陳敬林　黃　湘　譚家余　鐘裕恒　萬志丹

(南方醫(yī)科大學(xué)第三臨床醫(yī)學(xué)院　南方醫(yī)科大學(xué)附屬中山博愛醫(yī)院,中山528403)

①本文受國家自然科學(xué)基金(81101534)、廣東省自然科學(xué)基金(S2012010010824)和廣東省醫(yī)學(xué)科研基金(A2013875)項(xiàng)目資助。

②南方醫(yī)科大學(xué)附屬中山市博愛醫(yī)院產(chǎn)前診斷中心，中山528403。

③南方醫(yī)科大學(xué)附屬中山市博愛醫(yī)院中心ICU，中山528403。

[摘　要]　目的：構(gòu)建HSPC238誘餌載體，篩選與HSPC238相互作用的目標(biāo)蛋白。方法：基因合成法合成HSPC238基因，sfiIA和sfiIB雙酶切后與pGBKT7誘餌載體連接，獲得誘餌質(zhì)粒pGBKT7-HSPC238，經(jīng)測序鑒定后與酵母雙雜交空質(zhì)粒pGBKT7共同轉(zhuǎn)化到酵母菌株AH109，在營養(yǎng)缺陷培養(yǎng)基中觀察pGBKT7-HSPC238的自激活作用，進(jìn)一步從人胎肝cDNA文庫中篩選與HSPC238相互作用的目標(biāo)蛋白。結(jié)果：誘餌載體pGBKT7-HSPC238構(gòu)建成功，經(jīng)表型篩選檢測無自激活作用，經(jīng)酵母雙雜交技術(shù)結(jié)合文獻(xiàn)分析，從人胎肝cDNA文庫中初步篩選發(fā)現(xiàn)核糖體蛋白L5(Ribosomal protein L5，RPL5)可能是HSPC238相互作用的目標(biāo)蛋白之一。 結(jié)論：成功構(gòu)建pGBKT7-HSPC238誘餌質(zhì)粒載體，且經(jīng)酵母雙雜交技術(shù)結(jié)合文獻(xiàn)分析發(fā)現(xiàn)RPL5可能是與HSPC238相互作用的目標(biāo)蛋白之一。

[關(guān)鍵詞]　HSPC238；酵母雙雜交；核糖體蛋白L5；相互作用蛋白

doi:10.3969/j.issn.1000-484X.2015.11.011

·免疫學(xué)技術(shù)與方法·

HSPC238相互作用蛋白R(shí)PL5的初步篩選①

陳敬林黃湘②譚家余③鐘裕恒②萬志丹②

(南方醫(yī)科大學(xué)第三臨床醫(yī)學(xué)院南方醫(yī)科大學(xué)附屬中山博愛醫(yī)院,中山528403)

①本文受國家自然科學(xué)基金(81101534)、廣東省自然科學(xué)基金(S2012010010824)和廣東省醫(yī)學(xué)科研基金(A2013875)項(xiàng)目資助。

②南方醫(yī)科大學(xué)附屬中山市博愛醫(yī)院產(chǎn)前診斷中心，中山528403。

③南方醫(yī)科大學(xué)附屬中山市博愛醫(yī)院中心ICU，中山528403。

[摘要]目的：構(gòu)建HSPC238誘餌載體，篩選與HSPC238相互作用的目標(biāo)蛋白。方法：基因合成法合成HSPC238基因，sfiIA和sfiIB雙酶切后與pGBKT7誘餌載體連接，獲得誘餌質(zhì)粒pGBKT7-HSPC238，經(jīng)測序鑒定后與酵母雙雜交空質(zhì)粒pGBKT7共同轉(zhuǎn)化到酵母菌株AH109，在營養(yǎng)缺陷培養(yǎng)基中觀察pGBKT7-HSPC238的自激活作用，進(jìn)一步從人胎肝cDNA文庫中篩選與HSPC238相互作用的目標(biāo)蛋白。結(jié)果：誘餌載體pGBKT7-HSPC238構(gòu)建成功，經(jīng)表型篩選檢測無自激活作用，經(jīng)酵母雙雜交技術(shù)結(jié)合文獻(xiàn)分析，從人胎肝cDNA文庫中初步篩選發(fā)現(xiàn)核糖體蛋白L5(Ribosomal protein L5，RPL5)可能是HSPC238相互作用的目標(biāo)蛋白之一。 結(jié)論：成功構(gòu)建pGBKT7-HSPC238誘餌質(zhì)粒載體，且經(jīng)酵母雙雜交技術(shù)結(jié)合文獻(xiàn)分析發(fā)現(xiàn)RPL5可能是與HSPC238相互作用的目標(biāo)蛋白之一。

