基金項(xiàng)目:惠州市科技計(jì)劃項(xiàng)目(2013Y271)。

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化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血漿BNP的性能評(píng)價(jià)及結(jié)果分析*

*基金項(xiàng)目:惠州市科技計(jì)劃項(xiàng)目(2013Y271)。

江小明1，劉文明1，石文2△，江穎慧1，徐建華2

(1.中信惠州醫(yī)院檢驗(yàn)科,廣東惠州516006；2.廣東省中醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東廣州 510105)

摘要:目的分析和評(píng)價(jià)化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血漿腦鈉肽(BNP)的精密度、正確度和線性。方法根據(jù)美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室檢準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)EP15-A3、EP6-A文件及其他相關(guān)文獻(xiàn)實(shí)驗(yàn)方案，分析西門子Centaur XP化學(xué)發(fā)光儀檢測(cè)BNP的精密度、正確度與線性，結(jié)果與廠商聲明性能或?qū)嶒?yàn)室制定質(zhì)量目標(biāo)進(jìn)行比較。結(jié)果化學(xué)發(fā)光法測(cè)定BNP的不精密度小于原衛(wèi)生部臨檢中心規(guī)定的1/3 TEa(允許總誤差)、室內(nèi)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)室間比對(duì)的變異系數(shù)指數(shù)(CVR)均小于±2；室間質(zhì)評(píng)盲樣測(cè)定結(jié)果與靶值的相對(duì)偏倚均小于原衛(wèi)生部臨檢中心規(guī)定的TEa，室內(nèi)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)室間比對(duì)的標(biāo)準(zhǔn)差指數(shù)(SDI)均小于±2；線性評(píng)價(jià)結(jié)果顯示，BNP在(5.3～4 696.7)pg/mL范圍內(nèi)呈一次線性。結(jié)論西門子Centaur XP化學(xué)發(fā)光儀檢測(cè)BNP的精密度、正確度與線性范圍等分析性能基本符合質(zhì)量目標(biāo)要求，可滿足臨床需要。

關(guān)鍵詞:腦鈉肽；精密度；正確度；線性

腦鈉肽(BNP)主要是由左心室分泌并釋放到血液循環(huán)中的一種多肽類心臟神經(jīng)激素，主要作用為排鈉、利尿、擴(kuò)張血管、對(duì)抗腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)的活性，抑制交感神經(jīng)過(guò)度反應(yīng)，調(diào)節(jié)動(dòng)脈壓和血容量，進(jìn)而對(duì)抗水鈉潴留[1]。目前腦鈉肽被認(rèn)為是一種有意義的心臟病學(xué)標(biāo)志物[2]。本研究參照相關(guān)精密度、正確度及線性評(píng)價(jià)方案、步驟，探討西門子Centaur XP化學(xué)發(fā)光儀檢測(cè)BNP的精密度，正確度與線性評(píng)價(jià)途徑和方法，現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1標(biāo)本來(lái)源線性評(píng)價(jià)的高值和低值標(biāo)本來(lái)自門診和住院患者，無(wú)溶血、脂血和黃疸。

1.2儀器與試劑BNP檢測(cè)儀器采用SIEMENS Centaur XP化學(xué)發(fā)光儀；試劑采用西門子公司生產(chǎn)的配套試劑，配套校準(zhǔn)品及伯樂(lè)質(zhì)控品，室間質(zhì)評(píng)盲樣標(biāo)本由原衛(wèi)生部臨檢中心提供。

