吲哚美辛栓對急性胰腺炎大鼠促炎和抗炎因子的影響

李榮1，2，韓真2，劉少鋒2，王運(yùn)東2，汪潤芝2，何池義2，袁鶴鳴2

(皖南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 弋磯山醫(yī)院1.健康服務(wù)中心；2.消化內(nèi)科，安徽蕪湖241001)

【摘要】目的：探討非甾體類非特異性抗炎藥吲哚美辛栓對急性胰腺炎大鼠、促抗炎因子的影響及其可能的機(jī)制。方法：48只雄性SD大鼠隨機(jī)分為急性胰腺炎組，吲哚美辛治療組和假手術(shù)組3組。各組于術(shù)后6 h、24 h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)分批處死大鼠，檢測血清淀粉酶(AMS)、血清TNF-α、IL-6、IL-4、IL-10水平，觀察胰腺標(biāo)本的大體改變并取胰腺組織經(jīng)HE染色,采用改良Schmidt病理學(xué)評分。結(jié)果:吲哚美辛治療組在血清淀粉酶、胰腺病理評分及促抗炎因子水平方面均較急性胰腺炎組明顯改善，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論：吲哚美辛通過調(diào)節(jié)促炎和抗炎因子的水平，從而改善胰腺組織炎癥反應(yīng)程度，在調(diào)節(jié)免疫平衡方面起了一定的作用。

【關(guān)鍵詞】急性胰腺炎；吲哚美辛；炎癥因子

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】【中圖號】R 576A

DOI【】10.3969/j.issn.1002-0217.2015.06.005

文章編號：1002-0217(2015)06-0533-05

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)

收稿日期：2015-05-27

作者簡介：肖良(1987-)，男，2014級碩士研究生，(電話)15655377878，(電子信箱)459974865@qq.com；

通訊作者徐宏光，男，主任醫(yī)師，教授，碩士生導(dǎo)師，(電子信箱)xuhg@medmail.com.cn，.

Effects of indomethacin on inflammatory and anti-inflammatory cytokines in rats of acute pancreatitisLIRong,HANZhen，LIUShaofeng，WANGYundong，WANGRunzhi，HEChiyi，YUANHeming

Department of Gastroenterology,The first Affiliated Hospital of Wannan Medical College,Wuhu 241001，China

Abstract【】Objective：To investigate the effects of indomethacin on the inflammatory and anti-inflammatory cytokines modulation in rats of acute pancreatitis and the potential mechanism of such nonsteroidal anti-inflammatory drugs.Methods:Forty-eight male SD rats were randomized into groups of acute pancreatitis(group AP),indomethacin therapy(group IN) and sham operation(group OP).Animals in the three groups were sacrificed respectively at 6 h and 24 h after treatment for determination of serum-amylase(AMS)level.Enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) technique was used to detect the blood levels of TNF-α,IL-6,IL-4 and IL-10.Pathological changes in the pancreas were observed and examined by light microscopy together with modified Schmidt scoring.Results:Compared with the other two groups,indexes,including blood serum-amylase levels,pathological scores and the blood levels of TNF-α,IL-6,IL-4 and IL-10,were significantly improved in group IN,and the difference was statistically significant.Conclusion:Indometacin may improve the inflammation of pancreas through modulating the serum levels of both inflammatory and anti-inflammatory factors in rats with acute pancreatitis,which suggests that this nonsteroid can function in boosting the immune balance.

【Key words】 acute pancreatitis;indomethacin;cytokine

急性胰腺炎(acute pancreatitis，AP)并發(fā)多系統(tǒng)器官功能衰竭是其主要死亡原因。促抗炎因子平衡學(xué)說認(rèn)為，當(dāng)受到炎癥創(chuàng)傷等刺激時(shí)，機(jī)體通過大量釋放炎癥細(xì)胞因子啟動保護(hù)機(jī)制，易出現(xiàn)全身炎癥反應(yīng)綜合征(systemic inflammatory response syndrome，SIRS)，繼而導(dǎo)致代償性抗炎反應(yīng)綜合征(compensatory anti-inflammatory responsesyndrome，CARS)，同時(shí)伴有內(nèi)源性抗炎因子過度釋放，使機(jī)體出現(xiàn)免疫失衡[1]。因此，如何在發(fā)病早期阻斷炎癥級聯(lián)反應(yīng)，促進(jìn)促抗炎因子的免疫平衡是防止病情惡化和降低病死率的關(guān)鍵。通過動物實(shí)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)吲哚美辛栓對急性胰腺炎大鼠血中炎癥細(xì)胞因子TNF-α、IL-6和抗炎癥細(xì)胞因子IL-4、IL-10等有不同程度的影響，且對胰腺炎病情有改善作用。

