益氣扶正復(fù)方提取物對小鼠免疫功能及荷瘤生存時(shí)間的影響

梁健，梁楚燕，吳亞運(yùn)，劉華楨，朱冬梅，侯少貞*

(廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，廣州 510006)

摘要：目的研究益氣扶正復(fù)方提取物對小鼠免疫功能及荷瘤生存時(shí)間的影響。方法采用小鼠碳廓清法和雞紅細(xì)胞所致的血清溶血素抗體生成實(shí)驗(yàn)來觀察益氣扶正復(fù)方提取物對免疫的調(diào)節(jié)作用，通過檢測S180腹水瘤小鼠生命延長率實(shí)驗(yàn)來測定藥物對荷瘤小鼠的影響。結(jié)果益氣扶正復(fù)方提取物低、中、高劑量組的脾臟系數(shù),廓清指數(shù)K的值均大于醋酸潑尼松模型組(P<0.05);益氣扶正復(fù)方提取物低、中、高劑量組及青春寶組的血清溶血素水平的值均大于空白組(P<0.01);益氣扶正復(fù)方提取物低、中、高劑量組及氟尿嘧啶組的生命延長率均大于空白組(P<0.01)。結(jié)論益氣扶正復(fù)方提取物具有提高機(jī)體免疫力和抗腫瘤作用。

關(guān)鍵詞：益氣扶正；免疫功能；荷瘤小鼠

DOI::10.13463/j.cnki.jlzyy.2015.06.028

中圖分類號(hào)：R285.5文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1003-5699(2015)06-0620-03

基金項(xiàng)目:國家自然科學(xué)

作者簡介:梁健(1988-)，男，碩士研究生，主要從事中藥保健品藥物的研發(fā)。

收稿日期:(責(zé)任編輯：趙玉芝2014-08-24)

*通信作者:侯少貞，電話-(020)39358626，電子信箱-hsz0214@gzuce.edu.cn

Effect of Yiqi righting Compound extract on mice immune system

and the survival time of tumor-bearing mice

LIANG Jian,LIANG Chuyan,WU Yayun,LIU Huazhen,ZHU Dongmei,HOU Shaozhen*

(School of Chinese Pharmaceutical Science,Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangzhou,510006,China)

Abstract:ObjectiveTo observe the effect of Yiqi righting Compound extract on mice immune system and the survival time of tumor-bearing mice.MethodsThe immunomodulatory effect of Yiqi righting Compound extract was assessed by determining the capacity of carbon particle clearance in normal mice and generation of hemolysin antibody induced by chicken red blood cell (CRBC).To determine the effect of drugs on tumor-bearing mice by detecting S180 ascites tumor in mice life prolonging rate.ResultsThe atrophy of mouse spleen and clearance index of Yiqi righting compound extract of low,medium and high dose groups have been increased,compared with the Prednisone Acetate model group (P<0.05).The level of serum hemolysin in Yiqi righting compound extract of low,medium and high dose groups and the Qingchunbao Group are higher than the blank group(P<0.01).The prolongation of life span of Yiqi righting compound extract and the fluorouracil group are longer than the blank group (P<0.01).ConclusionYiqi righting compound extract can enhance the immunity function and has antitumor action.

Keywords:Yiqi righting;immune function;tumor-bearing mouse

近年來，中藥抗腫瘤和增強(qiáng)機(jī)體免疫功能的研究越來越受到人們的重視，中藥復(fù)方作為中醫(yī)臨床用藥的主要形式，體現(xiàn)了中醫(yī)整體觀和辨證論治的特色[1-2]。益氣扶正復(fù)方主要由黃芪[3]、絞股藍(lán)、丹參、野金柴這4種中藥材按照一定比例配伍組成的復(fù)方制劑。本實(shí)驗(yàn)旨在探討以補(bǔ)虛藥物作為君藥組成的益氣扶正復(fù)方對小鼠免疫功能的影響及其抗腫瘤的作用。

1實(shí)驗(yàn)材料

昆明小鼠18～24 g，雌雄各半，廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào):SCXK(粵)2008-0020(0065103)。益氣扶正復(fù)方提取物，廣州中醫(yī)藥大學(xué)方劑教研室提供。氟脲嘧啶，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)腫瘤教研室惠贈(zèng)。醋酸潑尼松，廣東華南藥業(yè)有限公司，批號(hào)：060301。氯化鈉注射液，四川科倫藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào):T060305。青春寶，正大青春寶藥業(yè)有限公司，批號(hào):1009030。中華墨汁；UNICO722光柵分光光度計(jì)，尤尼柯(上海)儀器有限公司;隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱,上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠；高速離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1益氣扶正提取物對小鼠碳粒廓清指數(shù)的影響[4]昆明小鼠，雌雄各半,按體質(zhì)量隨機(jī)分成6個(gè)組，每組12只:即空白組、醋酸潑尼松組(25 mg/kg)、青春寶組(1 g/kg)、益氣扶正復(fù)方提取物低劑量組(1.25 g/kg)、中劑量組(2.5 g/kg)、高劑量組(5 g/kg),灌胃給藥體積為0.2 mL/10 g。每天灌胃給藥1次，除空白組灌胃給予蒸餾水外，其余各組灌胃給予相應(yīng)藥物，連續(xù)給藥7 d，第8天末次給藥30 min后，尾靜脈注射50%的墨汁生理鹽水0.1 mL/10 g，注射后立即記時(shí)，于注射后2 min和12 min，于眼眶靜脈叢取血2～3滴，吸20 μL溶于3 mL 0.1%碳酸鈉溶液中搖勻，680 nm處測其吸光度A；取血后將小鼠處死，稱體質(zhì)量，取脾、胸腺,電子天平稱重;計(jì)算脾、胸腺系數(shù)[5]和廓清指數(shù)K[6]。

