孫希才　李晗　王歡　王晶晶　胡俐　宋小樂　于華鵬　馬娜　王德輝

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·基礎(chǔ)研究·

白細(xì)胞介素10上調(diào)表達(dá)對(duì)家兔慢性細(xì)菌性鼻竇炎黏膜創(chuàng)傷修復(fù)的影響△

孫希才李晗王歡王晶晶胡俐宋小樂于華鵬馬娜王德輝

復(fù)旦大學(xué)附屬眼耳鼻喉科醫(yī)院耳鼻喉科上海200031

【摘要】目的觀察上調(diào)白細(xì)胞介素10(IL-10)的表達(dá)對(duì)家兔慢性細(xì)菌性鼻竇炎動(dòng)物模型上頜竇黏膜創(chuàng)傷修復(fù)的影響。方法以慢病毒(LV)為表達(dá)載體，上調(diào)IL-10的表達(dá)(LV-IL-10)。實(shí)驗(yàn)分3組：生理鹽水注射組、LV-IL-10治療組和LV-GFP注射組(GFP為綠色熒光蛋白)。制作家兔慢性細(xì)菌性鼻竇炎模型。在創(chuàng)傷前3 d，各組上頜竇內(nèi)側(cè)壁黏膜下分別注射生理鹽水、LV-IL-10和LV-GFP。于創(chuàng)傷后第3天和第10天取再生的上頜竇內(nèi)側(cè)壁黏膜，用實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)分別在mRNA水平和蛋白水平檢測(cè)相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)。蘇木素-伊紅(HE)染色和Masson三染色法觀察創(chuàng)傷后第10天再生黏膜的形態(tài)特征。結(jié)果在創(chuàng)傷后第3天和第10天再生的上頜竇黏膜中，LV-IL-10治療組的膠原沉積明顯減少，炎癥反應(yīng)較輕，且IL-6以及Ⅰ型和Ⅲ型膠原的mRNA表達(dá)水平明顯下降。 IL-6、IL-8以及Ⅰ型和Ⅲ型膠原的蛋白表達(dá)水平也明顯下降，但3組間再生的上頜竇黏膜中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGF-β)mRNA的表達(dá)無明顯差別。結(jié)論在家兔慢性細(xì)菌性鼻竇炎創(chuàng)傷修復(fù)的動(dòng)物模型中，上調(diào)IL-10的表達(dá)可以抑制再生黏膜中的炎癥反應(yīng)，減少膠原沉積，改善再生黏膜的組織重塑。(中國(guó)眼耳鼻喉科雜志，2016，16：10-15)

【關(guān)鍵詞】慢性鼻竇炎；創(chuàng)傷修復(fù)；白細(xì)胞介素10；慢病毒載體；兔

內(nèi)鏡鼻竇手術(shù)(endoscopic sinus surgery, ESS)已經(jīng)成為治療慢性鼻-鼻竇炎(chronic rhinosinusitis, CRS)最主要的一種手術(shù)方法[1]。術(shù)后鼻腔瘢痕粘連形成是影響ESS效果的主要因素之一。額竇手術(shù)后竇口再狹窄的發(fā)生率達(dá)10%～15%[2-4]，上頜竇口的再狹窄以及前篩中鼻甲與鼻腔外側(cè)壁之間的粘連發(fā)生率為1%～36%[5-7]。上調(diào)白細(xì)胞介素10(interleukin 10, IL-10)的表達(dá)可以抑制皮膚創(chuàng)傷修復(fù)過程中的瘢痕形成[8]。本研究以慢病毒(lentiviral vector, LV)作為表達(dá)載體，使得上頜竇黏膜中的IL-10高表達(dá)，觀察其在家兔慢性細(xì)菌性鼻竇炎動(dòng)物模型上頜竇黏膜創(chuàng)傷修復(fù)中的作用。

