反相液相色譜法測(cè)定鹽酸氨溴素吸入溶液中苯扎氯銨的含量

卜宇倩*蔣宇丹**邵佶祥

( 上海禾豐制藥有限公司 上海 201206)

摘 要目的：建立鹽酸氨溴素吸入溶液中苯扎氯銨含量的反相液相色譜測(cè)定方法。方法：采用Agilent Zorbax SBC18色譜柱（4.6 mm × 250 mm，5 mm）；以0.02 mol/L庚烷磺酸鈉（含0.1%三乙胺，用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0±0.1）-乙腈（35∶65）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)208 nm；進(jìn)樣體積20 ml。結(jié)果：苯扎氯銨濃度在3.32～7.74 mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率為99.2%。結(jié)論：該方法快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好，可適用于鹽酸氨溴索吸入溶液中苯扎氯銨的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞苯扎氯銨 鹽酸氨溴索吸入溶液 反相液相色譜法

Determination of benzalkonium chloride in ambroxol hydrochloride inhalation solution by RP-HPLC

BU Yuqian*, JIANG Yudan**, SHI Jianguo

(Shanghai Harvest Pharmaceutical Co. Ltd., Shanghai 201206, China)

ABSTRACTObjective: To establish a RP-HPLC method for the quantitative analysis of benzalkonium chloride in ambroxol hydrochloride inhalation solution. Methods: RP-HPLC was performed on a column of an Agilent Zorbax SB- C18(4.6 mm × 250 mm，5 mm) with a mobile phase of 0.02 mol/L sodium 1-heptanesulfate solution (containing 0.1% triethylamine, adjusted pH to 3.0±0.1 by phosphate)-acetonitrile (35∶65) and at UV detection wavelength of 208 nm. Results: The standard curve was linear over the range of 3.32~7.74 mg/ml with the average recovery 99.2% (n=9). Conclusion: This method is fast, simple, accurate, sensitive with good reproducibility and can be applied in the determination of benzalkonium chloride in ambroxol hydrochloride inhalation solution.

KEY WORDSbenzalkonium chloride；ambroxol hydrochloride inhalation solution；RP-HPLC

鹽酸氨溴索（ambroxol hydrochloride）是目前臨床作用較強(qiáng)的黏液溶解型祛痰藥，廣泛應(yīng)用于各種急、慢性呼吸道疾病引起的痰液黏稠，咳痰困難。其霧化吸入溶液中含有防腐劑苯扎氯銨?！吨袊幍洹?010年版規(guī)定應(yīng)測(cè)定藥物制劑中抑菌劑的含量[1]和抑菌劑的抑菌效力[1]附錄215-216，但目前《中國藥典》2010年版收載的苯扎氯銨含量測(cè)定方法為萃取后氧化還原反應(yīng)[1]430-431，方法繁瑣，不利于微量苯扎氯銨的測(cè)定。本文參考文獻(xiàn)建立反相液相色譜法測(cè)定鹽酸氨溴素吸入溶液中苯扎氯銨的含量[2-7]。該方法快速、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于產(chǎn)品質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

Agilent L1260液相色譜儀，VWD檢測(cè)器、自動(dòng)進(jìn)樣器（安捷倫科技有限公司，美國）。Sartorius CPA225D電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司，德國）。

苯扎氯銨對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定研究所，批號(hào)：100549-201102，每1 ml含苯扎氯銨11.10 mg）。

鹽酸氨溴素吸入溶液（上海禾豐制藥有限公司，規(guī)格：2 ml：15 mg，批號(hào)：140604、140605、140606）。乙腈、庚烷磺酸鈉為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Agilent Zorbax SB- C18色譜柱(4.6 mm × 250 mm，5 mm)； 以0.02 mol/L庚烷磺酸鈉（含0.1%三乙胺，用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0±0.1）-乙腈（35∶65）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)208 nm；進(jìn)樣體積20 ml。

