孫 鵬 宋 遠(yuǎn) 周曉晶

miR-30c在減輕肝細(xì)胞肝癌的侵襲與轉(zhuǎn)移中的應(yīng)用探討

孫 鵬1宋 遠(yuǎn)1周曉晶2

目的 探討miR-30c在減輕肝細(xì)胞肝癌侵襲及轉(zhuǎn)移中的應(yīng)用價值。方法 對肝癌及肝癌細(xì)胞系中的miR-30c表達(dá)進(jìn)行定量檢測，分析對肝癌細(xì)胞侵襲的影響。結(jié)果 有脈管轉(zhuǎn)移組miR-30c表達(dá)低于無脈管轉(zhuǎn)移組；轉(zhuǎn)染miR-30c模擬物能對snail表達(dá)進(jìn)行控制。結(jié)論 miR-30c表達(dá)上調(diào)，可抑制snail表達(dá)，減輕侵襲。

肝細(xì)胞肝癌；侵襲；轉(zhuǎn)移；miR-30c

肝細(xì)胞肝癌發(fā)生率約為原發(fā)性肝癌的85%～90%［1］。微小核糖核酸（miRNA）在腫瘤的發(fā)生、侵襲、轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要的作用，如miR-30c［2-3］。本研究分析肝細(xì)胞肝癌中miR-30c的表達(dá)水平，并探討其在肝細(xì)胞肝癌侵襲、轉(zhuǎn)移中的影響，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2014年6月～2016年6月本院收治的實施肝癌手術(shù)切除的42例肝癌及癌旁組織標(biāo)本。按照是否存在脈管癌栓，將其分為有脈管轉(zhuǎn)移組（n=19）與無脈管轉(zhuǎn)移組（n=23）。有脈管轉(zhuǎn)移組中，男15例，女4例；平均年齡（45.8±2.6）歲。無脈管轉(zhuǎn)移組中，男17例，女6例；平均年齡（45.6±2.4）歲。兩組一般資料對比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），可對比。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 購自美國的0.25%胰酶、DMEM高糖培養(yǎng)基、胎牛血清；購自上海吉瑪公司的miR-30c模擬物、miR-30c抑制物等；購自美國Santa公司的Snail、GAPDH一抗等；購自福州邁新公司的免疫組化試劑盒等。

1.2.2 細(xì)胞培養(yǎng) 在含5%二氧化碳的細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，37℃恒溫，所用培養(yǎng)基為DMEM高糖培養(yǎng)基。

1.2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 取適量對數(shù)生長期的肝癌細(xì)胞系，以2×105～4×105個細(xì)胞密度種植于6孔板中，持續(xù)培養(yǎng)24 h。

并按照試劑盒具體轉(zhuǎn)染步驟，以Lipofectamine 2000進(jìn)行轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染后24 h，對細(xì)胞進(jìn)行收集。

1.2.4 細(xì)胞侵襲實驗 以8 mm為Transwells小室纖維膜孔徑，將10%胎牛血清的500μl DMEM加入下室，在含5%二氧化碳的細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，37℃恒溫，持續(xù)培養(yǎng)48 h。以4%多聚甲醛固定小室下表面的細(xì)胞，以0.5%結(jié)晶紫染色。在顯微鏡下進(jìn)行觀察，計算穿膜細(xì)胞數(shù)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

以SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料均用（x-±s）表示，以t檢驗，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

miR-30c在肝癌組織、癌旁組織中的表達(dá)分別為（0.001 05± 0.000 83）%、（0.006 85±0.002 68）%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=13.075，P=0.000）；而snail的表達(dá)分別為（0.004 18±0.003 56）%、 （0.001 29± 0.000 71）%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=5.035，P=0.000）。

有脈管轉(zhuǎn)移組miR-30c表達(dá)為（0.000 70±0.000 66）%，低于無脈管轉(zhuǎn)移組的（0.001 36±0.000 82）%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=3.966，P=0.000）；有脈管轉(zhuǎn)移組snail表達(dá)為（0.005 88± 0.005 42）%，高于無脈管轉(zhuǎn)移組的（0.001 70±0.001 32）%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=4.739，P=0.000）。

