肖 婭，劉喜綱

(河北省中藥研究與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所，承德 067000)

綜 述

梔子金花丸有效成分含量測定的研究進(jìn)展

肖 婭，劉喜綱*

(河北省中藥研究與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所，承德 067000)

梔子金花丸是《中國藥典》收錄的清熱瀉火藥，由8味中藥以藥材原粉入藥，有效成分較多。近年來該制劑中的有效成分的含量測定逐漸被諸多學(xué)者廣泛研究，其中梔子苷、黃芩苷、鹽酸小檗堿、大黃蒽醌類等成分研究相對(duì)較多，主要采用HPLC法、毛細(xì)管電泳法、UPLC法、單波長法或多波長HPLC法測定，測定一種或多種有效成分的含量。本文系統(tǒng)的綜述了梔子金花丸中多種有效成分含量測定方法的研究進(jìn)展，為其體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)過程的研究和質(zhì)量評(píng)價(jià)提供依據(jù)。

梔子金花丸，有效成分，黃芩苷，梔子苷，鹽酸小檗堿，大黃蒽醌類

梔子金花丸由梔子、黃芩、黃連、黃柏、大黃、金銀花、知母、天花粉8味藥材組成，收載于《中國藥典》2015年版一部[1]。臨床用于治療牙齦腫痛，口舌生瘡，咽喉腫痛，目赤眩暈，肺胃熱盛，吐血衄血，大便秘結(jié)等病癥。藥理研究表明，該制劑中有效成分有黃芩苷、梔子苷、鹽酸小檗堿、大黃蒽醌類、西紅花苷-1、知母皂苷BⅡ、芒果苷等成分。近年來，多位研究者對(duì)黃芩苷、鹽酸小檗堿及大黃蒽醌等成分進(jìn)行了測定，其中有單一成分或多種成分含量的測定。本文擬對(duì)其有效成分含量測定方法進(jìn)行綜述，以期通過多定量指標(biāo)完善、提高梔子金花丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，檢測有效成分含量變化，從而有效控制產(chǎn)品的質(zhì)量。

1 梔子金花丸中單味藥材的含量測定

1.1 黃芩藥材的含量測定 黃芩苷是藥材黃芩的主要有效成分，關(guān)于梔子金花丸中黃芩苷含量測定方法的研究報(bào)道有很多，大多采用HPLC法，也有采用毛細(xì)管電泳法進(jìn)行測定的。劉元媛[2]等采用超聲法提取梔子金花丸中黃芩苷，再用HPLC法測定含量，采用Hypersil ODS(200 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱，以甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)為流動(dòng)相，檢測波長280 nm，柱溫25 ℃，平均回收率為100.4%(RSD為1.2%)；林輝[3]改進(jìn)了黃芩苷測定的流動(dòng)相系統(tǒng)，采用甲醇-水-冰醋酸(45∶55∶1)為流動(dòng)相，避免了使用含有磷酸的溶液損壞泵頭的問題，在檢測波長為274 nm，柱溫40 ℃下，黃芩苷在2.072～10.360 μg的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.999 6)，平均回收率為97.87%(RSD為0.55%)。為了減少樣品用量，降低分析成本，楊慧文等[4]采用毛細(xì)管電泳法測定梔子金花丸中黃芩苷的含量，采用未涂層彈性融硅石英毛細(xì)管柱(60 cm×75 μm，有效長度52 cm),40 mmol/L的硼砂溶液(pH 9.0)為運(yùn)行緩沖液，檢測波長280 nm，黃芩苷的平均回收率為96.7%(RSD為2.15%)。

為了更全面反映梔子金花丸的質(zhì)量，牛德斌[5]對(duì)丸劑中黃芩藥材所含的多種有效成分進(jìn)行測定，以HPLC法測定黃芩苷和漢黃芩苷的含量。采用Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以甲醇-0.3 %冰醋酸溶液(43∶57)為流動(dòng)相，檢測波長為275 nm，流速為1 ml/min，柱溫35 ℃，黃芩苷和漢黃芩苷的平均回收率分別為98.85%(RSD為1.63%)、97.56%(RSD為1.95%)。黎曉玲等[6]采用HPLC同時(shí)測定梔子金花丸中黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素4種成分的含量，以Agilent Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)為色譜柱，流動(dòng)相為乙腈-0.1 %磷酸，梯度洗脫，檢測波長為278 nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30 ℃，黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素及漢黃芩素的平均回收率分別為98.40%(RSD為0.45%)、98.66%(RSD為1.41%)、98.88%(RSD為1.48%)和98.97%(RSD為1.45%)。

