毛積分，黃建新，呂裕霞，馬春梅,趙鳳翎，宋曉萍

(1.武警總醫(yī)院,a 干部病房一科,b 采購中心,c 體檢中心，d 檢驗(yàn)科，北京 100040；2.武警北京市總隊(duì)第二醫(yī)院特檢科)

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·論著·

Apelin在伴有冠心病高血壓患者中的檢測意義

毛積分1a，黃建新2，呂裕霞1b，馬春梅1c,趙鳳翎1d，宋曉萍1a

(1.武警總醫(yī)院,a 干部病房一科,b 采購中心,c 體檢中心，d 檢驗(yàn)科，北京 100040；2.武警北京市總隊(duì)第二醫(yī)院特檢科)

目的探析在伴發(fā)冠心病的高血壓患者發(fā)病機(jī)制中Apelin的作用。方法分析98例原發(fā)性高血壓者的臨床資料，依據(jù)冠狀動脈造影的檢查結(jié)果把入選者劃分成單純高血壓組(對照組，44例)和伴發(fā)冠心病的高血壓組(觀察組，54例)兩組。比較兩組的基線資料、常規(guī)檢測指標(biāo)、Apelin表達(dá)水平等。結(jié)果兩組的基線資料、常規(guī)檢測指標(biāo)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。兩組的Apelin表達(dá)水平、對照組中不同級別的高血壓患者間以及觀察組中不同臨床類型者間的Apelin水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.01)。觀察組患者Apelin表達(dá)水平與Gensini積分存在負(fù)相關(guān)性(r=-0.61，P<0.01)。結(jié)論Apelin表達(dá)水平的下降可以促進(jìn)伴發(fā)冠心病的高血壓患者的病情進(jìn)展，能成為該類患者判斷預(yù)后以及危險(xiǎn)分層的一個(gè)有效指標(biāo)。

高血壓；冠心??；肽類; 預(yù)后; 危險(xiǎn)性評估

血管活性肽屬于肽類物質(zhì)，有著保護(hù)循環(huán)系統(tǒng)的作用，目前新發(fā)現(xiàn)的Apelin屬于血管活性肽，是孤兒G蛋白偶聯(lián)受體(APJ)的天然配體，在心血管系統(tǒng)疾病中兩者組成的Apelin-APJ系統(tǒng)扮演著重要的角色[1]。早期關(guān)于Apelin的研究主要是集中在心力衰竭、高血壓以及糖尿病等方面，關(guān)于其在伴發(fā)冠心病的高血壓患者中的研究目前尚很少。本研究旨在通過伴發(fā)冠心病的高血壓患者發(fā)病機(jī)制中Apelin作用的研究，探討Apelin的臨床應(yīng)用價(jià)值。

1　對象與方法

1.1研究對象分析2013年8月至2015年2月在武警總醫(yī)院接受治療的98例原發(fā)性高血壓者的臨床資料，患者均由于胸悶或胸痛入院。依據(jù)冠狀動脈造影的檢查結(jié)果把入選者劃分成單純高血壓組(對照組，44例)和伴發(fā)冠心病的高血壓組(觀察組，54例)兩組。對照組中有13例為高血壓1級者，19例為高血壓2級者；12例為高血壓3級者，且血壓分級及其定義依據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)/國際血液學(xué)學(xué)會(ISH)于1999年制定的標(biāo)準(zhǔn)[2]。觀察組中20例穩(wěn)定型心絞痛者，21例為不穩(wěn)定型心絞痛患者，13例為急性心肌梗死患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：近期使用激素者；嚴(yán)重的如惡性腫瘤、晚期肝硬化等的慢性疾病患者；存在代謝性和內(nèi)分泌疾病的患者；結(jié)締組織、免疫缺陷性或自身免疫疾病或使用免疫抑制劑的患者；肝和(或)腎功能嚴(yán)重不全的患者；慢性或急性的感染性疾病患者；存在嚴(yán)重肺實(shí)質(zhì)性疾病的患者；心功能嚴(yán)重不全者或者是合并如孤立性心房顫動、心肌炎等其他心臟疾病者；陳舊性心肌梗死者；最近一個(gè)月內(nèi)有服用調(diào)脂藥物史的患者等。

