俞俊霞戴小波*

(1 無錫市惠山區(qū)人民醫(yī)院病理科，江蘇 無錫 214187；2 南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院病理科，江蘇 南京 210008)

高危型HPV和其E6、E7 mRNA與宮頸病變的相關(guān)性研究

俞俊霞1戴小波2*

(1 無錫市惠山區(qū)人民醫(yī)院病理科，江蘇 無錫 214187；2 南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院病理科，江蘇 南京 210008)

目的探討高危型HPV和其E6、E7 mRNA與宮頸病變（CIN1、CIN2、CIN3、ICC）的相關(guān)性。方法隨機選擇120例宮頸病變患者組織標(biāo)本，檢測高危型HPV E6、E7 mRN；高危型HPV采用熒光PCR定量檢測。分析高危型HPV和其E6、E7 mRNA與宮頸病變（CIN1、CIN2、CIN3、ICC）的相關(guān)性。結(jié)果在宮頸病變CIN1、CIN2、CIN3、ICC中，高危型HPV陽性表達率分別為87.5%、91.2%、93.3和95.8%。宮頸CIN1、CIN2，宮頸CIN2、CIN3，宮頸CIN3、ICC比較差異不顯著（P＞0.05）；高危型HPV的E6、E7 mRNA陽性表達率分別為15.6%、35.3%、70.0和95.8%。宮頸CIN1、CIN2，宮頸CIN2、CIN3，宮頸CIN3、ICC比較差異顯著（P＜0.05）。結(jié)論高危型HPV與宮頸病變無相關(guān)性；高危型HPV E6、E7 mRNA與宮頸病變有相關(guān)性。

E6、E7 mRNA；宮頸病變；高危型；人乳頭瘤病毒

宮頸癌是唯一病因明確的癌癥，研究證實：99.7%的宮頸癌與高危型人乳頭瘤病毒（HPV）感染有關(guān)。高危型HPV的持續(xù)性感染是宮頸組織發(fā)生癌前病變直至癌變的主要病因。宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展有一個漸進的演變過程，從高危型HPV病毒感染，到組織學(xué)低度癌前病變（CIN1），到高度癌前病變（CIN2、3），再到浸潤癌（ICC），時間跨度可以達到5～10年，所以有效、積極地早期篩查，能夠顯著降低宮頸癌的發(fā)病率。HPV E6、E7 mRNA致癌基因產(chǎn)物是致癌的關(guān)鍵因素，E6、E7 mRNA與組織病理診斷上宮頸病變嚴(yán)重程度的關(guān)系尚未證實[1]。為探討高危型HPV和其E6、E7 mRNA與宮頸病變的相關(guān)性，找到精準(zhǔn)的篩查宮頸“病變”方法，進行以下研究。

1 資料與方法

1.1 資料：隨機選擇我院2014年至2016年120例宮頸病變患者的手術(shù)切除標(biāo)本，年齡26～72歲，平均45.6歲。病理組織學(xué)分級：在宮頸病變CIN1 32例CIN2 34例、CIN3 30例、ICC 24例。

1.2 方法

1.2.1 宮頸病變組織學(xué)檢查：所有宮頸病變組織標(biāo)本，10%福爾馬林固定，石蠟包埋，4 μm連續(xù)組織切片，常規(guī)HE染色，進行組織學(xué)診斷。

1.2.2 高危型HPV熒光PCR定量檢測：采用凱普生物科技公司 “高危型人乳頭瘤病毒核酸檢測試劑盒（熒光PCR）”檢測患者宮頸脫落細胞HPV DNA載量，共檢測等13種高危型。以ROCHE Lightcycler480擴增儀檢測和判讀結(jié)果。

1.2.3 HPV E6、E7 mRNA熒光PCR定性檢測：采用Hologic 的Aptma HPV Assay試劑盒和轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)等溫核酸擴增（TMA）方法。檢測平臺采用Hologic公司提供的Panther全自動一體化平臺。樣本采用1 mL ThinPrep細胞保存液。宮頸病變診斷按照宮頸病變組織學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果按照試劑盒說明進行。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析：采用SPSS18.進行分析，計數(shù)資料采用“%”表示，組間比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié) 果

宮頸病變組織中高危型HPV和其E6、E7 mRNA表達比較：在宮頸病變CIN1、CIN2、CIN3、ICC中，高危型HPV陽性表達率分別為87.5%、91.2%、93.3和95.8%。宮頸CIN1、CIN2，宮頸CIN2、CIN3，宮頸CIN3、ICC比較差異不顯著（P＞0.05）；高危型HPV的E6、E7 mRNA陽性表達率分別為15.6%、35.3%、70.0和95.8%。宮頸CIN1、CIN2，宮頸CIN2、CIN3，宮頸CIN3、ICC比較差異顯著（P＜0.05），見表1。