1材料與方法

1.1主要試劑和儀器

1.1.1主要試劑美國(guó)模式菌種收藏所(ATCC)標(biāo)準(zhǔn)菌株Ⅲ型肺炎鏈球菌(編號(hào)：49619)由本院檢驗(yàn)科微生物實(shí)驗(yàn)室饋贈(zèng)。慢病毒載體：Pwpxl-MOD； DH-5alpha感受態(tài)(Invitrogen公司)；IL-10上游引物選用BamHⅠ，下游引物選用SalⅠ。IL-10-BamH I:AATTCGGGATCCatgcacagctcagcactg；IL-10-Sal I:ATTG-ACGTCGACttagctttttatctt，設(shè)計(jì)好的引物送Invitrogen公司合成。包裝細(xì)胞293T細(xì)胞株(ATCC)；鼠源單克隆Anti-CD45(SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY公司)；羊抗鼠熒光二抗594(Molecular Probes公司)；DAPI(Sigma公司)；酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)試劑盒，IL-6、IL-8、IL-10、Ⅰ型和Ⅲ型膠原均購(gòu)自Uscn Life Science Technology Company。

1.1.2主要儀器聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction，PCR)儀(eppendorf公司)；電泳儀(Bio-rad公司)；熒光倒置顯微鏡(奧林帕斯公司)；冷凍超速離心機(jī)(Hitachi公司)；凝膠成像儀穩(wěn)壓DNA電泳儀(Tianneng公司)；數(shù)碼凝膠處理系統(tǒng)(天能科學(xué)儀器公司)；電熱恒溫水浴箱(上海?，攲?shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；實(shí)時(shí)PCR儀(ABI7300，應(yīng)用生物儀器公司，美國(guó))；旋渦振蕩器(FS-1，武漢瑞華儀器廠)；生物安全柜(BHC-1100ⅡA2，阿爾泰實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司)。

1.2方法

1.2.1家兔慢性細(xì)菌性鼻竇炎及創(chuàng)傷修復(fù)模型的制作家兔動(dòng)物級(jí)別：普通級(jí)，共30只，體重2 kg左右。實(shí)驗(yàn)前動(dòng)物于本院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心在標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境下飼養(yǎng)1周。分組：采用隨機(jī)數(shù)字表對(duì)30只家兔進(jìn)行分層隨機(jī)分組：①生理鹽水注射組；②LV-IL-10注射組；③LV-GFP注射組(GFP為綠色熒光蛋白)。每組進(jìn)一步分為術(shù)后3 d和術(shù)后10 d組。每組各5只。

家兔慢性細(xì)菌性鼻竇炎模型的制作：氯胺酮(35～50 mg/kg)+賽拉嗪(甲苯噻嗪5 mg/kg)肌內(nèi)注射麻醉；頭面部中線垂直切口長(zhǎng)約2.5 cm，分離上頜竇表面皮膚和骨膜，暴露上頜竇前壁；磨除上頜竇前壁骨質(zhì)；定位上頜竇內(nèi)側(cè)壁自然開口，用棉花將其阻塞；縫合切口。術(shù)后第1天，于上頜竇前壁向上頜竇內(nèi)注射Ⅲ型肺炎鏈球菌菌株1 mL，濃度3×108/mL。然后，在標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境下繼續(xù)飼養(yǎng)3個(gè)月制成慢性細(xì)菌性鼻竇炎動(dòng)物模型。