2.2 溶液配制

對(duì)照品溶液：精密量取苯扎氯銨對(duì)照品溶液1 ml，置100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 ml，置100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，制成5.55 mg/ml的溶液。

供試品溶液：精密量取鹽酸氨溴索吸入溶液1 ml，置50 ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，制成含5 mg/ ml的溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn)

按處方量，不加苯扎氯銨，配制空白輔料溶液，按2.2項(xiàng)下方法配制溶液，結(jié)果顯示，鹽酸氨溴索吸入溶液中鹽酸氨溴索及其他輔料對(duì)本方法中苯扎氯銨的測(cè)定均無干擾，該方法具有較強(qiáng)專屬性（圖1）。

2.4 線性范圍

精密量取苯扎氯銨對(duì)照品溶液1 ml，置100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻；分別精密量取3.0、4.0、5.0、6.0和7.0 ml，置100 ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以濃度為橫坐標(biāo)，苯扎氯銨兩峰面積之和為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，計(jì)算得回歸方程為：Y=16.70X–12.29，r=0.999 3。結(jié)果表明，苯扎氯銨在3.32～7.74 mg/ml 濃度范圍內(nèi)的線性良好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批供試品，分別按2.2配制6份供試品溶液并測(cè)定，測(cè)得苯扎氯銨平均含量為0.22 mg/ml，RSD為1.9%（n=6）（表1）。表明本方法重復(fù)性良好。

圖1 苯扎氯銨色譜圖

表1 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.6 回收率試驗(yàn)

分別按處方量配制含苯扎氯銨80%、100%、120%

的鹽酸氨溴索吸入溶液，按2.2配制供試品溶液，按2.1項(xiàng)下方法測(cè)定，計(jì)算回收率，平均回收率為99.2%，RSD=0.21%（n=9）。

2.7 樣品測(cè)定

取樣品按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，各20 ml注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以兩峰面積之和計(jì)算含量。測(cè)定三批鹽酸氨溴索吸入溶液中苯扎氯銨的含量分別為0.22、0.23和0.24 mg/ml。

3 討論

有文獻(xiàn)報(bào)道采用毛細(xì)管電泳法和紫外分光光度法測(cè)定苯扎氯銨[8-10]，但這些方法繁瑣；也有文獻(xiàn)采用蒸發(fā)光散色檢測(cè)器進(jìn)行含量測(cè)定[11]，但該法重復(fù)性較差；還有文獻(xiàn)采用氰基柱進(jìn)行檢查[12]，但該色譜柱為非通用色譜柱。本文方法采用高效液相色譜法，紫外分光光度檢測(cè)器，通用C18柱，方法快速、簡(jiǎn)便、重復(fù)性好、專屬性強(qiáng)。

經(jīng)紫外掃描，苯扎氯銨水溶液在208 nm有最大吸收波長(zhǎng)，故采用該波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定。

苯扎氯銨為同系物混合物[13]，美國藥典收載的苯扎氯銨含有n-C12H25、n-C14H29、n-C16H33三種同系物[14]。而國內(nèi)目前只有一家企業(yè)生產(chǎn)，主要以n-C12H25取代同系物為主，有時(shí)也含有較少量n-C14H29取代同系物。中國藥品生物制品檢定研究所提供的苯扎氯銨對(duì)照品溶液每1 ml中含苯扎氯銨為11.10 mg，n-C12H25取代同系物為66.27%，n-C14H29取代同系物為33.33%，液相色譜圖中兩個(gè)同系物分別出峰，計(jì)算含量時(shí)需將二者相加計(jì)算。

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收稿日期：（2014-12-09）

通訊作者：**蔣宇丹(1978-)，女 ，高級(jí)工程師，從事藥物分析研究。Tel：(021)58993670；E-mail：jjjyyyddd@sina.com

作者簡(jiǎn)介：*卜宇倩（1979-），女，工程師，從事藥品制劑研究。E-mail：2583804461@qq.com

文章編號(hào)：1006-1533(2015)09-0077-03

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

中圖分類號(hào)：TQ460.72; O657.72