1.3方法

1.3.2正確度評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)參照EP15-A3文件[3]，BNP正確度評(píng)價(jià)采用以下方案：(1)原衛(wèi)生部臨檢中心室間質(zhì)評(píng)盲樣檢測(cè)：測(cè)定原衛(wèi)生部臨檢中心發(fā)放的質(zhì)評(píng)盲樣，計(jì)算相對(duì)偏倚，偏倚小于等于TEa為判斷標(biāo)準(zhǔn)。(2) Bio-Rad Unity室內(nèi)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)室間比對(duì)：測(cè)定2015年1月Bio-Rad的29811和29812 BNP質(zhì)控品，并進(jìn)行全球?qū)Φ冉M和方法學(xué)組比對(duì)，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)差指數(shù)(SDI)值，SDI≤±2.0為判斷標(biāo)準(zhǔn)[SDI=(實(shí)驗(yàn)室均值-組均值)/組標(biāo)準(zhǔn)差；SDI<1.0 表示良好的正確度(A區(qū))，1.0～1.5表示可接受的正確度(B區(qū))，1.5～2.0 表示臨界的正確度(C區(qū))，大于2.0 表示不可接受的正確度](圖1)(見《國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》網(wǎng)站主頁(yè)“論文附件”)。

1.3.3線性驗(yàn)證參考EP6-A文件[4]，選擇西門子廠家聲明的BNP線性范圍高(H)、低(L)濃度水平混合血清，按比例配制成系列濃度的6個(gè)標(biāo)本，每個(gè)標(biāo)本重復(fù)2次檢測(cè)，6個(gè)系列濃度制備方案：L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、H。將所得數(shù)據(jù)擬合為一次(Y=b0+b1X)、二次(Y=b0+b1X+b2X2)和三次(Y=b0+b1X+b2X2+b3X3)多項(xiàng)式，判斷各項(xiàng)系數(shù)與0之間的差異是否具有顯著性(t檢驗(yàn))。如果非線性系數(shù)b2和b3與0比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，則認(rèn)為存在線性關(guān)系，否則該組數(shù)據(jù)存在非線性，則要進(jìn)行非線性度的評(píng)價(jià)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用Excel2007和SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)錄入和分析處理。計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1精密度評(píng)價(jià)結(jié)果

2.1.1穩(wěn)定樣本多次測(cè)量結(jié)果利用Bio-Rad兩個(gè)水平質(zhì)控品對(duì)BNP進(jìn)行測(cè)定，2015年1～3月29811質(zhì)控品(濃度：101 pg/mL)CV值分別為7.24%、5.18%、4.63%；29812質(zhì)控品(濃度：370 pg/mL)CV值分別為7.85%、3.82%、7.76%，均小于1/3 TEa、即10%。

2.1.2Bio-Rad Unity室內(nèi)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)室間比對(duì)CVR結(jié)果2015年1月Bio-Rad 29811和29812質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)全球比對(duì)結(jié)果顯示，29811質(zhì)控品的本實(shí)驗(yàn)室測(cè)定結(jié)果與對(duì)等組和同方法組的CVR分別為1.3、0.6，29812質(zhì)控品的本實(shí)驗(yàn)室測(cè)定結(jié)果與對(duì)等組和同方法組的CVR分別為1.5、0.9，均小于±2(圖2)(見《國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》網(wǎng)站主頁(yè)“論文附件”)。

2.2正確度評(píng)價(jià)結(jié)果

2.2.1室間質(zhì)評(píng)盲樣結(jié)果2013～2014年原衛(wèi)生部臨檢中心室間質(zhì)評(píng)盲樣測(cè)定結(jié)果顯示，各濃度標(biāo)本的偏倚均小于允許總誤差水平，在可接受范圍內(nèi)(表1)。

2.2.2Bio-Rad Unity室內(nèi)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)室間比對(duì)SDI結(jié)果2015年1月Bio-Rad 29811和29812質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)全球比對(duì)結(jié)果顯示，本實(shí)驗(yàn)室測(cè)定結(jié)果與對(duì)等組和同方法組的SDI均小于±2(圖2，表2)。

表1　　原衛(wèi)生部室間質(zhì)評(píng)盲樣測(cè)定結(jié)果

表2　　2015年1月BNP的Bio-Rad Unity室內(nèi)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)