[關(guān)鍵詞]HSPC238；酵母雙雜交；核糖體蛋白L5；相互作用蛋白

doi:10.3969/j.issn.1000-484X.2015.11.011

中圖分類號R392

文獻(xiàn)標(biāo)志碼碼A

文章編號號1000-484X(2015)11-1494-04

作者簡介：陳敬林(1988年-)，男，主要從事腫瘤免疫學(xué)相關(guān)研究，E-mail:842630809@qq.com。

通訊作者及指導(dǎo)教師：黃湘(1971年-)，女，主任技師，碩士生導(dǎo)師，主要從事腫瘤免疫學(xué)相關(guān)研究，E-mail:340382761@ qq.com。

[Abstract]Objective:To construct a bait vector for HSPC238，and to screen the target proteins which interact with the HSPC238.Methods: Gene synthesis method was used to synthetic gene HSPC238，then connected with the pGBKT7 vector after digesting by the sfiIA and sfiIB,to obtain the bait plasmid pGBKT7-HSPC238,then transferred into the yeast strains AH109 with the empty plasmid pGBKT7after sequencing,to observe its self-activating effect in the nutrient deficiencies medium,and further to screen the target proteins which interact with HSPC238 from the human fetal liver cDNA library.Results: The bait vector pGBKT7-HSPC238 was successfully constructed,and it had no self-activating effect through the phenotypic screening,after the yeast two-hybrid technology with literature analysis,we preliminary screened and found that the ribosomal protein L5(RPL5) may be the one of the target proteins which interacted with HSPC238 from the human fetal liver cDNA library.Conclusion: We successfully constructed the bait plasmid vector PGBKT7-HSPC238,and after the yeast two-hybrid technology with literature analysis,we preliminary screened and found that the ribosomal protein L5(RPL5) may be the one of the target proteins which interacted with HSPC238.

Preliminary screening of RPL5 interacting with HSPC238

CHENJing-Lin，HUANGXiang，TANJia-Yu，ZHONGYu-Heng，WANZhi-Dan.TheThirdClinicalCollegeofSouthernMedicalUniversity，BoaiHospitalAffiliatedtoSouthernMedicalUniversity,Zhongshan528403,China

[Key words]HSPC238;Yeast two-hybridsy；RPL5;Interaction proteins

HSPC238 蛋白是由LOC51255 基因( NM_016494)編碼的含153個(gè)氨基酸的，包含RING 指(RING-type zinc finger)結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì),屬一種C3HC4 型鋅指蛋白[1]。其特殊的結(jié)構(gòu)提示該蛋白可能參與泛素蛋白酶體途徑,并與細(xì)胞的生長有關(guān),但目前國內(nèi)外尚未見有關(guān)其功能的任何報(bào)道。運(yùn)用UniGene數(shù)據(jù)庫進(jìn)行電子表達(dá)譜分析提示該基因廣泛表達(dá)于人體各類組織中,在多種腫瘤組織中也均有表達(dá)。本研究旨在構(gòu)建HSPC238酵母雙雜交誘餌載體，并初步篩選與HSPC238相互作用的目標(biāo)蛋白，為進(jìn)一步系統(tǒng)研究HSPC238蛋白在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1材料酵母雙雜交系統(tǒng)的誘餌表達(dá)載體質(zhì)粒pGBKT7、pGADT7酵母工程菌株AH109、人胎肝 cDNA文庫均購自美國Clontech公司；宮頸癌Hela細(xì)胞株為本實(shí)驗(yàn)室保存；T4DNA連接酶購自美國Promega公司；限制性內(nèi)切酶、MulV Reverse Transcriptase均購自加拿大Ferments公司；Trizol試劑購自美國Invitrogen公司；各種營養(yǎng)缺陷培養(yǎng)基及基礎(chǔ)耗材購自南京鐘鼎生物公司；DNA膠純化試劑盒、質(zhì)粒小提取試劑盒購自AXYGEN公司，引物合成、DNA測序由上海生工公司完成。

1.2方法

1.2.1載體構(gòu)建前期用基因合成法合成HSPC238，基因合成時(shí)在其首末端同時(shí)合成sfiIA和sfiIB酶切位點(diǎn)的序列，構(gòu)建PcDNA3.1-HSPC238質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化大腸桿菌Top10感受態(tài)擴(kuò)增目標(biāo)基因并抽提質(zhì)粒。同時(shí)對PcDNA3.1-HSPC238及誘餌載體pGBKT7質(zhì)粒進(jìn)行SfiI酶切，酶切產(chǎn)物瓊脂糖電泳-割膠回收(Axygen膠回收試劑盒)對目的基因進(jìn)行測序驗(yàn)證，以確保獲取足量正確的目的基因片段。將回收的目的基因及誘餌載體進(jìn)行連接(即構(gòu)建pGBKT7-HSPC238載體)，連接體系轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)，隨機(jī)挑取3個(gè)轉(zhuǎn)化子接種于帶卡那抗性的液體LB培養(yǎng)基，于37℃，250 r/min振蕩培養(yǎng)16 h(過夜)后，行質(zhì)粒抽提(Axygen質(zhì)粒小量抽提試劑盒)并電泳，初步鑒定質(zhì)粒pGBKT7和插入的目標(biāo)片段。