3 討論

miRNA為常見非編碼小分子RNA，包括22個核苷酸［4］。有研究認(rèn)為，miR-30c等miRNA在細(xì)胞遷移、細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡等多種細(xì)胞生物學(xué)過程中發(fā)揮著重要的作用，且在肝癌等多種腫瘤組織中表達(dá)異常［5］。但臨床上仍缺乏對miR-30c在肝細(xì)胞肝癌侵襲及轉(zhuǎn)移中影響的研究。

影響肝癌患者治療效果及預(yù)后的關(guān)鍵，是肝細(xì)胞肝癌的侵襲與轉(zhuǎn)移。有研究認(rèn)為，snail能通過結(jié)合E-box，對其表達(dá)進(jìn)行抑制，產(chǎn)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化，增強上皮細(xì)胞變形、遷移及運動能力，提升抗凋亡能力，在肝癌細(xì)胞侵襲、浸潤中發(fā)揮重要作用［6］。此外，還有研究認(rèn)為，miR-30c能有效抑制snail表達(dá)，從而減輕肝細(xì)胞肝癌的侵襲性［7］。

本研究結(jié)果顯示，肝癌細(xì)胞miR-30c表達(dá)水平低于癌旁組織，且有脈管轉(zhuǎn)移組miR-30c低于無脈管轉(zhuǎn)移組，與文獻(xiàn)結(jié)果相符［8］。表明在肝癌的發(fā)生與發(fā)展過程中，miR-30c發(fā)揮著重要的作用。此外，本研究結(jié)果還顯示，轉(zhuǎn)染miR-30c模擬物能對snail表達(dá)進(jìn)行控制，從而對高侵襲力細(xì)胞系MHCC-97H的侵襲能力進(jìn)行控制。由此可知，經(jīng)由miR-30c表達(dá)上調(diào)，可直接對snail表達(dá)進(jìn)行抑制，從而有效控制肝癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。

綜上所述，miR-30c表達(dá)上調(diào)可直接對snail表達(dá)進(jìn)行抑制，控制肝細(xì)胞肝癌的侵襲性。

［1］ 孔亮亮，倪慶鋒，盧葉挺，等． miR-30c減輕肝細(xì)胞肝癌的侵襲與轉(zhuǎn)移［J］．南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2014，34（7）：937-943．

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Discussion on the Application of miR-30c in Reducing the Invasion and Metastasis of Hepatocellular Carcinoma

SUN Peng1SONG Yuan1ZHOU Xiaojing21 Department of Gastroenterology，Jilin Provincial People's Hospital，Changchun Jilin 130021，China，2 Department of Biochemistry and Molecular Biology，Changchun University of Chinese Medicine of Basic Medical College，Changchun Jilin 130021，China

Objective To explore the application value of miR-30c in reducing the invasion and metastasis of hepatocellular carcinoma． Methods To detect the expression of miR-30c in hepatocellular carcinoma and hepatocellular carcinoma cell lines，and to analyze the role of the invasion of hepatocellular carcinoma cells． Results The expression of miR-30c was significantly lower than that of no vascular metastasis group，and the Snail expression was controlled by transfection of miR-30c． Conclusion miR-30c expression up regulation，can inhibit the expression of snail，reduce the invasion．

Hepatocellular carcinoma，Attack，Transfer，miR-30c

R735．7

A

1674-9316（2016）22-0071-02

10．3969/j．issn．1674-9316．2016．22．043

1 吉林省衛(wèi)生計生科研計劃課題（20152084），吉林省衛(wèi)生計生自籌經(jīng)費課題（2015s2c06）

1吉林省人民醫(yī)院消化內(nèi)科，吉林 長春 130021 2 長春中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研

室，吉林 長春 130021

周曉晶，E-mail：589632478@qq．com