1.2 梔子藥材的含量測定 梔子金花丸處方中梔子的量較大，其有效成分是梔子苷和西紅花苷-1。《中國藥典》2015年版[1]中關(guān)于梔子金花丸中梔子苷的含量測定標(biāo)準(zhǔn)是用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，以乙腈-水(11∶89)為流動(dòng)相，檢測波長為238 nm。王曉可等[7]采用毛細(xì)管電泳法，以未涂層彈性融硅石英毛細(xì)管柱(60 cm×75 μm ID，有效長度52 cm)；以25 mmol/L硼砂+25 mmol/L SDS+4 mmol/L磺丁基-β-環(huán)糊精+8%(體積分?jǐn)?shù))甲醇為緩沖液，檢測波長238 nm，以維生素B1為內(nèi)標(biāo)，結(jié)果梔子苷在21.0～63.0 μg/ml的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.999 9)，加樣回收率100.5%(RSD為0.56%)。嚴(yán)安定等[8]建立用HPLC法同時(shí)測定不同品種梔子藥材及梔子金花丸中梔子苷含量方法，采用Hypersil ODS色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，乙腈-水(15∶85)為流動(dòng)相，檢測波長為238 nm，結(jié)果梔子苷與其相鄰雜質(zhì)峰能完全分離，梔子苷在2.5～80 μg/ml質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.999 6)，平均加樣回收率為100.05%(RSD為1.58%)。

梔子藥材中含量較多的另一類成分是西紅花苷，其是一類特殊的水溶性類胡蘿卜素，有控制心血管系統(tǒng)疾病、抑制腫瘤細(xì)胞增值、保護(hù)神經(jīng)和肝臟的作用。其中西紅花苷-1含量最高(含量約為梔子藥材中總西紅花苷的87%)，因此西紅花苷-1含量的高低可能會(huì)對(duì)制劑的藥理活性具有一定影響。于是陳陽等[9]采用UPLC法，選用Acquity UPLC BEH Shield RP C18(50 mm×2.1 mm，1.7 μm)色譜柱，以乙腈-水為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫，在440 nm檢測波長下，測得西紅花苷-1的線性范圍為2.5～40.0 μg/ml，計(jì)算西紅花苷-1峰面積的RSD為2.13%，回收率為98.5%，由此表明該方法準(zhǔn)確、快速、重復(fù)性好。

1.3 黃連藥材的含量測定 處方中黃連的主要有效成分是鹽酸小檗堿，王曉可等[10]采用未涂層彈性融硅石英毛細(xì)管柱(60 cm×75 μm×52 cm)，以0.2 mol/L磷酸二氫鈉溶液-無水乙醇(50∶50)(pH 5.50)為緩沖液，檢測波長265 nm，結(jié)果梔子金花丸中所含鹽酸小檗堿的濃度在11.0～44.0 mg/ml的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.999 3)，平均回收率為100.0%(RSD為1.21%)。

1.4 大黃藥材的含量測定 大黃是處方中的主藥，所含有效成分較多。楊躍龍[11]采用RP-HPLC法對(duì)梔子金花丸中大黃藥材的大黃素和大黃酚進(jìn)行測定，色譜柱為Dikma C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)，流動(dòng)相為甲醇-水-冰醋酸(80∶20∶1)，檢測波長為254 nm，柱溫為25 ℃。大黃素、大黃酚的平均回收率分別為99.20%(RSD為0.4%)、99.30%(RSD為0.2%)。

1.5 黃柏藥材的含量測定 處方中的黃柏藥材，其化學(xué)成分主要有生物堿類、甾醇類、檸檬苷素類及其他。而鹽酸黃柏堿為黃柏中的特有成分，目前在黃連及小檗屬多種植物中尚未發(fā)現(xiàn)。黃麗玫等[12]建立了專屬于含黃柏及其復(fù)方制劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)方法。其研究以鹽酸黃柏堿為指標(biāo)，采用反相高效液相色譜法(RP-HPLC)，以Diamonsil-C18柱，用乙腈-0.1%磷酸水溶液洗脫，在284 nm的波長下檢測到鹽酸黃柏堿峰的拖尾因子為0.86，且與其他組分峰的分離度大于1.5，測得其平均回收率為100.8%，RSD為0.62%，結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確可靠。