1.2研究方法對所有受試者實(shí)施尿常規(guī)、血常規(guī)、肝功能、腎功能、血糖、血脂、胸部X線平片以及心臟多普勒超聲、心電圖等的檢查。

參照標(biāo)準(zhǔn)的Judkins法給入選者實(shí)施冠狀動脈造影的檢查，參照美國心臟病協(xié)會(AHA)的標(biāo)準(zhǔn)評判冠狀動脈的狹窄程度。依據(jù)造影的結(jié)果，并參照評價(jià)冠狀動脈分段的標(biāo)準(zhǔn)，通過Gensini積分法積分評估其管腔病變程度。

采集標(biāo)本：受試者均需禁食>8 h，第2天清晨抽取5 mL空腹靜脈血，將依地酸二鈉抗凝劑注入盛有血標(biāo)本的抗凝管中，均勻、充分混合10 min后進(jìn)行離心處理(15 min，3000 r/min)，提取血漿，保存于-20 ℃的冰箱中備測。接著用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)對血漿中Apelin的表達(dá)水平進(jìn)行檢測：設(shè)立標(biāo)準(zhǔn)品孔10個(gè)，將100 μL的標(biāo)準(zhǔn)品分別加至第1、2孔內(nèi)，接著將50 μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液分別加入其中，混合均勻；從第1、2孔內(nèi)各自提取液體100 μL分別加入第3、4孔內(nèi)，再將50μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液分別加入其中，充分混合；從第3、4孔內(nèi)分別提取50μL的液體丟棄，然后分別提取50 μL的液體注入第5、6孔內(nèi)，接著將50 μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液分別加入兩孔內(nèi)，混合均勻；從第5、6孔內(nèi)分別提取液體50 μL加至第7、8孔內(nèi)，然后分別注入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50 μL，以此類推直至第9、10孔，稀釋后的各孔加樣量均是50 μL，濃度為125～1500 pg/mL。

檢測血漿Apelin的表達(dá)水平：①加樣：不加酶標(biāo)試劑及樣品的孔，其他操作步驟和其他孔操作相同，即設(shè)立空白對照孔以及待測樣品孔，先把40 μL的樣品稀釋液注入在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔內(nèi)，后把待測樣品10 μL注入其中，最終樣品的稀釋倍數(shù)達(dá)至5倍。②溫育：封板膜封板之后，把酶標(biāo)板放在恒溫箱(37 ℃)內(nèi)進(jìn)行30 min的溫育處理。③配液：將30倍蒸餾水注入30倍的濃縮洗滌液內(nèi)稀釋備用。④洗滌：將封板膜揭去，丟棄酶標(biāo)包被板上液體，甩干后在每孔內(nèi)加滿洗滌液，30 s靜置后棄掉，以此不斷反復(fù)洗滌(5次)后拍干。⑤加酶：在各個(gè)孔內(nèi)(除空白孔外)注入酶標(biāo)試劑50 μL。⑥避光顯色反應(yīng)后用終止液終止反應(yīng)，檢測其表達(dá)水平：把空白孔調(diào)零作為對照，在450 nm波長下依序檢測各個(gè)孔的OD值(吸光度)。以標(biāo)準(zhǔn)物濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。參照樣品OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出對應(yīng)的濃度，乘以稀釋的倍數(shù)即可獲得實(shí)際濃度值。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS19.0軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1基線資料對照組與觀察組在年齡、性別、吸煙史比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.2兩組常規(guī)檢測指標(biāo)的比較兩組SBP、DDP、TC、TG、LDL-C、HDL-C、FPG、LVEF、LVEDD比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。