-:無(wú)數(shù)據(jù)。

2.3線性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)按照EP6-A文件要求，配制6個(gè)系列稀釋倍數(shù)的標(biāo)本，每個(gè)樣本重復(fù)測(cè)定2次。經(jīng)多項(xiàng)式回歸統(tǒng)計(jì)，表3結(jié)果顯示，b2、b3與0比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，在(5.3～4 696.7)pg/mL范圍內(nèi)為一次線性(圖3)(見《國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》網(wǎng)站主頁(yè)“論文附件”)，其方程為Y=0.997X-20.89。

表3　　BNP多項(xiàng)式線性回歸統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果

3討論

BNP首先于1988年由日本學(xué)者Sudoh等[5]從豬腦分離出，它主要是由心臟分泌并存儲(chǔ)的一種神經(jīng)內(nèi)分泌激素。NT-proBNP是BNP分泌過(guò)程中其前體裂解的氨基末端片段[6]，BNP和NT-proBNP都是臨床上檢測(cè)心力衰竭的常用指標(biāo)[7]。對(duì)臨床表現(xiàn)為呼吸困難的患者，檢測(cè)BNP或NT-proBNP有助于心源性和非心源性呼吸困難的鑒別診斷。BNP或NT-proBNP對(duì)心臟疾病診治的臨床應(yīng)用價(jià)值相似,沒(méi)必要同時(shí)檢測(cè)[8]。 BNP是一類具有利鈉、利尿、擴(kuò)張血管、拮抗腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)等作用的激素。急性心肌梗死(AMI)、不穩(wěn)定型心絞痛(UA)、心力衰竭(HF)、原發(fā)性高血壓、腎功能不全、慢性阻塞性肺疾病(COPD)等情況時(shí)BNP濃度會(huì)升高。但BNP相對(duì)分子質(zhì)量小、體內(nèi)半衰期短(22 min)、體外不穩(wěn)定，在EDTA抗凝血漿中，室溫2 h下降20%、-20 ℃可以延長(zhǎng)至48 h，因此標(biāo)本采集后應(yīng)盡快完成檢測(cè)[9]。BNP檢測(cè)技術(shù)最初是放射免疫法(RIA)，但其準(zhǔn)確性和精密度均不高，且影響因素較多；后來(lái)發(fā)展為免疫放射測(cè)定(IRMA)及酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定(ELISA)，其靈敏度、精密度和特異性比RIA雖有提高，但耗時(shí)較長(zhǎng)(一般需要5～36 h)，難以適用于自動(dòng)化。目前常用的為吖啶酯化學(xué)發(fā)光法，其檢測(cè)范圍可達(dá)2～5 000 pg/mL，準(zhǔn)確度和精密度較好，能在自動(dòng)化分析儀上使用，檢測(cè)僅需數(shù)分鐘，可滿足臨床急診檢驗(yàn)需要[10]。

在健康人群中，BNP主要與年齡和性別密切相關(guān)，年齡越大，BNP濃度越高，相同年齡女性高于男性[11]；其次與肥胖和種族差異也密切相關(guān)；另外血液中的異嗜性抗體(HA)也是影響B(tài)NP測(cè)定的重要因素之一[12]。HA通過(guò)非特異性結(jié)合，橋聯(lián)捕獲抗體、標(biāo)記抗體或標(biāo)記抗原從而干擾測(cè)定，使測(cè)定結(jié)果與臨床表現(xiàn)不符，導(dǎo)致誤診，實(shí)驗(yàn)室可以使用稀釋法和使用阻滯劑的方法減少干擾[13-14]。