1.6 知母藥材的含量測定 藥材知母所含化學(xué)成分種類較多，主要有甾體皂苷、雙苯吡酮類、黃酮類、木質(zhì)素類、有機(jī)酸等。芒果苷是主要的雙苯吡酮類成分，是知母中主要的抗炎、抗病毒和抗氧化成分。為進(jìn)一步評(píng)價(jià)梔子金花丸制劑的質(zhì)量，溫金蓮等[13]采用反相高效液相色譜法(RP-HPLC)對(duì)制劑中知母所含的芒果苷進(jìn)行了測定，以Diamonsil-C18柱為色譜柱，采用乙腈-磷酸水洗脫系統(tǒng)，在258 nm的波長下檢測，其平均回收率為99.0%，回收率合格，該方法可以準(zhǔn)確測定芒果苷的含量。知母中所含的皂苷類成分也很重要，知母皂苷及其苷元均具有較好的抗衰老、抗血小板聚集等作用，知母皂苷BⅡ被認(rèn)為是知母中含量最高的皂苷類成分，葉志欣等[14]通過采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測器法(HPLC-ESLD)測定知母皂苷BⅡ的含量來評(píng)價(jià)該制劑的質(zhì)量。該方法采用Diamonsil-C8色譜柱，以乙腈-水系統(tǒng)洗脫，在蒸發(fā)光散射檢測器下檢測到知母皂苷BⅡ的拖尾因子為1.04，與其他組分峰的分離度大于1.5，平均加樣回收率合格。該方法可以準(zhǔn)確、無干擾的測定知母皂苷BⅡ的含量。

2 同時(shí)測定梔子金花丸中多味藥材的含量

2.1 同時(shí)測定兩味藥材的含量 黃燕萍等[15]采用HPLC建立了同時(shí)測定黃芩苷和梔子苷含量的方法，采用Agilent TC-C18色譜柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相為甲醇-0.5%冰乙酸溶液，梯度洗脫，檢測波長239 nm，柱溫為室溫。該方法所得樣品提取率高、回收率、重復(fù)性及穩(wěn)定性好，平均加樣回收率分別為101.15%(RSD為2.82)、100.56%(RSD為2.57)。左銀風(fēng)[16]改進(jìn)了流動(dòng)相系統(tǒng)，以Dik-ma Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)為色譜柱，流動(dòng)相采用乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脫，柱溫為30 ℃，檢測波長為240 nm，在上述色譜條件下，測得黃芩苷與梔子苷的分離度均符合要求且峰形較好，梔子苷、黃芩苷的平均回收率分別為97.06%(RSD為1.09%)、97.92%(RSD為1.17%)。

大黃中主要有效成分是蒽醌類，包括大黃素、大黃酚、大黃酸、大黃素甲醚、蘆薈大黃素等。雷小紅[17]采用高效液相色譜法測定梔子金花丸中黃芩和大黃藥材中黃芩苷、大黃素、大黃酚的含量。以Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)為色譜柱，流動(dòng)相為甲醇-0.4%磷酸溶液，梯度洗脫，檢測波長為254 nm，柱溫為室溫。結(jié)果黃芩苷回收率為100.2%(RSD為1.5%)，大黃素回收率為99.7%(RSD為1.2%)，大黃酚回收率為100.0%(RSD為1.2%)。

郭小龍等[18]在《中國藥典》梔子苷含量測定標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，增加了鹽酸小檗堿的含量測定，Thermo Hypersil C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈-10 mmol/L SDS水溶液梯度洗脫，柱溫40 ℃，變換檢測波長(0～17 min，240 nm；17～30 min，346 nm)，結(jié)果梔子苷回收率為99.8%(RSD為1.9%)、鹽酸小檗堿回收率為100.5%(RSD為0.8%)。而牛德斌[19]在《中國藥典》含量測定標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，增加了3個(gè)大黃蒽醌苷元類成分的含量測定，采用HPLC法同時(shí)對(duì)梔子苷及蒽醌類成分(大黃酸、大黃素、大黃酚)進(jìn)行含量測定，Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相甲醇-0.1%磷酸(85∶15)，檢測波長254 nm，柱溫35 ℃，結(jié)果大黃的3個(gè)對(duì)照品測定的平均回收率均>97.20%(RSD均<2.05%)；梔子苷的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3.386 mg/g。

