王麗娜，　韓增磊，　李曉斐

(1.青島市傳染病醫(yī)院，山東 青島 266033；2. 青島市市立醫(yī)院，山東 青島 266033)

腎綜合征出血熱患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的變化及意義

王麗娜1，韓增磊2，李曉斐1

(1.青島市傳染病醫(yī)院，山東 青島 266033；2. 青島市市立醫(yī)院，山東 青島 266033)

摘要：目的研究腎綜合征出血熱(HFRS)患者淋巴細(xì)胞亞群絕對值及比率的變化，以探討淋巴細(xì)胞亞群在疾病的分期、治療和預(yù)后判斷中的作用，為臨床治療提供實驗依據(jù)。方法采用流式細(xì)胞儀檢測95例HFRS患者及30名正常對照者外周血T淋巴細(xì)胞亞群絕對值及比率。結(jié)果在HFRS各病期之間，CD3+T淋巴細(xì)胞絕對值差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，CD4+T細(xì)胞絕對值從輕型到危重型呈進行性下降，而CD8+T細(xì)胞絕對值升高；HFRS患者在發(fā)熱期CD4+T細(xì)胞比率已顯著下降，CD8+T細(xì)胞比率顯著升高，CD4+/CD8+比值顯著下降并倒置，與正常對照者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，至低血壓期和少尿期達極值。結(jié)論HFRS患者各病期淋巴細(xì)胞亞群比例嚴(yán)重失衡，動態(tài)檢測淋巴細(xì)胞亞群有助于疾病的分期、治療和預(yù)后判斷。

關(guān)鍵詞：T淋巴細(xì)胞亞群；腎綜合征出血熱；流式細(xì)胞術(shù)

中圖分類號：

文章編號：1673-8640(2015)01-0058-03R446.63

文獻標(biāo)志碼：碼：A

DOI：10.3969/j.issn.1673-8640.2015.01.014

作者簡介：王麗娜，女，1978年生，碩士，主管技師，主要從事分子生物學(xué)及傳染病臨床檢驗研究。

通訊作者：李曉斐，聯(lián)系電話：0532-81636139。

收稿日期：(2014-09-02)

腎綜合征出血熱( hemorrhagic fever with renal syndrome , HFRS)是由漢坦病毒引起的以鼠類為主要傳染源的自然疫源性疾病。臨床上以發(fā)熱、出血、腎功能損害為主要表現(xiàn)[1]。嚴(yán)重者可導(dǎo)致多臟器功能損害，危及生命。其發(fā)病機制與機體免疫功能有關(guān)，因此機體免疫功能研究在漢坦病毒致病機制中的作用越來越受到重視，為探討HFRS患者的免疫功能變化，我們對95例HFRS患者的CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞進行了研究。

材料和方法

一、研究對象

95例患者均為青島市傳染病醫(yī)院2010年1月至2012年12月收入院患者，男76例，女19例，年齡 (43±12)歲。診斷標(biāo)準(zhǔn)：嚴(yán)格按國家衛(wèi)生部1997年頒布的《流行性出血熱防治方案》制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)進行診斷分型。其中輕型16例、中型47例、重型22例、危重型3例、非典型7例。所有病例經(jīng)特異性HFRS IgM、IgG檢查均為陽性，臨床表現(xiàn)典型。正常對照組30名為健康獻血者，男20名，女10名，年齡 (29±10)歲。

二、方法

采靜脈血2 mL，乙二胺四乙酸抗凝后立即進行檢測。采用美國BD公司CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞計數(shù)試劑盒對細(xì)胞作熒光標(biāo)記，F(xiàn)ACS Calibur流式細(xì)胞儀測定其絕對值及比率。

三、統(tǒng)計學(xué)方法

結(jié)果

一、CD3+T細(xì)胞在HFRS患者不同病期略有減低(P>0.05)；CD4+T細(xì)胞在各病期呈進行性減低，與正常對照組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01或0.05)，多尿期開始恢復(fù)；CD8+T細(xì)胞絕對值在各病期減少，而CD8+T細(xì)胞比率明顯升高，CD4+/CD8+比值各期均顯著下降，與正常對照組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01或P<0.05)。HFRS患者病程中CD3+T細(xì)胞基本保持不變是由CD8+T細(xì)胞升高引起，表現(xiàn)為T細(xì)胞亞群中CD8+T細(xì)胞比率升高，而CD4+T細(xì)胞數(shù)比率在各期有不同程度降低(P<0.01或P<0.05)。見表1。

二、不同臨床病型HFRS患者除輕型外均存在不同程度的T淋巴細(xì)胞及亞群CD4+、CD8+T細(xì)胞絕對值的降低；隨病型的加重，CD4+T細(xì)胞絕對值在危重型達最低值。危重型患者CD3+T細(xì)胞的回升是以CD8+T細(xì)胞為主。CD4+T細(xì)胞比率隨病型的加重越來越低，而CD8+T細(xì)胞比率則顯著升高(P<0.01或P<0.05)，CD4+/CD8+比值愈低，病情愈重。見表2。