家兔慢性細(xì)菌性鼻竇炎創(chuàng)傷修復(fù)模型的制作：將上述飼養(yǎng)3個(gè)月制成的慢性細(xì)菌性鼻竇炎動(dòng)物模型沿原切口切開皮膚，去除上頜竇前壁的肉芽，暴露上頜竇腔，根據(jù)實(shí)驗(yàn)分組分別于上頜竇黏骨膜下注射生理鹽水、LV-IL-10和LV-GFP，各約200 μL(其中，LV-IL-10組200 μL液體中病毒顆?？偭繛?×108個(gè))，縫合皮膚切口。3 d后，沿原切口再次切開上頜竇前壁皮膚，定位上頜竇內(nèi)側(cè)壁，并用直徑為4 mm的電鉆于上頜竇內(nèi)壁上造孔，縫合皮膚，送回動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心繼續(xù)飼養(yǎng)用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。1.2.2慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建慢病毒載體為Pwpxl-MOD，從家兔脾臟組織獲取IL-10基因模板并進(jìn)行擴(kuò)增，對(duì)空載體Pwpxl-mod和PCR的回收產(chǎn)物用BamHⅠ和SalⅠ進(jìn)行雙酶切，將雙酶切載體和目的基因片段進(jìn)行連接反應(yīng)，將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌；重組質(zhì)粒酶切鑒定；將載體進(jìn)行測(cè)序，確定測(cè)序結(jié)果與IL-10 mRNA的基因序列基本吻合。病毒包裝系統(tǒng)為四質(zhì)粒系統(tǒng)，組成為pRsv-REV、pMDlg-pRRE、pMD2G、干擾質(zhì)粒。慢病毒包裝細(xì)胞轉(zhuǎn)染用胰蛋白酶消化對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的293T細(xì)胞，細(xì)胞密度為0.5×109/L時(shí)，接種于25 mL的15 cm細(xì)胞培養(yǎng)皿。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)60%～70%時(shí)轉(zhuǎn)染。實(shí)驗(yàn)最終獲得滴定病毒顆?？偭繛?×109個(gè)，總液體量為2 mL。

1.2.3免疫組織化學(xué)和Masson三染色實(shí)驗(yàn)鼠源單克隆Anti-CD45作為一抗，冷凍切片免疫組織化學(xué)法檢測(cè)各組黏膜標(biāo)本中白細(xì)胞的浸潤(rùn)情況。Masson三染色實(shí)驗(yàn)，分組同上。首先將上頜竇黏膜標(biāo)本用石蠟固定，切片脫蠟至蒸餾水；蘇木素染5～10 min，1%鹽酸乙醇分化，蒸餾水洗至切片變藍(lán)。麗春紅酸性品紅液染3～5 min，蒸餾水速洗。1%磷鉬酸水溶液作用5 min。傾去磷鉬酸，不用水洗，直接用2%亮綠液染3～5 min。0.5%冰醋酸沖洗切片。95%乙醇、無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。

1.2.4再生的上頜竇黏膜中膠原以及細(xì)胞因子的表達(dá)檢測(cè)分別于創(chuàng)傷后3 d和10 d取再生的上頜竇黏膜，實(shí)時(shí)PCR法在mRNA水平檢測(cè)IL-6、IL-10、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(transforming growth factor β，TGF-β)、Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原的表達(dá)。ELISA在蛋白水平檢測(cè)IL-6、IL-8、IL-10、Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原的表達(dá)，具體操作步驟根據(jù)產(chǎn)品說明書進(jìn)行。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SAS9.1對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。Student-Newman-Keuls檢驗(yàn)用于統(tǒng)計(jì)分析術(shù)后3 d和術(shù)后10 d各分組間IL-6、IL-8、IL-10及Ⅰ型和Ⅲ型膠原的表達(dá)。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1家兔慢性細(xì)菌性鼻竇炎模型將家兔上頜竇自然開口阻塞，注入Ⅲ型肺炎鏈球菌，5 d左右開始出現(xiàn)鼻腔膿性分泌物。3個(gè)月時(shí)，上頜竇內(nèi)仍充滿膿性分泌物，鼻竇黏膜增厚水腫(圖1)。

圖1.家兔慢性細(xì)菌性鼻竇炎動(dòng)物模型A.術(shù)后3個(gè)月，雙側(cè)上頜竇中的膿性分泌物；B.術(shù)后3個(gè)月，手術(shù)顯微鏡下觀察增厚、水腫的上頜竇黏膜；C.家兔慢性細(xì)菌性鼻竇炎上頜竇黏膜的蘇木素-伊紅染色，可見大量腺體增生，黏膜呈慢性炎性改變(20×)

