李英夫　宣兆博　王　鶴　廉曉宇

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江　佳木斯　154002)

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欖香烯聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒子對(duì)SHG-44腦膠質(zhì)瘤的抑制作用

李英夫宣兆博王鶴廉曉宇

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江佳木斯154002)

目的探究欖香烯聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒子(Gd-PBCA-NP)對(duì)SHG-44腦膠質(zhì)瘤的抑制作用。方法提取大鼠的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞SHG-44，并對(duì)其進(jìn)行體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，將這些腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞SHG-44按照隨機(jī)的原則分為干預(yù)組與對(duì)照組，對(duì)照組為空白，干預(yù)組則嚴(yán)格按照Gd-PBCA-NP濃度進(jìn)行分組，然后采用MTT比色法，對(duì)欖香烯不同濃度體外培養(yǎng)下的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞SHG-44的抑制作用給予有效的檢測(cè)，然后借助流式細(xì)胞儀測(cè)定干預(yù)組的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞SHG-44中的細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果欖香烯的濃度不同，其對(duì)SHG-44腦膠質(zhì)瘤體的抑制作用也有著一定的區(qū)別。10.0 mol/L濃度的Gd-PBCA-NP對(duì)SHG-44腦膠質(zhì)瘤的抑制作用明顯優(yōu)于2.50 mol/L濃度，且干預(yù)組的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞SHG-44的存活率明顯低于對(duì)照組(P<0.05)；Gd-PBCA-NP濃度越高，其對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞SHG-44的抑制作用就越強(qiáng)。結(jié)論Gd-PBCA-NP對(duì)SHG-44腦膠質(zhì)瘤有著明顯的抑制作用，能夠在一定程度上抑制腦膠質(zhì)瘤SHG-44細(xì)胞的凋亡與增殖，而且能夠增強(qiáng)細(xì)胞抗腫瘤活性，具有一定的安全性。

欖香烯；聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒子；SHG-44；腦膠質(zhì)瘤

作為一種萜系類化合物，欖香烯聚氰基丙烯酸(PBCA)在臨床醫(yī)學(xué)中得到了廣泛應(yīng)用，其主要組成成分為β欖香烯及PBCA，能夠有效抑制細(xì)胞毒性，在腦膠質(zhì)瘤的治療中有著明顯的治療效果〔1〕。本文探究欖香烯PBCA正丁納米粒子(Gd-PBCA-NP)對(duì)SHG-44腦膠質(zhì)瘤的抑制作用。

1　資料與方法

1.1材料與試劑試劑為大連華立金港藥業(yè)有限公司提供的Gd-PBCA-NP與細(xì)胞培養(yǎng)基，然后提取大鼠血清及四甲基偶氮唑鹽供比色，所用試劑由上海拜力生物科技有限公司提供，腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞SHG-44則由上海素爾生物科技有限公司提供〔2〕。

1.2方法首先取適量的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞SHG-44，在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入10%的大鼠血清，需要注意的是培養(yǎng)基要保持適宜的溫度，一般以37℃為宜，并將其置于5%的CO2培養(yǎng)箱環(huán)境中，對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞SHG-44進(jìn)行培養(yǎng)及傳代。經(jīng)過(guò)欖香烯PBCA對(duì)腦膠質(zhì)SHG-44細(xì)胞的充分作用，采用四甲基偶唑鹽比色法對(duì)其細(xì)胞增殖的抑制作用進(jìn)行測(cè)定〔3〕，在這個(gè)過(guò)程中，要將細(xì)胞培養(yǎng)液充分移除，然后加入0.25%胰酶，使貼壁細(xì)胞能夠完全消化，然后在其中加入10 ml的細(xì)胞培養(yǎng)液，根據(jù)實(shí)際情況，合理調(diào)整細(xì)胞的濃度，對(duì)培養(yǎng)板進(jìn)行有效鋪整，將細(xì)胞培養(yǎng)液的濃度設(shè)置為不同的數(shù)值，將腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞置于100 L的細(xì)胞培養(yǎng)液中進(jìn)行有效的培養(yǎng)，培養(yǎng)基的溫度應(yīng)保持在37℃左右，并在培養(yǎng)箱中加入5%的CO2。然后每個(gè)孔分別加入25 L的四甲基偶氮唑鹽〔4〕，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)，將細(xì)胞培養(yǎng)液充分移出。對(duì)欖香烯PBCA吸光度及細(xì)胞增殖的抑制效率進(jìn)行計(jì)算。采用四甲基偶氮唑鹽比色法對(duì)細(xì)胞增殖的抵抗作用進(jìn)行有效測(cè)定，在每個(gè)孔中分別加入腦膠質(zhì)瘤SHG-44細(xì)胞，測(cè)定其吸光度。然后采用流式細(xì)胞儀對(duì)欖香烯PBCA對(duì)SHG-44的細(xì)胞凋亡與增殖的抵抗作用進(jìn)行測(cè)定，整個(gè)測(cè)定過(guò)程中是在24孔平皿培養(yǎng)板中進(jìn)行的，且采用的是不同濃度的欖香烯PBCA培養(yǎng)方法，對(duì)SHG-44的膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡與增殖情況進(jìn)行檢測(cè)〔5〕。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，t檢驗(yàn)。