病期 例數(shù)CD3+T細(xì)胞絕對值(個/μL)CD4+T細(xì)胞絕對值(個/μL)比率CD8+T細(xì)胞絕對值(個/μL)比率CD4+/CD8+發(fā)熱期301917.6±483.31035.5±257.6*0.29±0.10*864.8±291.7**0.34±0.17*0.89±0.15**低血壓期181532.5±384.4642.4±284.5*0.21±0.20**907.3±128.3**0.39±0.15**0.46±0.20**少尿期191194.7±475.8363.8±113.5**0.25±0.11**975.8±101.5**0.40±0.21**0.54±0.23**多尿期181475.6±346.8401.4±193.4**0.33±0.22*1097.9±183.6*0.32±0.18*1.07±0.49*正常對照組302024.5±373.51328.5±353.60.42±0.191198.3±355.60.28±0.111.65±0.68

注：與正常對照組比較， *P<0.05、 **P<0.01

臨床病型例數(shù)CD3+T細(xì)胞絕對值(個/μL)CD4+T細(xì)胞絕對值(個/μL)比率CD8+T細(xì)胞絕對值(個/μL)比率CD4+/CD8+輕型162035.6±352.71071.6±293.5 0.38±0.21*1085.6±289.4 0.32±0.20*1.10±0.33中型471786.1±513.5*829.7±271.4**0.25±0.15**975.3±225.9*0.37±0.18*0.71±0.20*重型221017.6±524.3**525.6±297.5**0.20±0.10**625.4±273.5**0.47±0.15**0.40±0.13**危重型3883.5±158.6**325.8±142.1**0.15±0.04**515.7±183.6**0.64±0.34**0.21±0.07**正常對照組302024.5±373.51328.5±353.60.42±0.191198.3±355.60.28±0.111.65±0.68

注：與正常對照組比較，*P<0.05、 **P<0.01

討論

HFRS是由漢坦病毒引起的自然疫源性疾病,屬于病毒性出血熱中的HFRS，嚴(yán)重危害人類身體健康，病死率為3%～5%[2]。我國是世界上受漢坦病毒危害最為嚴(yán)重的國家[3]。HFRS的發(fā)病機制尚未完全闡明,多數(shù)研究資料提示該病的發(fā)生與病毒及機體的異常免疫反應(yīng)有關(guān)。本研究結(jié)果表明，HFRS患者T淋巴細(xì)胞亞群比例失調(diào)，CD4+T細(xì)胞絕對值及比率進行性減少，CD8+T細(xì)胞比率相對升高，但絕對值減少(P<0.01)，與文獻報道[4-5]結(jié)果一致?；颊唧w內(nèi)存在免疫反應(yīng)紊亂,在出血熱發(fā)病期內(nèi)存在體液免疫和細(xì)胞免疫功能紊亂：(1)漢坦病毒感染后CD4+T細(xì)胞相對減少，并激活CD4+T細(xì)胞分泌Th2類細(xì)胞因子[白細(xì)胞介素6(interlenkin 6, IL-6)等[6]],從而促進B細(xì)胞的活化和增殖，引起體液免疫功能亢進及病理損傷：(2)病毒感染后CD8+T細(xì)胞增多,尤以發(fā)熱期和低血壓少尿期為甚，CD8+T細(xì)胞中的細(xì)胞毒性T細(xì)胞(cytotoxic T cell，CTL)直接作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞清除病毒,同時也破壞靶細(xì)胞造成免疫病理損傷,導(dǎo)致全身微小血管廣泛損害,組織臟器充血、水腫、出血[7],尤其是腎臟的損傷最為嚴(yán)重。

各種T淋巴細(xì)胞亞群的比例失調(diào)與該病病情嚴(yán)重程度密切相關(guān)。動物實驗證明，漢坦病毒感染可使CTL數(shù)量增多，活性增強，CD8+T細(xì)胞增加越多，病情越重，對機體造成的損害也越重。對患者T細(xì)胞(CD3+)及其亞群CD4+、CD8+T細(xì)胞的檢測及分析CD4+/CD8+比值可反映機體細(xì)胞免疫的功能。本研究應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測T淋巴細(xì)胞及其亞群發(fā)現(xiàn)，CD3+T細(xì)胞中的2類亞群CD4+和CD8+T細(xì)胞的變化正好相反，CD4+T細(xì)胞百分比在發(fā)熱期、低血壓少尿期呈進行性降低，到低血壓少尿期時只有正常的1/2左右；CD8+T細(xì)胞在發(fā)熱期、低血壓少尿期呈進行性升高,到低血壓少尿期時達到頂峰,進而引起CD4+/CD8+比例減低甚至倒置。至多尿期淋巴細(xì)胞亞群各指標(biāo)開始逐漸好轉(zhuǎn),但至恢復(fù)期仍未完全正常，表明HFRS患者有嚴(yán)重的細(xì)胞免疫功能紊亂。危重型患者CD3+T細(xì)胞的回升是以CD8+T細(xì)胞為主。CD4+T細(xì)胞百分比隨病型加重越來越低，而CD8+T細(xì)胞百分比顯著升高(P<0.01或P<0.05)，CD4+/CD8+比值越低，病情越重，提示HFRS患者病程中存在細(xì)胞免疫功能紊亂，特別是危重型患者細(xì)胞免疫功能嚴(yán)重紊亂，可能是致病情加重的原因之一。

綜上所述,淋巴細(xì)胞亞群在HFRS患者各病期均存在紊亂,與病程的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后有明顯的關(guān)系。因此外周血淋巴細(xì)胞亞群的檢測有助于HFRS的分期、治療和預(yù)后判斷。

參考文獻

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(本文編輯：姜敏)