2.2IL-10治療對(duì)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)的影響創(chuàng)傷后3 d取再生的鼻竇黏膜，通過免疫熒光組織化學(xué)法檢測(cè)白細(xì)胞共同抗原CD45,觀察再生黏膜中的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況，LV-IL-10治療組再生的上頜竇黏膜中炎性細(xì)胞染色明顯較低(圖2)。

圖2.創(chuàng)傷后3 d不同分組CD45免疫熒光染色示再生上頜竇黏膜中白細(xì)胞浸潤(rùn)情況A.生理鹽水注射組(20×)；B.LV-IL-10治療組(40×)；C.LV-GFP注射組(20×)；紅色示CD45染色，藍(lán)色示細(xì)胞核染色

2.3IL-10治療對(duì)再生上頜竇黏膜中膠原沉積的影響分別于創(chuàng)傷后3 d和10 d取再生的上頜竇黏膜，在mRNA水平和蛋白水平檢測(cè)Ⅰ型和Ⅲ型膠原的表達(dá)情況(圖3)。

與生理鹽水組和LV-GFP組相比，LV-IL-10治療組，創(chuàng)傷后3 d和創(chuàng)傷后10 d再生上頜竇黏膜的Ⅰ型膠原mRNA(P值分別為0.001 7、0.006 6)和蛋白(P值分別為0.008 5、0.003 0)的表達(dá)均明顯降低，Ⅲ型膠原mRNA(P值分別為0.025 6、0.007 0)和蛋白(P值分別為0.012 2、0.039 6)的表達(dá)均明顯降低，但生理鹽水組與LV-GFP組間Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA和蛋白的表達(dá)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.4IL-10治療對(duì)再生上頜竇黏膜中促炎細(xì)胞因子和促纖維化因子表達(dá)的影響于創(chuàng)傷后3 d和10 d，取再生的上頜竇黏膜在mRNA水平檢測(cè)IL-6、IL-10、TGF-β的表達(dá)，在蛋白水平采用ELISA檢測(cè)IL-6、IL-8、IL-10的表達(dá)(圖4)。

圖3.創(chuàng)傷后3 d和10 d各組再生上頜竇黏膜中膠原的表達(dá)A.Ⅰ型膠原mRNA的表達(dá)；B.Ⅲ型膠原mRNA的表達(dá)；C.Ⅰ型膠原蛋白的表達(dá)；D.Ⅲ型膠原蛋白的表達(dá)

圖4.創(chuàng)傷后3 d和10 d各組再生上頜竇黏膜中細(xì)胞因子的表達(dá)A.IL-6mRNA的表達(dá)；B.IL-10 mRNA的表達(dá)；C.TGF-βmRNA的表達(dá)；D.IL-6蛋白的表達(dá)；E.IL-8蛋白的表達(dá)；F.IL-10蛋白的表達(dá)

與生理鹽水組和LV-GFP組相比，LV-IL-10治療后，創(chuàng)傷后3 d和創(chuàng)傷后10 d再生上頜竇黏膜IL-6 mRNA(P值分別為0.035 4、0.033 2)和蛋白(P值分別為0.018 2、0.000 2)的表達(dá)均明顯降低， IL-8蛋白的表達(dá)明顯降低(P值分別為0.003 0、0.023 0)，IL-10 mRNA(P值分別為0.023 2、0.003 3)和蛋白(P值分別為0.002 1、0.028 9)的表達(dá)均明顯上升，但生理鹽水組與LV-GFP組間IL-6 mRNA和蛋白、IL-10 mRNA和蛋白、IL-8蛋白的表達(dá)差異均無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