2　結(jié)　果

對(duì)照組、0.15、0.25、0.35、0.50、2.50、5.00、10.00 mol/L欖香烯PBCA對(duì)SHG-44細(xì)胞的抑制率分別為92.0%、90.2%、89.9%、89.7%、90.0%、79.1%、66.6%、39.2%。欖香烯PBCA濃度對(duì)大鼠的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞SHG-44的抑制作用也有著明顯的變化，10.00 mol/L濃度的欖香烯PBCA對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞SHG-44的抑制作用明顯優(yōu)于5.00 mol/L濃度。干預(yù)組腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞SHG-44的存活率與對(duì)照組相比明顯偏低(P<0.05)。且欖香烯PBCA濃度越高，其對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞SHG-44的抵抗與抑制作用就越強(qiáng)。

3　討　論

神經(jīng)膠質(zhì)瘤多采用手術(shù)的方式醫(yī)治，盡管能夠在一定程度上使患者的病情得到控制，然而復(fù)發(fā)率比較高〔6，7〕。治療腫瘤的新興化療藥物的出現(xiàn)為臨床醫(yī)學(xué)中腫瘤的治療提供了更多的可能性，當(dāng)然也存在不能徹底穿透患者血腦屏障的局限性，必須對(duì)其進(jìn)行有效的改進(jìn)。Gd-PBCA-NP對(duì)腫瘤細(xì)胞具有一定的抑制作用，在肝癌、胃癌、腦癌等惡性腫瘤的治療中得到廣泛應(yīng)用。其主要成分為膽固醇、磷酸氫二鈉及聚氰基丙烯酸等，能夠有效降低腫瘤細(xì)胞的分裂能力，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。據(jù)有關(guān)調(diào)查研究表明，Gd-PBCA-NP能夠?qū)颊叩募?xì)胞膜產(chǎn)生作用，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞分裂，進(jìn)而改變腫瘤細(xì)胞的免疫原性〔8〕。Gd-PBCA-NP對(duì)正常細(xì)胞的影響不大，其毒副作用幾乎可以忽略不計(jì)，這也是臨床醫(yī)學(xué)中選用欖香烯進(jìn)行化療的重要原因之一〔9〕。

綜上，Gd-PBCA-NP對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞SHG-44具有明顯的抑制作用，而且能夠在一定程度上增強(qiáng)抗瘤活性。

1袁子民,王靜,王博,等.β-欖香烯聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒凍干粉針的制備及理化性質(zhì)研究〔J〕.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2013;24(3):650-1.

2崔玉瓊,楊海城.中藥活性成分抗腦膠質(zhì)瘤作用機(jī)制研究進(jìn)展〔J〕.中醫(yī)藥信息,2013;30(3):140-4.

3郭建忠,吉宏明,張剛利,等.β-欖香烯抑制膠質(zhì)瘤兔角膜移植模型血管生成的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2014;24(14):38-41.

4陳進(jìn)才,佘軍軍,王光輝,等.β-欖香烯對(duì)體外培養(yǎng)人直腸癌細(xì)胞株Colo320的放射增敏作用〔J〕.西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2013;34(3):346-8,356.

5申紅麗,趙盼盼,張濤,等.欖香烯與含鉑類化療方案聯(lián)合治療晚期非小細(xì)胞肺癌的Meta分析〔J〕.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2013;21(8):1783-8.

6王博,程嵐,袁子民.β-欖香烯聚氰基丙烯酸正丁醋納米粒包封率和載藥量的測(cè)定〔J〕.中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)刊,2010；12(12):2186-7.

7丁華,趙洪瑜,王燕,等.欖香烯對(duì)人源性腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤SHG-44細(xì)胞系放射增敏實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.中華放射腫瘤學(xué)雜志,2009；18(3):236-7.

8Chen-Long L,Liang C,Lin G,etal.β-elemene induces caspase-dependent apoptosis in human glioma cells in vitro through the upregulation of Bax and Fas/ FasL and downregulation of Bcl-2〔J〕.Asian Pac J Cancer Prev,2014;15(23):10407-12.

9Hui-Qin G,Guan-Nan Z,Yi-Jun W,etal.β-Elemene,a compound derived from Rhizoma zedoariae,reverses multidrug resistance mediated by the ABCB1 transporter〔J〕.Oncol Reports,2014；31(2):858-66.

〔2015-02-11修回〕

(編輯苑云杰)

廉曉宇(1964-)，男，主任醫(yī)師，主要從事膠質(zhì)瘤研究。

李英夫(1979-)，男，碩士，主治醫(yī)師，主要從事膠質(zhì)瘤研究。

R318

A

1005-9202(2016)16-3917-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.16.021