2.2益氣扶正提取物對小鼠溶血素抗體的影響[7]分組同2.1。除空白組灌胃給予蒸餾水外，其余各組灌胃給予相應(yīng)藥物，連續(xù)給藥7 d，灌胃給藥第1天(除空白組外)各組小鼠腹腔注射5%生理鹽水雞紅細(xì)胞懸液0.2 mL，免疫7 d后，末次給藥后1 h，取血，離心，取0.03 mL稀釋至3 mL，取稀釋血清1.5 mL，與5%生理鹽水雞紅細(xì)胞混懸液0.1 mL、10%補(bǔ)體1 mL混合，在37 ℃保溫30 min后，0 ℃終止反應(yīng)。離心取上清液在540 nm處比色。以O(shè)D讀數(shù)作為判斷血清溶血素的指標(biāo)，比較各組差異。

2.3益氣扶正提取物對腫瘤的抑制作用[8]在無菌條件下抽取接種傳代第8天的S180肉瘤小鼠腹水，用無菌生理鹽水按1∶2的比例稀釋。取昆明小鼠，腹腔注射稀釋的瘤細(xì)胞懸液0.2 mL/只，24 h后隨機(jī)分成5個(gè)組:空白組，陽性對照組(5-氟尿嘧啶組)(40 mg/kg)，益氣扶正復(fù)方提取物低劑量組(1.25 g/kg)、中劑量組(2.5 g/kg)、高劑量組(5 g/kg)，每組12只，標(biāo)記并稱體質(zhì)量。除空白組灌胃給予等容量的飲用水外，其余各組分別給予相應(yīng)受試藥物，灌胃給藥體積為0.2 mL/10 g，1次/d，連續(xù)10 d。記錄各組小鼠的生存時(shí)間，計(jì)算每組的平均生存時(shí)間。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，計(jì)算3次結(jié)果平均值。 按公式計(jì)算：生命延長率[9](%)=(1-T/C)×100%

T、C分別表示給藥組小鼠存活日數(shù)和模型對照組小鼠存活日數(shù)。

3實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1益氣扶正提取物對小鼠碳粒廓清指數(shù)的影響由表1可知,與空白對照組比較，醋酸潑尼松給藥組出現(xiàn)胸腺、脾臟萎縮，臟器系數(shù)與空白組比較，P<0.01；與醋酸潑尼松免疫抑制劑組比較，青春寶及益氣扶正復(fù)方提取物低、中、高劑量給藥組能夠改善小鼠胸腺、脾臟萎縮的程度及提高單核-巨噬細(xì)胞吞噬能力,脾臟臟器系數(shù)及吞噬指數(shù)K均顯著高于潑尼松組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而青春寶給藥組脾臟臟器系數(shù)顯著高于潑尼松組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表1　益氣扶正提取物對小鼠單核-巨噬細(xì)胞免疫功能的影響 ± s, n=10)

注：與空白組比較，##P<0.01；與醋酸潑尼松組比較，△P<0.05

3.2益氣扶正提取物對小鼠溶血素抗體的影響由表2可知,與空白組相比，醋酸潑尼松及各給藥組動(dòng)物雞血紅蛋白的OD值均極顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與模型組比較，青春寶及益氣扶正復(fù)方提取物低、中、高劑量組的OD均有升高，其中益氣扶正復(fù)方提取物低劑量組作用效果最為顯著，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

組 別劑量/(g生藥/kg)血清溶血素/OD空白組 —0.01±0.005 醋酸潑尼松組 —1.60±0.211## 青春寶組 1g提取物1.73±0.255## 益氣扶正高劑量組51.80±0.202## 益氣扶正中劑量組2.51.83±0.107## 益氣扶正低劑量組1.251.84±0.114##△

注：與空白組比較,##P<0.01，與醋酸潑尼松組比較，△P<0.05

3.3對腫瘤的抑制作用 由表3可知，與空白組比較，氟尿嘧啶組、益氣扶正高、中、低劑量組均能顯著延長荷瘤小鼠的生存時(shí)間。

表3　益氣扶正提取物對荷瘤小鼠生存時(shí)間的影響 ± s, n=12)

注:與空白組比較,##P<0.01，#P<0.05

4討論

腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移都與機(jī)體的免疫狀態(tài)有著密切的關(guān)系，巨噬細(xì)胞吞噬能力、血清溶血素抗體水平分別反映了機(jī)體非特異性和體液免疫這兩個(gè)方面。巨噬細(xì)胞[10]碳粒廓清指數(shù)K和吞噬指數(shù)A的大小可以反映內(nèi)皮網(wǎng)狀系統(tǒng)吞噬功能的強(qiáng)弱，當(dāng)細(xì)菌、異物等抗原性物質(zhì)進(jìn)入機(jī)體后，可迅速被單核巨噬系統(tǒng)吞噬和清除。血清溶血素是衡量機(jī)體特異性體液免疫功能的重要指標(biāo)[11-12]。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，益氣扶正復(fù)方提取物能顯著增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬功能，具有增強(qiáng)機(jī)體非特異性免疫的作用，能夠增加血清抗體生成，從而增強(qiáng)體液免疫能力的作用，并能延長荷瘤小鼠的生存時(shí)間。因此，可以作為輔助藥物用于調(diào)節(jié)腫瘤病人的體質(zhì)。

黃芪素有“補(bǔ)藥之長”之稱，作為益氣扶正復(fù)方的君藥，體現(xiàn)了補(bǔ)藥在復(fù)方中的主導(dǎo)作用，在復(fù)方中發(fā)揮主要療效。近代藥理研究[13]表明，黃芪具有增強(qiáng)和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能和抗腫瘤的作用。

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