2.3兩組血漿中Apelin表達(dá)水平的比較觀察組的血漿Apelin表達(dá)水平是(1.39±0.56)μg/L，對照組是(1.81±0.52)μg/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

2.4對照組中不同級別者血漿Apelin表達(dá)水平的比較對照組中高血壓1級者的血漿Apelin表達(dá)水平是(2.31±0.40)μg/L，2級者為(1.91±0.22)μg/L，3級者為(1.20±0.27)μg/L，兩兩組間比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

2.5觀察組中不同臨床類型患者的血漿Apelin表達(dá)水平的比較觀察組中急性心肌梗死患者的血漿Apelin的表達(dá)水平是(0.81±0.13)μg/L，不穩(wěn)定型心絞痛者為(1.35±0.40)μg/L，穩(wěn)定型心絞痛者為(1.77±0.50)μg/L，兩兩組間比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

2.6Gensini積分與Apelin水平相關(guān)性分析觀察組患者Apelin表達(dá)水平與Gensini積分存在負(fù)相關(guān)性(r=-0.61，P<0.01)。

3　討論

Apelin表達(dá)主要集中在腎上腺、腎臟、肺臟和心臟的血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)，在血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)呈高表達(dá)狀，但在心臟神經(jīng)纖維、結(jié)締組織、心肌細(xì)胞以及血管平滑肌細(xì)胞中卻很少表達(dá)，提示其對心血管功能具有一定的調(diào)節(jié)作用，產(chǎn)生于旁分泌途徑，由內(nèi)皮細(xì)胞中釋放，對血管平滑肌細(xì)胞及心肌細(xì)胞起作用，有著調(diào)節(jié)血管張力以及收縮心肌的作用。

有研究[3-4]顯示，Apelin水平的降低可能是一個(gè)引發(fā)原發(fā)性高血壓的重要原因。有資料顯示[5]，Apelin能降低動脈血壓是由于一氧化氮的介導(dǎo)。研究通過對APJ受體缺陷性的小鼠的研究發(fā)現(xiàn)，AngⅡ縮血管的作用明顯增強(qiáng)，而Apelin降壓作用卻明顯消失，說明Apelin有可能具備一定的拮抗AngⅡ升壓的作用[5]。通過上述的研究資料，我們推測Apelin降壓的機(jī)制可能為：通過血管內(nèi)皮細(xì)胞的產(chǎn)生，Apelin得到釋放，活化同時(shí)結(jié)合附近的所有APJ受體，將血管內(nèi)皮細(xì)胞中內(nèi)皮型的一氧化氮合酶激活，并促進(jìn)了其的分泌和合成過程，從而使血管擴(kuò)張效應(yīng)發(fā)揮極致，達(dá)到降壓的效果。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，血壓分級越高，Apelin表達(dá)水平則越低，此與其相應(yīng)的擴(kuò)張血管作用遭受抑制，降低了內(nèi)皮細(xì)胞的分泌量，致使其降壓作用及含量降低可能相關(guān)。