2.2 同時(shí)測定三味及三味以上藥材的含量 陳威等[20]建立了同時(shí)測定丸劑中三種有效成分的含量測定方法，色譜柱為Dimonsil-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相為甲醇-0.1%磷酸溶液，梯度洗脫，檢測波長為254 nm，柱溫為35 ℃。結(jié)果梔子苷平均回收率為99.7%(RSD為2.5%)，鹽酸小檗堿平均回收率為100.2%(RSD為1.7%)，黃芩苷平均回收率為99.0%(RSD為2.3%)。蔣范任等[21]采用反相高效液相色譜法同時(shí)測定梔子金花丸中梔子苷、鹽酸小檗堿、黃芩苷、大黃酸、大黃素、大黃酚等6種有效成分的含量，色譜柱為Gemini NX C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈-0.1%磷酸溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，結(jié)果這6種成分的平均回收率分別為99.9%(RSD為1.7%)、98.8%(RSD為1.8%)、101.0%(RSD為1.4%)、99.6%(RSD為1.7%)、101.3%(RSD為1.4%)、98.1%(RSD為0.9%)。

由于不同成分的最大吸收波長不同，也有采用不同波長測定有效成分，高旭東等[22]采用雙波長HPLC測定梔子金花丸中梔子苷、黃芩苷、鹽酸小檗堿和大黃素的含量，Zorbax Eclipse XDB-C18鍵合硅膠柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈-0.2%磷酸溶液為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫，柱溫為室溫，梔子苷波長240 nm、黃芩苷、鹽酸小檗堿和大黃素波長275 nm。在上述條件下，梔子苷、黃芩苷、鹽酸小檗堿和大黃素平均回收率分別為91.18%(RSD為1.60%)、91.55%(RSD為0.75%)、91.19%(RSD為1.08%)和92.29%(RSD為1.98%)。郝乘儀等[23]采用變換波長的方法，運(yùn)用HPLC同時(shí)測定梔子金花丸中9個(gè)成分的含量。采用色譜柱DIKMA Platisil ODS(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相以甲醇-0.1%磷酸水溶液進(jìn)行梯度洗脫，檢測波長254 nm(梔子苷、黃芩苷、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚)、327 nm(綠原酸、鹽酸小檗堿)，柱溫35 ℃。試驗(yàn)所得各成分的平均加樣回收率及RSD值均符合要求。

大黃藥材含量測定的報(bào)道多是大黃蒽醌類，也有番瀉苷A和番瀉苷B測定的研究，但復(fù)方中關(guān)于這2個(gè)成分含量測定較少。高曉燕等[24]研究建立了同時(shí)測定梔子苷、黃芩苷、番瀉苷A和番瀉苷B的方法。該方法快速、靈敏得同時(shí)定量測定多種指標(biāo)成分，其中各成分的峰分離度良好，回收率合格。

諸多文獻(xiàn)報(bào)道對(duì)梔子、黃芩、大黃等有效成分的含量測定多采用HPLC法，但未能全面有效地測定該復(fù)方制劑的多種成分。陳曉虎等[25]采用UPLC法同時(shí)測定梔子金花丸中綠原酸、梔子苷、黃芩苷、小檗堿、漢黃芩苷、黃芩素、蘆薈大黃素、漢黃芩素、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚等11種成分的含量。色譜柱為Acquity UPLC BEH C18色譜柱(100 mm×2.1 mm，1.7 μm)，流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度洗脫，流速為0.4 ml/min，檢測波長：綠原酸為324 nm，梔子苷為238 nm，小檗堿為345 nm，黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素為276 nm，蘆薈大黃素、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚為254 nm，柱溫35 ℃。結(jié)果各成分平均回收率及RSD值均符合要求。

3 小結(jié)

關(guān)于梔子金花丸中有效成分含量測定的報(bào)道有很多，該復(fù)方制劑組成成分的復(fù)雜，測定的干擾因素也較多，HPLC法因操作簡便、分析速度快、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)被大量應(yīng)用?，F(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)僅僅測定梔子苷的含量，并不能全面評(píng)價(jià)丸劑的質(zhì)量；而通過一種方法同時(shí)測得多種成分，可以全面有效地評(píng)價(jià)制劑的質(zhì)量。上述科研人員的研究為完善梔子金花丸的含量測定標(biāo)準(zhǔn)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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2016-09-09

河北省高等學(xué)校科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目(No.QN2014145)；河北省中醫(yī)藥管理局科研計(jì)劃項(xiàng)目(No.2016188)；河北省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點(diǎn)課題計(jì)劃項(xiàng)目(No.20160311)；河北省高校重點(diǎn)學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目(No.冀教高[2013]4號(hào))

R927.2

A

1006-5687(2016)06-0053-04

*通訊作者：劉喜綱，E-mail：liuxgmail@sina.com。