1材料和方法

1.1動物模型和實(shí)驗(yàn)分組健康雄性SD大鼠48只，清潔級，體質(zhì)量200～250 g，購自浙江省動物實(shí)驗(yàn)中心，許可證號sudaF(k7)120080033。按體質(zhì)量輕重編號，隨機(jī)(抽簽法)分為急性胰腺炎(AP)組、吲哚美辛(IN)組和假手術(shù)(SO)組，每組又分術(shù)后6 h、24 h 2個(gè)時(shí)間點(diǎn)，各8只。AP組模型制作參照傳統(tǒng)的Aho等[2]介紹的方法；IN組：造模同AP組，僅在手術(shù)結(jié)束時(shí)予以吲哚美辛栓15 mg/kg納肛；SO組：開腹后，翻動十二指腸及胰腺組織數(shù)次，不對十二指腸乳頭逆行插管，其余均同AP組。

1.2胰腺組織病理學(xué)檢測 SAP病變程度評定：由病理科兩位醫(yī)生在光學(xué)顯微鏡下對胰腺組織病理雙盲評分，并參照改良Schmidt評分標(biāo)準(zhǔn)對胰腺組織損傷進(jìn)行定量評估。

1.3血清淀粉酶測定將肝素鈉抗凝管內(nèi)1 mL血清3000 r/min，離心10 min，取上清液置于-80℃冰箱保存待檢，采用酶法(麥芽6糖)檢測血清淀粉酶。

1.4血漿TNF-α、IL-6、IL-4、IL-10檢測采用ELISA法。

2結(jié)果

2.1胰腺組織病理學(xué)改變SO組可見胰腺組織輕度充血水腫，未見壞死及皂化斑，腹腔無積液，AP組葉間隙及腺泡間隔顯著擴(kuò)張，原有分葉結(jié)構(gòu)模糊消失，腺泡結(jié)構(gòu)破壞，大量中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞浸潤，局部血管壁壞死、破潰，紅細(xì)胞進(jìn)入胰腺組織，可見面積不等的腺細(xì)胞壞死。IN組炎癥細(xì)胞較SO組增多，葉間隙增寬，見胰腺組織充血，水腫，有少量局灶性腺泡壞死，程度較AP組減輕(見圖1、2)。

2.2血清淀粉酶檢測各組血清淀粉酶測定數(shù)據(jù)滿足方差齊性，故采用單因素方差分析，組間比較采用SNK和LSD，結(jié)果顯示，AP組和IN組血清AMS 值較SO組顯著升高(P<0.01)，AP組較IN組血清AMS 值明顯升高(P<0.05)，SO組和IN組不同時(shí)段血清AMS不存在差異(P>0.05)，AP 24 h較AP 6 h血清AMS值明顯升高(P<0.01)，見表1。

圖1胰腺組織6 h病理改變(HE ×400)

圖2胰腺組織24 h病理改變(HE ×400)

組別6h24ht值P值SO組679.88±176.09a509.88±131.64a2.1870.046AP組5516.62±1254.90b7599.00±1312.30b3.2440.006IN組3592.50±1266.83c4543.25±1289.46c1.4880.159F值44.32789.192P值<0.01<0.01

注：各時(shí)間段，不同組間兩兩比較采用q檢驗(yàn)，兩組間字母不同表示P<0.05

2.3血清TNF-α、IL-6、IL-4、IL-10檢測各組血清細(xì)胞因子測定數(shù)據(jù)滿足方差齊性，故采用單因素方差分析，組間比較采用SNK和LSD，結(jié)果顯示，TNF-α、IL-6值A(chǔ)P組和IN組血清較SO組顯著升高(P<0.05)，且AP組較IN組升高明顯(P<0.05)，而IL-4、IL-10值A(chǔ)P組和IN組較SO組顯著降低(P<0.05)，且AP組較IN組降低明顯(P<0.05)，同一細(xì)胞因子不同時(shí)段比較差異有顯著性 (P<0.05)，具體表現(xiàn)為促炎因子TNF-α、IL-6值隨時(shí)間推移呈下降趨勢，而抗炎因子IL-4、IL-10值隨時(shí)間推移呈上升趨勢(見表2)。

組別TNF-α6h24hIL-66h24hIL-46h24hIL-106h24hSO組151.10±6.77a131.28±6.72a95.60±5.10a79.53±4.25a38.18±2.11a48.53±2.82a32.03±1.44a36.66±1.47aAP組252.70±26.81b205.65±5.83b138.14±18.45b118.54±6.29b18.53±2.34b24.30±3.37b18.19±0.96b20.99±1.30bIN組169.03±5.92c147.25±5.12c108.34±11.50a89.32±6.42c30.37±4.68c39.76±6.85c25.62±3.55c30.50±4.11cF值88.257349.08422.93299.93473.72054.52773.79571.964P值<0.01<0.01<0.01<0.01<0.01<0.01<0.01<0.01

注：各時(shí)間段，不同組間兩兩比較采用q檢驗(yàn)，兩組間字母不同表示P<0.05

3討論

目前認(rèn)為炎癥細(xì)胞過度活化及炎癥介質(zhì)細(xì)胞因子的失控性釋放在急性胰腺炎的發(fā)展進(jìn)程中是個(gè)至關(guān)重要的因素，是導(dǎo)致胰腺持續(xù)壞死和多臟器功能衰竭(multiple organ dysfunction syndrome，MODS)的重要機(jī)制之一[3]。

