周小娟 劉聯(lián)斌 廖儀文 薛靈 賴春梅

[摘要] 目的 探討低S/CO值梅毒螺旋體抗體（ELISA法）與梅毒螺旋體顆粒（TPPA）的相符性。 方法 收集我院2009年9月～2013年9月間的2717份梅毒血清標(biāo)本，分別用ELISA法和TPPA法對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，比較兩者之間的檢測(cè)結(jié)果，分析兩者之間的關(guān)系。 結(jié)果 2717份血清標(biāo)本經(jīng)ELISA法測(cè)試后分成兩組，一組S/CO值小于3.0，一組S/CO值則大于3.0。其中1536份梅毒螺旋體抗體（ELISA）S/CO值小于3.0，經(jīng)TPPA確診后僅有608份（39.58%）呈陽(yáng)性反應(yīng)；而剩余的1181份ELISA法S/CO值大于3.0的有938份（79.42%）呈陽(yáng)性反應(yīng)。兩者相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。 結(jié)論 ELISA法檢測(cè)梅毒螺旋體抗體S/CO大于3.0時(shí)，TPPA法確證結(jié)果具有良好相符性。

[關(guān)鍵詞] 梅毒螺旋體抗體；低S/CO值；ELISA；TPPA

[中圖分類號(hào)] R759.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2015）33-0117-03

梅毒是由蒼白螺旋體感染所引起的一種性傳播疾病，其傳播途徑有性傳播、輸血傳播、母嬰垂直傳播、密切接觸等。據(jù)世界衛(wèi)生組織估計(jì)，全球每年新增梅毒感染病例近1200萬(wàn)[1]。我國(guó)衛(wèi)生部2011全國(guó)法定報(bào)告的梅毒發(fā)病率和死亡率分別比2010年增長(zhǎng)了9.71%和7.69%[2]。在2010年的《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》中報(bào)道，中國(guó)不到1 h就增加1例先天性梅毒[3]，早期梅毒和隱性梅毒患者可無(wú)任何臨床癥狀[4]，因此梅毒還是以實(shí)驗(yàn)室診斷為主，血清學(xué)方法具有操作簡(jiǎn)便、特異性好、取樣時(shí)患者無(wú)痛苦、結(jié)果相對(duì)穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，所以現(xiàn)狀的梅毒檢測(cè)還是以血清學(xué)作為首選檢測(cè)方法。本研究對(duì)本院2717份梅毒血清進(jìn)行兩種血清學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)（梅毒酶聯(lián)免疫吸附法ELISA；梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)TPPA）進(jìn)行分析比較，現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)過(guò)程及實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較分析報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 標(biāo)本來(lái)源 收集2009年9月～2013年9月間本院門(mén)診和住院患者梅毒酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）陽(yáng)性標(biāo)本2717份，其中男1063例，女1654例，患者年齡20～90歲，平均49歲。標(biāo)本來(lái)源于我院婦科、內(nèi)窺鏡檢查、輸血前檢查、外科常規(guī)手術(shù)等。

1.1.2 試劑與儀器 酶標(biāo)儀：鄭州安圖PHOMO 301. 100.1571；洗板機(jī)：鄭州安圖IWO204.100.1417；梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（treponema pallidum enzyme-linked immunosorbent assay，TP-ELISA）試劑購(gòu)自于珠海麗珠試劑股份有限責(zé)任公司；梅毒螺旋體抗體顆粒凝集試驗(yàn)（treponema pallidum particle agglutination，TPPA）試劑購(gòu)自于富士瑞必歐株式會(huì)社。

1.2 方法

1.2.1 梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（TP-ELISA） 將所收集到的本院門(mén)診和住院患者的血清分別編號(hào)加樣，孵育后加酶洗板顯色。若血清中存在特異性抗體，則會(huì)與酶標(biāo)記的純化基因重組梅毒螺旋體抗原反應(yīng)，陽(yáng)性顯黃色；陰性不顯色。該方法靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好，并可同時(shí)檢測(cè)梅毒患者血清中的梅毒螺旋體特異性抗體IgG和IgM，但無(wú)法區(qū)分兩者。試劑說(shuō)明書(shū)中樣本結(jié)果判斷以≥臨界值（C.O=陰性對(duì)照平均A值+0.2）為陽(yáng)性反應(yīng)，<臨界值則判為陰性反應(yīng)。

1.2.2 梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)（TPPA） 將梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（TP-ELISA）檢測(cè)到S/CO值大于1.0小于6.0的標(biāo)本分別從值的大小依次編號(hào)加樣、稀釋、加致敏粒子孵育觀察并記錄結(jié)果。陰性結(jié)果呈現(xiàn)出外周邊緣均勻且平滑的圓形，陽(yáng)性結(jié)果則呈現(xiàn)不同程度的小環(huán)狀并產(chǎn)生凝集反應(yīng)，此試驗(yàn)有特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便、靈敏度高等特點(diǎn)，但和TP-ELISA一樣無(wú)法區(qū)分IgG和IgM，所以無(wú)法區(qū)分既往感染和現(xiàn)癥感染，也無(wú)法作為療效觀察的指標(biāo)。所有實(shí)驗(yàn)的具體操作均按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察Anti-TP在ELISA方法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果（S/CO值）大于3.0與（S/CO值）小于3.0在Anti-TP確證實(shí)驗(yàn)TPPA中的陽(yáng)性例數(shù)，分析兩者之間的比率關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 標(biāo)本來(lái)源及分布