目前國(guó)內(nèi)各級(jí)醫(yī)院檢驗(yàn)科都在向?qū)嶒?yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化方向發(fā)展，根據(jù)2012《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室-質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》IS015189的要求，臨床實(shí)驗(yàn)室在建立或引進(jìn)新的檢驗(yàn)項(xiàng)目時(shí)，應(yīng)該對(duì)測(cè)量方法的基本性能進(jìn)行評(píng)價(jià)，以掌握方法的特征，判斷其能否滿足臨床需要[15]。精密度是反映儀器整體性能的首要指標(biāo)，本研究應(yīng)用穩(wěn)定樣本多次測(cè)量方法及Bio-Rad Unity室內(nèi)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)室間比對(duì)計(jì)算CVR方法進(jìn)行精密度分析，結(jié)果顯示，化學(xué)發(fā)光法測(cè)定血漿BNP的不精密度均符合質(zhì)量目標(biāo)要求，穩(wěn)定性較好。正確度又稱真實(shí)度，反映儀器/方法的系統(tǒng)(校準(zhǔn))偏差大小，本研究參照徐建華等[16]研究，應(yīng)用原衛(wèi)生部室間質(zhì)評(píng)盲樣檢測(cè)和Bio-Rad Unity室內(nèi)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)室間比對(duì)計(jì)算SDI方法進(jìn)行正確度評(píng)價(jià)，結(jié)果顯示，原衛(wèi)生部室間質(zhì)評(píng)盲樣測(cè)定結(jié)果在可接受范圍內(nèi)，SDI結(jié)果均小于±2，達(dá)到質(zhì)量目標(biāo)要求。線性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，BNP在(5.3～4 696.7) pg/mL范圍內(nèi)為一次線性，實(shí)驗(yàn)線性范圍與廠家聲明的線性范圍基本一致。

本研究充分利用室內(nèi)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)及原衛(wèi)生部室間質(zhì)評(píng)盲樣對(duì)檢驗(yàn)項(xiàng)目進(jìn)行精密度和正確度驗(yàn)證，方法簡(jiǎn)單可靠，可操作性強(qiáng),易于常規(guī)實(shí)驗(yàn)室推廣，同時(shí)CLSI EP6-A是目前常用的線性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)文件，利用統(tǒng)計(jì)軟件可方便獲得所評(píng)價(jià)的濃度范圍是否具有一次線性，亦具有較好的操作性和適用性。

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·論著·

Performance evaluation and results analysis of chemiluminescence method for detecting plasma BNP*

JiangXiaoming1,LiuWenming1,ShiWen2△,JiangYinghui1,XuJianhua2

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,ZhongxinHuizhouHospital,Huizhou,Guangdong516001,China;

2.DepartmentofLaboratory,GuangdongProvincialHospitalofChineseMedicine,Guangzhou,Guangdong510120,China)

Abstract:ObjectiveTo analyze and evaluate the precision,accuracy and linearity of the chemiluminescence method for detecting plasma BNP.MethodsAccording to the experimental schemes of CLSI EP15-A2,EP6-A files and other relevant documents,the precision,accuracy and linearity of the Siemens Centaur XP chemiluminescence instrument for detecting BNP,and the detection results were compared with the performance declared by manufacturer or the quality target formulated by laboratory.ResultsThe imprecision of BNP detected by the chemiluminescence method was less than 1/3 TEa regulated by the Clinical Laboratory Center of Ministry of Health (allowable total error);the variation coefficient index (CVR) of internal quality control data was less than ±2;the relative bias of the results of external quality control blind samples with the target values were less than Tea regulated by the Ministry of Health;the linear evaluation results showed that BNP was once linearity in the range of 5.3-4696.7 pg/mL.ConclusionThe precision,accuracy and linearity of the Siemens Centaur XP chemiluminescence instrument for detecting BNP can accord with the quality objectives requirements and meet the clinical needs.

Key words:brain natriuretic peptide;precision;accuracy;linearity

收稿日期：(2015-05-08)

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2015.24.010A

文章編號(hào)：1673-4130(2015)24-3532-03

通訊作者△，E-mail：swing@163.com。

作者簡(jiǎn)介：江小明，男，副主任技師，主要從事臨床檢驗(yàn)研究。