陳義飛，徐佳璐

(1.黑龍江省大慶市糧食質(zhì)量檢驗(yàn)監(jiān)測(cè)站，黑龍江 大慶 163001;2.哈爾濱國(guó)家糧食質(zhì)量監(jiān)測(cè)中心，黑龍江 哈爾濱 150060)

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大豆水溶性蛋白檢測(cè)研究

陳義飛1，徐佳璐2

(1.黑龍江省大慶市糧食質(zhì)量檢驗(yàn)監(jiān)測(cè)站，黑龍江 大慶 163001;2.哈爾濱國(guó)家糧食質(zhì)量監(jiān)測(cè)中心，黑龍江 哈爾濱 150060)

摘要：大豆是主要的飼用糧品種，水溶性蛋白是重要的檢測(cè)指標(biāo)?，F(xiàn)通過比較試驗(yàn)研究了凱氏定氮法測(cè)定大豆水溶性蛋白，提取過程中溫度、時(shí)間等因素對(duì)實(shí)驗(yàn)最終結(jié)果的影響，找出了最佳的實(shí)驗(yàn)條件和方法，為大豆水溶性蛋白檢測(cè)方法的選擇提供了依據(jù)。

關(guān)鍵詞：大豆；水溶性蛋白；檢測(cè)；研究

1儀器與材料

主要儀器設(shè)備：KDY-9820凱氏定氮儀；perten3100錘式旋風(fēng)磨、JA-203N千分之一電子天平；可調(diào)速離心機(jī)、HY4調(diào)速多用振蕩器等。樣品與試劑：選取黑龍江地產(chǎn)大豆，除去雜質(zhì)作為樣品。試劑有20g/L硼酸溶液；40g/L氫氧化鈉溶液；0.10mol/L鹽酸；濃硫酸(分析純)。

2實(shí)驗(yàn)方法

將除雜后的大豆樣品用錘式旋風(fēng)磨進(jìn)行粉碎后通過60目篩，通過率90%以上。每次實(shí)驗(yàn)用千分天平準(zhǔn)確稱取5g樣品，加入一定量蒸餾水進(jìn)行溶解，在一定溫度條件下震蕩提取一段時(shí)間，萃取完成后將溶液轉(zhuǎn)移至容量瓶中并定容至250mL，用凱氏定氮儀測(cè)定其蛋白質(zhì)含量即為樣品的水溶性蛋白含量，分別記錄消耗滴定液的體積，計(jì)算檢驗(yàn)結(jié)果。

提取溫度對(duì)水溶性蛋白測(cè)定結(jié)果的影響實(shí)驗(yàn)。用分析天平分別準(zhǔn)確稱取5.000g樣品5份，編號(hào)為A1～A5。分別置于250mL具塞磨口三角瓶中，分別向其中加入蒸餾水各200mL，充分搖勻充分分散后，分別將其置于溫度設(shè)定為20℃(室溫)、30℃、40℃、50℃、60℃的恒溫水浴鍋中，分別進(jìn)行提取2h。提取完成后經(jīng)過離心，轉(zhuǎn)移至容量瓶中定容，最后進(jìn)行消化并測(cè)定其蛋白含量。

提取時(shí)間對(duì)水溶性蛋白測(cè)定結(jié)果的影響實(shí)驗(yàn)。用分析天平分別準(zhǔn)確稱取5.000g樣品5份，編號(hào)為B1～B5。分別置于250mL具塞磨口三角瓶中，分別向其中加入蒸餾水各200mL，充分搖勻(注意勿使樣品過多的粘于瓶壁上)充分分散后，將其置于溫度設(shè)定為40℃的恒溫水浴鍋中，分別進(jìn)行提取30min、60min、90min、120min和180min。提取完成后分別經(jīng)過離心，轉(zhuǎn)移至容量瓶中定容，最后進(jìn)行消化并測(cè)定其蛋白含量。分別記錄消耗滴定液的體積，計(jì)算檢驗(yàn)結(jié)果。

