通信作者：尚坤(1978-)，女，吉林延吉人，博士，副教授，碩士研究生導(dǎo)師，主要從事神經(jīng)系統(tǒng)疾病的中醫(yī)藥治療及相關(guān)藥理研究。E-mail：495218735@qq.com

延冰片中延胡索乙素的含量測(cè)定

侯曉琳尚坤*

長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，吉林長(zhǎng)春130117

【摘要】目的：延冰片是由延胡索、冰片以及輔料制成的片劑，臨床用于冠心病、心絞痛的治療。研究通過(guò)對(duì)流動(dòng)相、峰形、分離度以及出峰時(shí)間等做比較，旨在制定延冰片中延胡索乙素的含量限度。方法：以延胡索乙素為延冰片的指標(biāo)成分，利用高效液相色譜法測(cè)定其含量，以甲醇-0.1%磷酸溶液(三乙胺調(diào)pH值6.0)(55∶45)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm。結(jié)果：延胡索乙素可以作為延冰片的定性鑒別；為本制劑制定了含量限定，而每克含胡索乙素不低于5.20mg。結(jié)論：采用高效液相色譜法測(cè)定延胡索乙素的含量，該方法精確、快速，可行性良好，適用于延冰片的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】延冰片；延胡索乙素；含量測(cè)定

基金項(xiàng)目：教育部博士點(diǎn)專(zhuān)項(xiàng)科研基金項(xiàng)目(20122227110003)；吉林省衛(wèi)生計(jì)生委科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目(2012s007)；吉林省教育廳“十二五”科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目。

作者簡(jiǎn)介：侯曉琳(1987-)，女，吉林長(zhǎng)春人，助理實(shí)驗(yàn)師。

【中圖分類(lèi)號(hào)】R284.1

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號(hào)】1007-8517(2015)22-0011-03

Abstract:Objective Rhizoma corydalis borneol tablets dosage form consists of corydalis rhizome,borneolum syntheticum and auxiliary material, mainly used for coronary heart disease, the treatment of angina pectoris.This article through to the mobile phase, peak shape, separating degree and the peak time and so on, Finally of this paper is to develop content limit extension of tetrahydropalmatine, in rhizoma corydalis borneol. Methods Using orthogonal design method, taking the extract the alkaloids content as index, The quality standards for tetrahydropalmatine, borneol tablets dosage form. Quantitative analysis of its content by HPLC.With methanol - 0.1% phosphoric acid solution (triethylamine adjust pH value to 6.0) (split 55∶45) as mobile phase; Detection wavelength of 280 nm. Results The formulation for tetrahydropalmatine as qualitative identification standard, the content of tetrahydropalmatine shall not be less than 5.20mg/g. Conclusion Using this method for determining the content of tetrahydropalmatine .This experiment optimized production technology is considered feasible and reasonable. And the quality is stable and controllable.

Keywords:Rhizoma corydalis borneol; Tetrahydropalmatine; Content determination

收稿日期：(2015.08.05)

The Content Determination of the Tetrahydropalmatine of Rhizoma corydalis borneol

Hou XiaolinSHANG Kun*

Changchun Chinese medicine University,Changchun 130117,China

延胡索為罌粟科紫堇屬多年生草本植物延胡索(CorydalisyanhusuoW.T.Wang)的干燥塊莖，民間又稱(chēng)為玄胡、元胡、玄胡索，主要分布于河北、山東、江蘇、浙江、內(nèi)蒙古等地[1]，與山芥、將離、浙貝等并稱(chēng)“浙八味”。延胡索是活血止痛、利氣之良藥，是活血化瘀，理氣止痛，鎮(zhèn)靜和催眠之佳品,尤以止痛、鎮(zhèn)痛之功效著稱(chēng)于世[2-3]。臨床研究發(fā)現(xiàn)，中藥制劑延胡索醇提物可以降低心肌耗氧量，同時(shí)可以有效地緩解心絞痛和刺激引起的疼痛、失眠、焦慮等[4]。依據(jù)延冰片處方中藥材有效成分的化學(xué)性質(zhì)研究[5]，采用高效液相色譜法測(cè)定三批延冰片試樣中延胡索乙素的含量，同時(shí)制定延冰片片劑中延胡索乙素的含量限度。

