 9），加樣回收率為101.52%，RSD=1.67%（n=6）；樣品溶液在32 h內(nèi)穩(wěn)定。結(jié)論 該方法操作簡(jiǎn)便，重復(fù)性好，可用于規(guī)范和控制新疆圓柏葉的藥材質(zhì)量。

關(guān)鍵詞：新疆圓柏；蘆??；高效液相色譜法；含量測(cè)定

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.02.025

中圖分類號(hào)：R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1005-5304（2016）02-0090-03

Content Determination of Rutin in Leaves of Juniperus Sabina L. LI Chen-yang1， GAO Hui2， CHEN Yan1， TAN Wei1， ZHAO Jun1， XU Fang1 （1. Key Laboratory of Uyghur Medicine， Xinjiang Institute of Materia Medica， Urumqi 830004， China； 2. Yili Institute for Food and Drug Control， Yining 835000， China）

Abstract： Objective To establish an HPLC method for content determination of rutin in leaves of Juniperus sabina L.； To provide references for its quality control. Methods The HPLC separation was performed on a Phenomenex ODS-A column （250 mm×4.6 mm， 5 μm） in gradient elute mode with a mixture consisting of acetonitrile and 0.036 mol/L phosphate acid solution at 30 ℃； the flow rate was 1.0 mL/min； the detection wavelength was set at 266 nm. Results Rutin was in a good linear range with peak area within 0.022–0.88 μg （r=0.999 9）， and the average recovery of rutin was 101.52% （RSD=1.67%， n=6）. The properties of sample solution kept steady within 32 hours. Conclusion The method is simple and reproducible， and can be used for the quality standardization and control in leaves of Juniperus sabina L.

Key words： Juniperus sabina L.； rutin； HPLC； content determination

新疆圓柏Juniperus sabina L.，又名砂地柏、臭柏，為柏科圓柏屬常綠匍匐灌木，主要分布于新疆、內(nèi)蒙古、甘肅等地[1]。新疆圓柏葉在新疆民間常用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、布氏桿菌病、皮膚瘙癢、小便不利、迎風(fēng)流淚、視物不清、頭痛等，收載于《維吾爾藥志》等醫(yī)藥文獻(xiàn)中[2]。黃酮類成分是柏科圓柏屬植物的主要特征性成分之一[3-5]。目前對(duì)新疆圓柏的研究主要集中在化學(xué)成分及人工種植技術(shù)上[6-8]。為開(kāi)發(fā)這一植物資源，提高其藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，本研究采用高效液相色譜法（HPLC）對(duì)不同產(chǎn)地新疆圓柏葉中的蘆丁進(jìn)行含量測(cè)定。

1 儀器與試藥

LC-10ATvp高效液相色譜儀，SPD-10Avp紫外可

蘆丁對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)100080-200707，純度92.5%）；乙腈，色譜純（Fisher）；甲醇，色譜純（Fisher）；水，屈臣氏純凈水；磷酸等其他試劑為分析純。新疆圓柏葉于2014年6月在新疆烏魯木齊、伊犁、阿勒泰等地采集，由新疆維吾爾自治區(qū)藥物研究所何江副研究員鑒定為新疆圓柏Juniperus sabina L.的葉。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Phenomenex ODS-A柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.036 mol/L磷酸二元梯度洗脫（0 min→20 min→25 min，乙腈14%→20%→14%）；流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：266 nm；進(jìn)樣量：10 μL。

2.2 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

蘆丁理論塔板數(shù)n=5.54（tR/Wh/2）2=19 658，說(shuō)明在選定條件下，色譜柱的柱長(zhǎng)、載體性能及色譜柱填充均符合要求，測(cè)定效果良好。蘆丁分離度R=2（tR2-tR1）÷（W1+W2）=2.53，符合2010年版《中華人民共和國(guó)藥典》規(guī)定分離度應(yīng)大于1.5的要求。在上述色譜條件下，蘆丁的色譜峰與其他成分分離度良好。色譜圖見(jiàn)圖1。

2.3 供試品溶液的制備

取新疆圓柏葉，粉碎過(guò)40目篩，脫脂，取0.1 g，精密稱定，置25 mL量瓶中，加入甲醇20 mL，超聲提?。üβ?80 W，頻率25 kHz）30 min，放至室溫，加甲醇定容至刻度，用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得。

2.4 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取蘆丁對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含0.22 mg的蘆丁對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。

2.5 線性關(guān)系考察

精密量取蘆丁對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、4.0 mL，分別置10 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密吸取各對(duì)照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定，記錄峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=17 720 172.68X-8910.90，r=0.999 9，表明蘆丁在0.022～0.88 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 日內(nèi)及日間精密度試驗(yàn)

取同一份供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次測(cè)定，測(cè)得蘆丁的RSD=0.83%；將上述藥材連續(xù)6 d在相同時(shí)間段取樣處理并測(cè)定，測(cè)得蘆丁RSD=2.32%。結(jié)果表明方法精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

準(zhǔn)確稱取同一樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液，并按上述色譜條件測(cè)定，測(cè)得蘆丁RSD=2.59%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，分別在0、2、5、8、24、32 h進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得蘆丁RSD=1.05%，結(jié)果表明供試品溶液在32 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量樣品粉末6 份，每份約0.05 g，分別加入0.088 mg/mL蘆丁對(duì)照品溶液1.9 mL，再加入甲醇20 mL，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液并測(cè)定，結(jié)果蘆丁平均回收率為101.52%，RSD=1.67%，見(jiàn)表1。

2.10 樣品含量測(cè)定

取13批新疆圓柏葉樣品粉末，約0.1 g，平行3份，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測(cè)定蘆丁含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

3 討論

新疆圓柏藥材中含有大量油脂類成分，這些成分的存在影響蘆丁含量測(cè)定，故測(cè)定前必須先對(duì)藥材進(jìn)行脫脂處理。供試品提取方法考察了不同提取溶劑、提取次數(shù)、提取時(shí)間及溶劑倍數(shù)對(duì)加熱回流法的影響，確定最佳提取方法為0.1 g藥材加入30 mL甲醇溶液，加熱回流2次，每次1.5 h，測(cè)得蘆丁含量為2.82 mg/g。同時(shí)考察了不同提取溶劑、提取時(shí)間及溶劑倍數(shù)對(duì)超聲提取的影響，確定最佳提取方法為0.1 g藥材加入20 mL甲醇，超聲0.5 h，測(cè)得蘆丁含量為3.29 mg/g。從樣品提取率及節(jié)約時(shí)間考慮，確定樣品制備方法為0.1 g藥材加入20 mL甲醇，超聲0.5 h。流動(dòng)相選擇考察了甲醇-磷酸水溶液和乙腈-磷酸水溶液，結(jié)果表明，乙腈-磷酸水溶液對(duì)蘆丁的分離度和峰形更好，故采用乙腈-磷酸水溶液系統(tǒng)[9]。

本試驗(yàn)采樣基數(shù)充足、范圍廣，涵蓋地產(chǎn)新疆圓柏多數(shù)產(chǎn)地。13批新疆圓柏葉中蘆丁含量差異較大，說(shuō)明不同產(chǎn)地新疆圓柏葉的化學(xué)成分含量有差異，可能受氣候、環(huán)境、土壤和海拔等因素的影響。本研究結(jié)果可為新疆圓柏葉藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高及其市場(chǎng)規(guī)范提供依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

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（收稿日期：2015-04-08）

（修回日期：2015-04-16；編輯：陳靜）