提取次數(shù)對(duì)水溶性蛋白測(cè)定結(jié)果的影響實(shí)驗(yàn)。用分析天平分別準(zhǔn)確稱取5.000g樣品5份，編號(hào)為C1～C5。分別置于250mL具塞磨口三角瓶中。對(duì)C1進(jìn)行一次提取，向C1中加入蒸餾水200mL，充分搖勻后，將其置于溫度設(shè)定為40℃的恒溫水浴鍋中進(jìn)行提取2h。對(duì)C2進(jìn)行2次提取，向C2中加入蒸餾水100mL，充分搖勻后，將其置于溫度設(shè)定為40℃的恒溫水浴鍋中進(jìn)行提取1h之后，離心轉(zhuǎn)移出溶液，向剩余樣品中繼續(xù)加入蒸餾水100mL，重復(fù)上述操作。用同樣的方法分別對(duì)C3～C5進(jìn)行3～5次的提取，提取用蒸餾水的總量均為200mL，總提取時(shí)間均為2h，每次提取后都進(jìn)行離心。將5份樣品都提取完畢后，定容、消化并測(cè)定其蛋白含量。分別記錄消耗滴定液的體積，計(jì)算檢驗(yàn)結(jié)果。

3結(jié)果與分析

提取溫度對(duì)水溶性蛋白測(cè)定結(jié)果的影響：通過計(jì)算得到各樣品測(cè)得值如下：A1水溶性蛋白含量為28.9%，A2水溶性蛋白含量為31.2%，A3水溶性蛋白含量為32.6%，A4水溶性蛋白含量為32.5%，A5水溶性蛋白含量為32.3%。從檢測(cè)數(shù)據(jù)可以看出提取溫度為20℃、30℃、40℃時(shí)，水溶性蛋白含量隨溫度上升而呈上升趨勢(shì)，在提取溫度為40℃、50℃、60℃時(shí)，無(wú)明顯變化。即水溶性蛋白含量在40℃時(shí)達(dá)到高峰，溫度的提高已經(jīng)不能提升水溶性蛋白的萃取效果。

提取次數(shù)對(duì)水溶性蛋白測(cè)定結(jié)果的影響：通過計(jì)算得到各樣品測(cè)得值如下：B1水溶性蛋白含量為26.7%，B2水溶性蛋白含量為28.5%，B3水溶性蛋白含量為31.8%，B4水溶性蛋白含量為32.7%，B5水溶性蛋白含量為32.5%。從檢測(cè)數(shù)據(jù)可以看出提取時(shí)間為30min、60min、90min時(shí)，水溶性蛋白含量隨提取時(shí)間的延長(zhǎng)而呈上升趨勢(shì)，在提取時(shí)間為90min、120min和180min時(shí)，無(wú)明顯變化。也就是說(shuō)，水溶性蛋白含量在提取時(shí)間達(dá)到90min時(shí)達(dá)到高峰，提取時(shí)間延長(zhǎng)已經(jīng)不能提升水溶性蛋白的萃取效果。

提取時(shí)間對(duì)水溶性蛋白測(cè)定結(jié)果的影響：通過計(jì)算得到各樣品測(cè)得值如下：C1水溶性蛋白含量為32.4%，C2水溶性蛋白含量為33.2%，C3水溶性蛋白含量為33.5%，C4水溶性蛋白含量為33.8%，C5水溶性蛋白含量為33.7%。從檢測(cè)數(shù)據(jù)可以看出，使用相同水量，相同提取時(shí)間，不同提取次數(shù)時(shí)，提取次數(shù)為1次、2次、3次、4次時(shí)，水溶性蛋白含量隨提取次數(shù)的增加而呈上升趨勢(shì)，且上升的幅度不斷減小，在提取次數(shù)增加到5次時(shí)，無(wú)明顯變化。也就是說(shuō)，水溶性蛋白含量在提取4次時(shí)達(dá)到高峰，提取次數(shù)增加已經(jīng)不能提升水溶性蛋白的萃取效果。

4結(jié)論

通過對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析可知，對(duì)大豆水溶性蛋白的提取過程中，溫度、時(shí)間以及提取次數(shù)對(duì)提取結(jié)果均有不同程度的影響。其中，提取的最佳溫度為40℃，再提高溫度對(duì)提取的幫助不大；提取的時(shí)間以90min為宜；提取次數(shù)以兩次為宜，增加次數(shù)提取效果提升微弱，還可能因?yàn)槎啻坞x心轉(zhuǎn)移操作不當(dāng)反而降低提取效果。因此，水溶性蛋白的最佳提取條件為：將樣品分兩次提取之后于40℃下恒溫提取90min。

收稿日期:2016-02-06

作者簡(jiǎn)介：陳義飛(1972-)，男，黑龍江大慶人，大專，工程師，主要從事糧食質(zhì)量檢驗(yàn)監(jiān)測(cè)方面工作。

doi:10.19369/j.cnki.2095-9737.2016.07.063

中圖分類號(hào)：S816.42

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：2095-9737(2016)07-0070-01