1儀器與試藥

1.1儀器Agilent 1260高效液相色譜儀；EL-204十萬(wàn)分之一分析天平。

1.2試劑延胡索乙素對(duì)照品(批號(hào)：0726-200208，中國(guó)藥品生物制品研究院)；延胡索藥材均由長(zhǎng)春宏檢藥材公司提供；甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1吸收波長(zhǎng)(λmax)的選擇精密移取延胡索乙素對(duì)照品溶液和供試品溶液，以無(wú)水乙醇溶液為空白，在190~350nm處進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，結(jié)果見(jiàn)圖1、2。

圖1　延胡索乙素對(duì)照品溶液最大波長(zhǎng)掃描圖

圖2　供試品溶液最大波長(zhǎng)掃描圖

2.2色譜條件的確定參考相關(guān)文獻(xiàn)及預(yù)試驗(yàn)，使用Agilent1260 高效液相色譜儀，以甲醇-0.1%磷酸溶液(三乙胺調(diào)pH值至6.0)(55∶45)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm。[1]

2.3溶液的制備

2.3.1對(duì)照品溶液的制備取延胡索乙素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含46μg的溶液，即得。

2.3.2供試品溶液的制備取本品粉末約0.5g(過(guò)三號(hào)篩)，置錐形瓶中，精密加入濃氨試液-甲醇(1∶20)混合溶液50ml，冷浸1h后加熱回流1h，冷卻至室溫，搖勻，濾過(guò)。取續(xù)濾液25ml，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中并稀釋至刻度，搖勻，取續(xù)濾液，過(guò)濾膜即得。

分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)圖3、4。

圖3　延胡索乙素對(duì)照色譜圖

2.4不同提取方法對(duì)延胡索乙素含量的影響按照2010版《中國(guó)藥典》一部中決明子含量測(cè)定項(xiàng)下供試品溶液的制備中，延胡索采用回流提取的方法，同時(shí)選擇超聲提取與其對(duì)比，提取時(shí)間為30min，后續(xù)分離純化方法相同。將延胡索乙素對(duì)照品與兩個(gè)不同方法處理的供試品溶液注入液相色譜儀10μl，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　不用提取方法延胡索乙素的含量

由表1可知，回流提取與超聲提取延胡索乙素含量無(wú)較明顯差異，為使提取方法簡(jiǎn)單省時(shí)，實(shí)驗(yàn)采用超聲提取30min的方法對(duì)供試品粉末進(jìn)行提取。

2.5中試藥材的延胡索乙素含量測(cè)定

2.5.1藥材的制備取本品粉末約1g，過(guò)三號(hào)篩，電子天平精密稱(chēng)定，置燒瓶中，精密加入濃氨試液-甲醇(1∶20)混合溶液50ml，超聲處理30min后，冷卻至室溫，定容，搖勻，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液15ml，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，過(guò)濾膜即得[1]。

精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，結(jié)果見(jiàn)圖5、表2。

圖5　藥材色譜圖

表2　藥材含量表

由表2可知，三批藥材延胡索乙素的平均含量為0.65mg/g。按2010版《中國(guó)藥典》延胡索含量的規(guī)定，本品按干燥品計(jì)算，含延胡索乙素(C21H25NO4)不得少于0.050%，所以三批藥材均為合格藥材。

2.6方法學(xué)考察

2.6.1線(xiàn)性范圍的考察分別精密吸取濃度為0.044mg/ml的延對(duì)照品溶液4、8、12、16、22、24μl，設(shè)定序列，注入液相色譜儀，橫坐標(biāo)以對(duì)照品進(jìn)樣量為參數(shù)，縱坐標(biāo)以峰面積為參數(shù)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得到回歸方程為：y=41.346x+2,1924，R2=1。表明進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。見(jiàn)表3、圖6。