有報(bào)道[6]稱心肌梗死及冠心病心絞痛等與Apelin-APJ存在顯著的關(guān)系。有學(xué)者[7]認(rèn)為隱匿性冠心病者比急性冠脈綜合征者的Apelin濃度升高更顯著，且冠心病嚴(yán)重程度以及其急性程度與Apelin濃度存在負(fù)相關(guān)性。此外，Apelin濃度與患者冠狀動脈的狹窄程度也相關(guān)[8]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在冠心病患者的3種臨床類型中Apelin水平均顯著下降，推測原因可能是：心肌缺氧、缺血情況伴隨冠心病者的病情進(jìn)展而加重，其冠狀動脈的內(nèi)皮細(xì)胞損傷程度加深，而神經(jīng)的內(nèi)分泌系統(tǒng)激活程度隨之上升，導(dǎo)致Apelin水平下降程度明顯上升[9]；冠心病進(jìn)展期間，內(nèi)皮細(xì)胞對于Apelin mRNA的表達(dá)受受損的冠脈內(nèi)膜的直接影響，導(dǎo)致Apelin濃度下降，冠狀動脈病變的狹窄程度伴隨不同的臨床類型而慢慢加重，其內(nèi)膜的受損程度隨之加重[10]；不管是冠狀動脈管腔由于動脈粥樣硬化而出現(xiàn)阻塞或狹窄的現(xiàn)象，還是如冠狀動脈痙攣等的功能性變化，最后都造成了心肌細(xì)胞壞死或(和)缺氧缺血，進(jìn)而加快了神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的激活[11]。故Apelin-APJ系統(tǒng)對缺血的心肌細(xì)胞具有一定的保護(hù)作用，將來有可能是重要治療靶點(diǎn)之一[12]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，伴發(fā)冠心病的高血壓患者的Apelin濃度與Gensini積分存在明顯的負(fù)相關(guān)性，推測可能是該類患者血管內(nèi)膜損傷，對內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)Apelin mRNA的表達(dá)構(gòu)成了直接影響，致使血漿中Apelin水平急劇降低；此外激活的神經(jīng)激素活躍在冠心病整個(gè)進(jìn)展期間，加之AngⅡ，通過AngⅡ-AT1通路上調(diào)，導(dǎo)致了Apelin-APJ(生物學(xué)作用相反)通路的下調(diào)，最終致使冠心病者Apelin水平的下降，其下降的程度能體現(xiàn)冠脈病變嚴(yán)重程度。此外，我們發(fā)現(xiàn)觀察組比對照組Apelin水平低，說明血漿Apelin水平的改變與伴發(fā)冠心病的高血壓患者的病情進(jìn)展關(guān)系密切，Apelin水平能作為該類患者的危險(xiǎn)分層和判斷轉(zhuǎn)歸的一個(gè)重要觀察指標(biāo)。

綜上所述，Apelin表達(dá)水平的下降可以促進(jìn)伴發(fā)冠心病的高血壓患者的病情進(jìn)展，能成為該類患者判斷預(yù)后以及危險(xiǎn)分層的一個(gè)有效指標(biāo)。

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The significance of plasma Apelin detection in the hypertensive patients with coronary disease

MaoJifen*,HuangJianxin,LvYuxia,MaChunmei,ZhaoFengling,SongXiaoping

(*CadresWardI，GeneralHospitalofArmedPoliceForces，Beijing100040,China)Correspondingauthor:LvYuxia,Email:Lvyuxia7118@163.com

ObjectiveTo analyze the significant of Apelin in the nosogenesis of the hypertensive patients with coronary disease.MethodsClinical data of 98 cases of patients with primary hypertension were collected and analyzed retrospectively.Patients were divided into observed group (hypertensive patients with coronary disease,54 cases) and control group (primary hypertensive patients,44 cases) according to the results of Coronary angiography,.The general information,conventional detection indexes,the levels of Apelin were collected and compared.ResultsThere were no statistical differences in the general information and the conventional detection indexes between the two groups.There were statistical differences in the levels of Apelin between the observed group and control group,and there were still statistical differences in Apelin levels in the different grades hypertension in control group and different clinical styles in observed group.There was negative correlation between the levels of Apelin and Gensini scores in observed group.ConclusionThe decrease of the plasma Apelin levels aggravate the the hypertension progression in hypertensive patients with coronary disease,which could be an efficiency index of the prognosis and risk stratification for the hypertensive patients with coronary disease.

Hypertension;Coronary disease;Peptides;Prognosis;Risk assessment

毛積分，副主任醫(yī)師，Email：chenli_tz@126.com

呂裕霞，主治醫(yī)師，Email:Lvyuxia7118@163.com

R735.7

A

10.3969/J.issn.1672-6790.2016.04.007

2015-06-26)