生理鹽水組、LV-GFP組和LV-IL-10治療組間，兩兩比較，創(chuàng)傷后3 d和創(chuàng)傷后10 d再生上頜竇黏膜TGF-βmRNA表達(dá)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別為0.796 4、0.947 6)。

2.5再生的上頜竇黏膜組織學(xué)特征創(chuàng)傷后10 d，取再生的上頜竇黏膜行蘇木素-伊紅(hematoxylin eosin, HE)和Masson三染色法，觀察各組再生上頜竇黏膜的形態(tài)特征和固有層中的膠原沉積(圖5)。

圖5.不同分組再生的上頜竇黏膜中膠原沉積情況A.生理鹽水注射組Masson三染色；B.生理鹽水注射組HE染色；C.LV-IL-10治療組Masson三染色；D.LV-IL-10治療組HE染色；E.LV-GFP注射組Masson三染色；F.LV-GFP注射組HE染色；藍(lán)色示膠原沉積(20×)

3討論

目前，針對(duì)CRS術(shù)后鼻竇黏膜創(chuàng)傷修復(fù)的研究主要分為2個(gè)方面：①臨床現(xiàn)象的描述及修復(fù)階段的劃分[2-3]；②一些生物材料及生長(zhǎng)因子用于抑制術(shù)后瘢痕的形成，如透明質(zhì)酸及胰島素樣生長(zhǎng)因子1等[4-7]。從炎癥角度去研究鼻竇黏膜創(chuàng)傷修復(fù)的報(bào)道較少見。Watelet等[9]發(fā)現(xiàn)，中性粒細(xì)胞炎癥反應(yīng)影響鼻竇炎術(shù)后的創(chuàng)傷愈合，與創(chuàng)傷后鼻竇黏膜修復(fù)過程中的纖維化呈負(fù)相關(guān)。本課題前期研究利用家兔制作鼻竇黏膜創(chuàng)傷修復(fù)的模型，發(fā)現(xiàn)再生的鼻竇黏膜中有大量的膠原沉積，在此過程伴有過度的炎癥反應(yīng)以及促炎因子-抑炎因子表達(dá)的失衡[10]。有學(xué)者[11]在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的研究中發(fā)現(xiàn)，IL-10可以抑制炎癥因子腫瘤壞死因子α和IL-6的表達(dá)，而發(fā)揮抗炎作用。因此，在本研究中使用慢病毒作為表達(dá)載體，上調(diào)IL-10的表達(dá)，觀察其對(duì)再生的鼻竇黏膜中膠原沉積及促炎、促纖維化因子表達(dá)的影響。

本研究中，與對(duì)照組及LV-GFP組相比，LV-IL-10治療組再生的鼻竇黏膜中Ⅰ型和Ⅲ型膠原的沉積以及白細(xì)胞的浸潤(rùn)明顯減少，并伴有促炎因子IL-6、IL-8的表達(dá)降低，說明IL-10上調(diào)表達(dá)對(duì)減少鼻竇黏膜創(chuàng)傷修復(fù)后的瘢痕形成具有重要作用。其作用機(jī)制可能與IL-10下調(diào)促炎因子IL-6和IL-8的表達(dá)或抑制促纖維化因子的信號(hào)通路有關(guān)。在皮膚的創(chuàng)傷修復(fù)和腹部術(shù)后粘連形成的研究中，發(fā)現(xiàn)抑制IL-6的表達(dá)可以減少皮膚中的瘢痕形成及腹部粘連的形成[12-13]，說明IL-6是一種重要的促炎、促纖維化因子，抑制IL-6的表達(dá)可以減少炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，并使相關(guān)的細(xì)胞因子表達(dá)減少，從而導(dǎo)致細(xì)胞的增殖、纖維細(xì)胞和角蛋白細(xì)胞的移動(dòng)以及細(xì)胞外基質(zhì)的沉積減少[12]。我們發(fā)現(xiàn)在鼻黏膜的創(chuàng)傷修復(fù)過程中，IL-6也有著相似的作用機(jī)制，在本研究中，LV-IL-10治療后，再生組織中的IL-6表達(dá)及膠原沉積明顯降低，且再生鼻黏膜中的白細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少，與在皮膚創(chuàng)傷修復(fù)中的研究結(jié)果一致，進(jìn)一步表明IL-6與鼻竇黏膜創(chuàng)傷修復(fù)后的瘢痕形成有關(guān)。