表3　線(xiàn)性關(guān)系考察結(jié)果

2.6.2精密度試驗(yàn)取濃度為0.044mg/ml的對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，進(jìn)樣量為10μl，測(cè)定其峰面積。計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，由表4數(shù)據(jù)可知，精密度試驗(yàn)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.42%，符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。

表4　精密度試驗(yàn)結(jié)果

表5　穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.6.3穩(wěn)定性試驗(yàn)取濃度為0.044mg/ml的對(duì)照品溶液和供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、12h注入高效液相色譜儀，進(jìn)樣量10μl。結(jié)果表明，延胡索乙素對(duì)照品溶液和供試品溶液穩(wěn)定性的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.46%和2.64%，說(shuō)明二者在12h內(nèi)穩(wěn)定性較好，符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。

2.6.4重現(xiàn)性試驗(yàn)取批號(hào)為20131101的片劑樣品，精密稱(chēng)量，平行處理6份作為供試品溶液，注入液相色譜儀，進(jìn)樣量為10μl，結(jié)果延冰片片劑中延胡索乙素的平均含量5.01mg/g，其相應(yīng)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.89%，符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。見(jiàn)表6。

表6　重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果

2.6.5加樣回收率試驗(yàn)取6份與重現(xiàn)性試驗(yàn)同批次的片劑，即已知含量為5.01mg/g，精密稱(chēng)定，分別精密加入濃度為0.044mg/ml的延胡索乙素對(duì)照品0.25g，按含量測(cè)定項(xiàng)下供試品溶液的制備方法進(jìn)行操作，計(jì)算其加樣回收率，結(jié)果片劑的回收率均在95%~105%之間，平均回收率是99.04%，均符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。見(jiàn)表7。

表7　延胡索乙素回收率試驗(yàn)

2.7延冰片中延胡索乙素的含量測(cè)定按延冰片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測(cè)定項(xiàng)下方法，制備三批供試品溶液。進(jìn)樣量為10μl，注入色譜儀，結(jié)果三批延冰片片劑樣品中延胡索乙素的平均含量為5.435mg/g。見(jiàn)表8。

表8　延冰片中延胡索乙素的含量測(cè)定結(jié)果

3討論

本試驗(yàn)對(duì)流動(dòng)相的篩選做了大量嘗試，試用了不同溶劑及不用比例、不同pH的溶液進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果以本文中所述的流動(dòng)相為最佳，峰形、分離度、出峰時(shí)間等較好。

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中有關(guān)含量測(cè)定成分的分析：考慮延胡索中延胡索乙素的含量、轉(zhuǎn)移率、加速與長(zhǎng)期穩(wěn)定性均符合要求。參照2010版《中國(guó)藥典》一部延胡索含量測(cè)定項(xiàng)，確定延冰片的檢測(cè)成分為延胡索乙素。根據(jù)三批延冰片片劑樣品中延胡索乙素的平均含量為5.435mg/g，在平均含量的基礎(chǔ)上，總含量下浮20%制定本制劑含量限度，即本品每克中含延胡索乙素(C21H25NO4)不得少于5.20mg，為本品制定了含量限度。

參考文獻(xiàn)

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2] 劉芳，羅躍娥.延胡索研究概況[J].天津中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，24(4):240-242.

[3] 黃云，陳華師.中藥延胡索的研究進(jìn)展[C]//中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)中藥炮制分會(huì).2011年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集，2011.

[4] Corey E J, Cheng X M. The logic of chemical synthesis[M].New York: John Wiley&Sons, 1989.

[5] 張萍.延胡索提取物治療冠心病室性心律失常的機(jī)理研究[D].北京：北京中醫(yī)藥大學(xué)，2012.