3 討 論

自從20世紀(jì)90年代末出現(xiàn)的第一個高危型HPV病毒檢測試劑盒—基于雜交捕獲技術(shù)的Digene Hybrid Capture2，而2012年批準(zhǔn)的Aptima HPV是唯一針對高危型HPV病毒E6、E7 mRNA的檢測，屬于新一代的檢測[2]。高危型HPV E6、E7 mRNA基因是高危型HPV病毒的兩個致癌基因，其通過轉(zhuǎn)錄mRNA實現(xiàn)癌蛋白的表達，從而改變細胞正常代謝，導(dǎo)致細胞發(fā)生病變直至癌變[3]。本研究顯示：在宮頸病變CIN1、CIN2、CIN3、ICC中，高危型HPV陽性表達率分別為87.5%、91.2%、93.3和95.8%。宮頸CIN1、CIN2，宮頸CIN2、CIN3，宮頸CIN3、ICC比較差異不顯著（P＞0.05）；高危型HPV的E6、E7 mRNA陽性表達率分別為15.6%、35.3%、70.0和95.8%。宮頸CIN1、CIN2，宮頸CIN2、CIN3，宮頸CIN3、ICC比較差異顯著（P＜0.05）。高危型HPV與宮頸病變無相關(guān)性；高危型HPV E6、E7 mRNA與宮頸病變有相關(guān)性，E6、E7 mRNA水平與組織學(xué)病變程度之間存在正相關(guān)性。提示：在病毒感染的早期，病毒基因在細胞內(nèi)為游離狀態(tài)，此時E6、E7基因處于靜默期，不表達或低表達mRNA，這個階段細胞不會發(fā)生高級別病變，90%以上一過性HPV感染大多處于這個階段；當(dāng)HPV病毒發(fā)生持續(xù)感染后，病毒基因和人類基因發(fā)生整合，E6、E7基因被激活，利用宿主細胞大量轉(zhuǎn)錄mRNA、從而導(dǎo)致大量癌蛋白的表達，細胞發(fā)生高級別病變的風(fēng)險大大增加。提示：高危型 HPV病毒DNA存在，不一定會導(dǎo)致細胞發(fā)生癌變；只有當(dāng)病毒持續(xù)性大量轉(zhuǎn)錄E6、E7mRNA，從而大量表達E6、E7癌蛋白，才會導(dǎo)致細胞發(fā)生癌變。

表1 宮頸病變組織中高危型HPV和其E6、E7 mRNA表達比較

相比細胞學(xué)檢測，第一代檢測高危型HPVDNA的方法有效提高了癌前病變（CIN2，3）檢測的靈敏度，極大改善了“漏診”的問題，但同時造成了大量“過診”：由于80%以上的婦女一生中都會感染HPV病毒，而90%以上的感染是一過性感染，在8～24個月內(nèi)，被自身的免疫系統(tǒng)清除，只有不到10%會發(fā)展為持續(xù)性感染[4]。HPV DNA的檢測方法更多地是檢測感染，大量的陽性結(jié)果都是沒有發(fā)生高級別病變的一過性感染，檢測特異性較低。而這些“假陽性”結(jié)果，會給“患者”帶來不必要的心理壓力，并導(dǎo)致一系列家庭和諧和醫(yī)患關(guān)系等社會問題。

包括中國在內(nèi)的全球各個醫(yī)學(xué)組織在制定宮頸癌篩查策略時的核心價值是要平衡“篩查益處”和“潛在風(fēng)險”這兩個方面，最理想的篩查策略就是要實現(xiàn)：①篩查益處最大化：發(fā)現(xiàn)那些有可能發(fā)展為癌癥的宮頸癌前病變。②潛在風(fēng)險最小化：避免對一過性HPV病毒感染導(dǎo)致的良性病變的檢測和過度治療（篩查導(dǎo)致的對“患者”的潛在傷害：心理壓力，身體侵入性創(chuàng)傷，醫(yī)療負擔(dān)）。本研究證實：檢測高危型HPV病毒的E6、E7 mRNA相比檢測高危型HPV DNA，可以更加精準(zhǔn)的篩查宮頸病變，有效降低對一過性感染的檢出率，對患者潛在風(fēng)險最小化，可以作為宮頸癌篩查最理想的篩查策略。

[1] 杜彩英,李芳.人乳頭瘤病毒DNA及E6/E7 mRNA檢測在宮頸病變診斷中的比較研究[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志,2015,23(4):38-40.

[2] 張生枝,邵華江,馬建婷.人乳頭瘤病毒 E6/E7mRNA 檢測在宮頸病變篩查中的應(yīng)用價值[J].中國實驗診斷學(xué),2014,18(4):581-583.

[3] 鄭智,呂杰強.高危HPV E6 /E7 mRNA 對宮頸病變診斷價值的研究[J].醫(yī)學(xué)研究雜志,2015,44(8):125-128.

[4] 張博,張穎,牛力春,等.液基細胞學(xué)聯(lián)合HPVmRNA檢測對宮頸癌的診斷價值[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2016,24(1):119-122.

R737.33

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1671-8194（2016）33-0151-02

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