LV-IL-10治療后再生鼻竇黏膜組織中IL-8的表達(dá)明顯降低，提示IL-8可能與瘢痕形成有關(guān)。IL-8也是一種重要的促炎因子，它可以介導(dǎo)中性粒細(xì)胞的趨化，在慢性鼻竇炎的研究中發(fā)現(xiàn)IL-8與鼻竇炎的中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)有關(guān)[14]。研究發(fā)現(xiàn)IL-8還與許多疾病的纖維化有關(guān)，如銀屑病和肺纖維化等[15-17]。在這些疾病中，IL-8分泌導(dǎo)致的炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)在組織的纖維化過程起重要作用。在前期研究中，我們發(fā)現(xiàn)家兔上頜竇黏膜創(chuàng)傷后再生的黏膜中IL-8的表達(dá)水平明顯升高，在本研究中，用IL-10治療后，家兔再生的上頜竇黏膜中IL-8的表達(dá)和膠原沉積明顯減少，且浸潤(rùn)的炎癥細(xì)胞也減少，表明IL-8的表達(dá)與鼻竇黏膜創(chuàng)傷修復(fù)后的瘢痕形成有關(guān)。

TGF-β具有重要的抗炎效應(yīng)，也是纖維化過程中的關(guān)鍵分子。TGF-β可以刺激組織金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)的產(chǎn)生，該因子可以抑制細(xì)胞外基質(zhì)的降解。Watelet等[18]研究了慢性鼻竇炎鼻息肉患者行鼻內(nèi)鏡手術(shù)后鼻腔分泌物中TGF-β1、TGF-β2的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組比較，術(shù)后1周鼻腔分泌物中TGF-β1、TGF-β2的蛋白濃度明顯升高，說明在慢性鼻竇炎鼻息肉術(shù)后，再生的鼻黏膜組織中TGF-β1、TGF-β2表達(dá)升高，可能與鼻竇炎術(shù)后再生黏膜的組織重塑有關(guān)。在肺纖維化研究中發(fā)現(xiàn)IL-10治療可以降低TGF-β的表達(dá)，而降低肺纖維化的程度[19]。在本研究中，LV-IL-10治療組與生理鹽水組和LV-GFP組相比TGF-β的表達(dá)無明顯改變，與肺纖維化的研究結(jié)果有所不同。其可能的原因?yàn)椋孩俦狙芯恐形覀兪褂寐约?xì)菌性鼻竇炎家兔制作創(chuàng)傷修復(fù)模型，炎性改變的上頜竇黏膜以水腫、增厚為主，創(chuàng)傷后再生的黏膜組織可能受周圍水腫組織的影響，而影響了TGF-β的表達(dá)，因此，LV-IL-10治療對(duì)TGF-β表達(dá)的調(diào)控不明顯；②在肝纖維化的體外研究中發(fā)現(xiàn)，IL-10單獨(dú)應(yīng)用對(duì)肝星狀細(xì)胞的膠原分泌無明顯作用，而對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的肝星狀細(xì)胞膠原的分泌具有明顯抑制作用，其作用機(jī)制為IL-10通過抑制TGF-β1誘導(dǎo)的CTGF基因表達(dá)而發(fā)揮抗纖維化效應(yīng)[20-21]，提示IL-10抗纖維化作用可能存在多種信號(hào)通路，其在鼻黏膜創(chuàng)傷修復(fù)中的抗纖維化作用是否與肺組織相似尚需進(jìn)一步研究[22-23]。