共收集2717份標(biāo)本，其中化療科412例（15.16%），大外科1622例（59.70%），放療科322例（11.86%），門(mén)診361例（13.28%）。見(jiàn)表1。

2.2 梅毒螺旋體抗體的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 TP-ELISA與TPPA結(jié)果 如表2所示，2717份血清標(biāo)本經(jīng)TP-ELISA法測(cè)試后，S/CO值小于3.0的標(biāo)本為1536份，經(jīng)TPPA確證后只有608份呈陽(yáng)性反應(yīng)，其余標(biāo)本均為陰性反應(yīng)，稀釋倍數(shù)為1∶80，陽(yáng)性比例僅為39.58%；而剩余的1181份S/CO值大于3.0的陽(yáng)性標(biāo)本經(jīng)TPPA確證后有938份呈陽(yáng)性反應(yīng)，陽(yáng)性比例為79.42%。

2.2.2 TP-ELISA與TPPA結(jié)果之間的關(guān)系 從實(shí)驗(yàn)結(jié)果我們可以看到TP-ELISA的檢測(cè)結(jié)果S/CO值>3.0在TPPA中的陽(yáng)性比率明顯高于S/CO值<3.0。TP-ELISA的檢測(cè)結(jié)果S/CO值>3.0與S/CO值<3.0相比，χ2=431.98，P<0.01，ELISA法檢測(cè)梅毒螺旋體抗體S/CO>3.0時(shí)，TPPA法確證結(jié)果具有良好相符性。

3 討論

血清學(xué)檢測(cè)方法分為兩種，梅毒螺旋體非特異性抗體試驗(yàn)和梅毒螺旋體特異性抗體試驗(yàn)[5-8]。前者是以心磷脂、膽固醇和卵磷脂作抗原，方法有性病研究實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)（VDRL）、甲苯胺紅不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)（TRUST）和快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)（RPR）等，目前最常用的是TRUST和RPR，此方法操作簡(jiǎn)便、快速、成本低、比較適合基層應(yīng)用和人群調(diào)查[9-11]，陽(yáng)性反應(yīng)一般認(rèn)為是活動(dòng)性梅毒感染的標(biāo)志，也可用于療效的觀察，但是其特異性差，并且反映不出既往感染，并容易受其他疾病影響，尤其是一些免疫性疾病，易產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果[12-15]。后者是以梅毒螺旋體或其他特異性肽段（如重組抗原）作抗原，方法有TPPA、FTA-ABS、免疫層析梅毒螺旋體抗體快速檢測(cè)、梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附法（TP-ELISA）、CMIA等，此方法具有特異性好、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，適合大規(guī)模的普查，但是梅毒螺旋體特異性抗體試驗(yàn)檢測(cè)到的抗體系終生存在，它無(wú)法作為活動(dòng)性梅毒感染的標(biāo)志，也不能用于療效的觀察。

我國(guó)衛(wèi)生部2011年發(fā)布的《預(yù)防艾滋病、梅毒和乙肝母嬰傳播工作實(shí)施方案》[16]，建議對(duì)初次產(chǎn)前保健的孕產(chǎn)婦作梅毒螺旋體抗體試驗(yàn)的篩查。本研究中TP-ELISA作為初篩平臺(tái)，然后用TPPA作為T(mén)P-ELISA的確證，可以體現(xiàn)兩者之間的關(guān)系和相符性。在2717份標(biāo)本中，其中1536份標(biāo)本作為低濃度（S/CO值<3.0）在TPPA中的反應(yīng)，但只有608份標(biāo)本呈陽(yáng)性反應(yīng)，而這608份標(biāo)本中隨著S/CO值的升高，TPPA陽(yáng)性反應(yīng)的比率也相對(duì)提高，陽(yáng)性的稀釋倍數(shù)也從1∶40上升到1∶80，陽(yáng)性率為39.85%，剩余的928份標(biāo)本全部呈陰性反應(yīng)；另一組S/CO值>3.0的1181份標(biāo)本中，在TPPA中有938份標(biāo)本呈陽(yáng)性反應(yīng)，最低的稀釋倍數(shù)1∶80，最高的稀釋倍數(shù)≥1：1280，陽(yáng)性率達(dá)79.42%。這可以說(shuō)明用TPPA實(shí)驗(yàn)去確證TP-ELISA，隨著S/CO值的不斷提高，TPPA實(shí)驗(yàn)的陽(yáng)性率也在不斷提高，兩者呈正相關(guān)性的關(guān)系。在本研究中，我們也可以明顯看到，TP-ELISA實(shí)驗(yàn)中S/CO值>3.0的標(biāo)本在TPPA實(shí)驗(yàn)的陽(yáng)性率比S/CO值<3.0的標(biāo)本中有著顯著的提高。

值得一提的是，TP-ELISA呈陽(yáng)性反應(yīng)的S/CO值為2.304和1.374的兩份標(biāo)本中，在實(shí)驗(yàn)以前就已知患者是處于治療中的活動(dòng)性梅毒和治愈后梅毒，但是經(jīng)TPPA確證均為1∶40陰性。當(dāng)然，個(gè)別例子并不能反映出TPPA存在的假陰性問(wèn)題。在免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)中，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素非常多，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、紅斑狼瘡等免疫性疾病、患者年齡、病種、甚至患者是否服用藥物等都有不同程度的影響，這些都值得進(jìn)一步關(guān)注。

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（收稿日期：2015-08-28）