急性胰腺炎時(shí)，各種炎癥細(xì)胞遭到異常激活，釋放出大量細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)，促使瀑布樣級聯(lián)反應(yīng)的發(fā)生，促炎細(xì)胞因子如TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8等過量釋放，導(dǎo)致SIRS的發(fā)生。但單核巨噬細(xì)胞活化后釋放促炎因子的同時(shí)也釋放如IL-10、IL-4等內(nèi)源性抗炎介質(zhì)，導(dǎo)致CARS的發(fā)生[4]。促抗炎因子的過度反應(yīng)及不平衡，導(dǎo)致胰腺炎癥、甚至胰腺壞死并造成胰外多臟器損傷，并誘導(dǎo)新的細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)產(chǎn)生,循環(huán)中出現(xiàn)第二次細(xì)胞因子高峰,造成惡性循環(huán)，機(jī)體相繼發(fā)生多臟器功能障礙,最終發(fā)展成多器官功能衰竭[5]。大量動物實(shí)驗(yàn)及臨床資料表明，在急性胰腺炎中血清和細(xì)胞內(nèi)的某些細(xì)胞因子(IL-l、IL-6、IL-8和TNF-a等)的濃度均明顯升高，其濃度與急性胰腺炎的病情嚴(yán)重程度呈正相關(guān)；而阻斷炎性介質(zhì)的作用可降低急性胰腺炎的嚴(yán)重程度并提高治療效果[6]。本實(shí)驗(yàn)中急性胰腺炎組動物模型造模后血中的炎癥性細(xì)胞因子TNF-α和IL-6以及具有免疫抑制效應(yīng)的抗炎癥細(xì)胞因子IL-4和IL-10均明顯增高，證明了在急性胰腺炎病程中的確存在免疫應(yīng)激和免疫抑制先后并存的雙向免疫異常狀態(tài)。

目前，治療急性胰腺炎的藥物很多，抑制胰酶分泌的藥物有生長抑素及其類似物、甲磺酸加貝酯、烏司他丁等。但無論是生長抑素還是加貝酯都存在價(jià)格昂貴、需要持續(xù)用藥等缺點(diǎn)。因此尋找療效確切，使用方便，價(jià)格適宜的藥物預(yù)防和治療急性胰腺炎仍是近年研究的熱點(diǎn)。

非甾體抗炎藥(non steroidal anti-inflammatory drugs,NSAIDs)其作用機(jī)制為抑制環(huán)氧合酶(cyclooxygenase,COX),阻斷花生四烯酸轉(zhuǎn)化為前列腺素,從而產(chǎn)生解熱、鎮(zhèn)痛和消炎作用。COX分為COX-1和COX-2。COX-1屬于管家基因。而COX-2則是一種早期炎癥階段較上游的酶類，在多種炎癥介質(zhì)、細(xì)胞因子和癌基因等的誘導(dǎo)下表達(dá)。據(jù)此推測抑制COX-2的誘導(dǎo)催化作用將會對急性胰腺炎及全身炎癥反應(yīng)的治療起到積極作用。本研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)過吲哚美辛處理的治療組大鼠在術(shù)后6 h、24 h血清中促炎因子TNF-α、IL-6較對照組急性胰腺炎組明顯降低，而抗炎因子IL-4、IL-10則較對照組明顯增高，提示NSAIDs在調(diào)節(jié)免疫、減輕炎癥反應(yīng)方面的作用。

急性胰腺炎患者常有持續(xù)的疼痛和發(fā)熱，吲哚美辛是最強(qiáng)的PG合成酶抑制藥物之一，臨床常用于急性胰腺炎時(shí)疼痛和發(fā)熱的對癥治療。從理論上講，NSAIDs完全可用于急性胰腺炎的治療。我國鄒曉平等進(jìn)行了一項(xiàng)大樣本薈萃分析得出非甾體抗炎藥能降低ERCP術(shù)后胰腺炎的總發(fā)病率，也能降低中重度ERCP術(shù)后胰腺炎的發(fā)病率；且非甾體抗炎藥沒有導(dǎo)致不良反應(yīng)增加，便宜，安全，給藥方式簡單。建議內(nèi)鏡醫(yī)生廣泛使用非甾體抗炎藥，使患者獲益[7]。此前的研究多認(rèn)為NSAIDs用于預(yù)防ERCP術(shù)后胰腺炎的作用機(jī)制主要在于抑制磷脂酶A2和抗炎癥反應(yīng)，因此日本及歐洲內(nèi)鏡協(xié)會在PEP防治指南中作為一級證據(jù)列出[8-9]。但吲哚美辛在調(diào)控促抗炎因子方面的作用研究較少，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，經(jīng)吲哚美辛預(yù)處理的大鼠在胰腺組織病理改變、血清淀粉酶等評價(jià)指標(biāo)上均較對照組明顯改善，同時(shí)兩組促炎癥因子和抗炎癥因子呈現(xiàn)不同的變化，提示NSAIDs在調(diào)控促抗炎因子的免疫平衡方面發(fā)揮了一定的作用，但其作用機(jī)制仍有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證實(shí)。

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