目前上調(diào)IL-10的表達(dá)減少纖維化已經(jīng)在多種疾病中有研究。IL-10在肺纖維化的進(jìn)程中的作用尚不清楚，但有研究[19]表明，IL-10治療可以減少肺纖維化。在大鼠慢性腎疾病模型中，給予IL-10治療，可以降低腎纖維化和間質(zhì)纖維化[24]。結(jié)合我們目前的研究，表明以慢病毒為載體使IL-10高表達(dá)可以抑制再生鼻竇黏膜中的炎癥反應(yīng)和下調(diào)促炎因子的表達(dá)，減少膠原沉積，降低纖維化以上動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，IL-10高表達(dá)可以為鼻黏膜的創(chuàng)傷修復(fù)提供有利的細(xì)胞因子局部微環(huán)境。其機(jī)制是通過下調(diào)促炎因子的表達(dá)，減少炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)，或抑制促纖維化信號(hào)通路而使再生的鼻黏膜中膠原沉積下降，改善再生黏膜的組織重塑。本研究為IL-10在鼻黏膜創(chuàng)傷修復(fù)中的應(yīng)用提供了理論依據(jù)，為減少鼻竇炎術(shù)后的瘢痕形成和局部粘連提供了新的思路。

參 考 文 獻(xiàn)

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(本文編輯楊美琴)

Effect of interleukin 10 overexpression on the wound healing in a rabbit model of chronic bacterial sinusitis

SUNXi-cai,LIHan,WANGHuan,WANGJing-jing,HULi,SONGXiao-le,YUHua-peng,MANa,WANGDe-hui.

DepartmentofOtorhinolaryngology,EyeEarNoseandThroatHospitalofFudanUniversity,Shanghai200031,ChinaCorresponding author： WANG De-hui， Email： wangdehuient@sina.com

【Key words】Chronic sinusitis; Wound healing; Interleukin 10; Lentiviral vector; Rabbit

【Abstract】ObjectiveTo observe the role of interleukin 10(IL-10)) overexpression on the wound healing in a rabbit model of chronic bacterial sinusitis. MethodsA rabbit wound-healing model was established in the maxillary sinus with chronic bacterial sinusitis. A lentiviral vector (LV) expressing IL-10 and green fluorescent protein (GFP) (LV-IL-10) or GFP alone (LV-GFP) was injected at the wound site 3 days before. Physiological saline was injected at the wound site 3 days before as normal control. At 3 and 10 days post wounded, the sizes of maxillary ostia were recorded, and histological changes in the sinus mucosa were examined by means of hematoxylin and eosin(HE) and Masson trichrome staining at 10 days post wounded. Real time polymerase chain reaction (RT-PCR) were used to measure the gene expression of IL-6, IL-10, TGF-β, and collagen types I and III.Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to detect the concentrations of IL-6, IL-8, IL-10, and collagen types I and III. ResultsBoth LV-IL-10 and LV-GFP were expressed in the wounds at 3 and 10 days post wounded. At 3 and 10 days, when compared with LV-GFP and physiological saline injection, LV-IL-10-treated wounds demonstrated decreased inflammation, collagen deposition and decreased quantities of proinflammatory mediators analyzed with statistically different levels of IL-6 and IL-8. However, there was no significant difference in the expression of transforming growth factor β (TGF-β) among the three groups. ConclusionsLocal application of lentvirus-mediated overexpression of IL-10 decreases the inflammatory response and collagen deposition in a rabbit wound-healing model of maxillary chronic sinusitis.(Chin J Ophthalmol and Otorhinolaryngol,2016,16:10-15)

通訊作者：王德輝(Email： wangdehuient@sina.com)

DOI:10.14166/j.issn.1671-2420.2016.01.004

(收稿日期2015-05-08)

△基金項(xiàng)目：上海市衛(wèi)生局青年基金(20124y047)