1.2.2酵母轉(zhuǎn)化取鑒定正確的pGBKT7-HSPC238載體和pGADT7共轉(zhuǎn)化感受態(tài)酵母AH109菌株，涂布選擇性平板(SD-Trp-Leu)培養(yǎng)3 d，同時(shí)單轉(zhuǎn)pGBKT7-HSPC238載體涂布SD-Trp平板做對照。

1.2.3自激活檢測 隨機(jī)挑取5個(gè)共轉(zhuǎn)化(pGBKT7-HSPC238+pGADT7)酵母轉(zhuǎn)化子進(jìn)行自激活檢測，同時(shí)檢測3個(gè)報(bào)告基因(LacZ，HIS和ADE2)，三個(gè)報(bào)告基因均未出現(xiàn)自激活現(xiàn)象的轉(zhuǎn)化子用于后續(xù)文庫篩選。

1.2.4胎肝cDNA文庫轉(zhuǎn)化及陽性克隆篩選用含有正確pGBKT7-HSPC238載體且未出現(xiàn)自激活作用的AH109酵母菌作為受體菌制備感受態(tài)，將文庫質(zhì)粒(Matchmaker Human Fetal Liver Library;人胎兒肝臟cDNA酵母雙雜交文庫 Cat.No:638805)轉(zhuǎn)入其中，涂SD-3+3AT平板。用絨布對篩庫平板進(jìn)行影印清除，以消除背景生長菌落的影響，繼續(xù)培養(yǎng)1~2周。挑取再次長出的轉(zhuǎn)化子進(jìn)一步檢測LacZ，HIS和ADE2三個(gè)報(bào)告基因，初步判斷在這些菌落內(nèi)的相互作用。

1.2.5陽性克隆質(zhì)粒的抽提及BLAST比對將步驟1.2.4中可能存在相互作用的陽性菌落轉(zhuǎn)接種于SD-Leu液體培養(yǎng)基，振蕩培養(yǎng)過夜后抽提酵母質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化大腸桿菌Top10新鮮感受態(tài)進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)。將含有陽性克隆的Top10轉(zhuǎn)化子轉(zhuǎn)接于含有Amp的LB液體培養(yǎng)基，擴(kuò)增后抽提質(zhì)粒，對質(zhì)粒進(jìn)行DNA測序，根據(jù)測序結(jié)果在www.ncbi.nim.nih.gov網(wǎng)站進(jìn)行BLAST比對分析。

2結(jié)果

2.1pGBKT7-HSPC238誘餌載體的構(gòu)建及鑒定將基因合成的含sfiIA和sfiIB酶切位點(diǎn)的HSPC238 基因與誘餌質(zhì)粒載體pGBKT7 連接，獲得重組誘餌質(zhì)粒pGBKT7-HSPC238。轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)后，隨機(jī)挑取3個(gè)轉(zhuǎn)化子接種于帶卡那抗性的液體LB培養(yǎng)基，抽提質(zhì)粒進(jìn)行電泳檢測。結(jié)果顯示，pGBKT7-HSPC238的3個(gè)隨機(jī)克隆經(jīng)sfiI酶切都能得到目的條帶，鑒定結(jié)果見圖1。選取其中一個(gè)用T7引物進(jìn)行測序進(jìn)一步驗(yàn)證，測序及結(jié)果見圖2。由此比對結(jié)果可以看出：包括sfiI酶切位點(diǎn)在內(nèi)的序列都正常，未發(fā)生突變，用作后續(xù)文庫篩選的實(shí)驗(yàn)。

圖1　pGBKT7-HSPC238誘餌載體的電泳鑒定圖Fig.1　Electrophoresis for identification of pGBKT7-HSPC238 bait vectorNote: 1，5.Marker；2，3，4.pGBKT7-HSPC238 bait vector before enzyme digestion by sfiI；6，7，8.pGBKT7-HSPC238 bait vector after which enzyme digested with SfiI.

圖2　插入片段的測序結(jié)果比對Fig.2　Gene sequencing and gene alignment for insertedfragment

表1　BLAST比對分析部分結(jié)果列表Tab.1　Partial results list of BLAST alignment analysis

圖3　誘餌載體的自激活及毒性檢測圖Fig.3　Self-activity and toxicity detection for bait vectorNote: The first line of each picture were the five randomly picked yeast transformants which containing pGBKT7-HSPC238 and pGADT7,the left in the second row of each picture were positive control(AD-T + BD-p53),the right were negative control(AD-T + BD-Lam).Fig A was the bacteria growth in the SD-TL plates,as the positive control.Fig B was the result of LacZ detection.Fig C and D were bacteria in SD-3 + 5 mmol/L 3AT and SD-4 plates.

2.2誘餌載體自激活檢測鑒定正確的pGBKT7-HSPC238誘餌載體轉(zhuǎn)化到酵母AH109菌株，隨機(jī)挑取5個(gè)轉(zhuǎn)化子進(jìn)行自激活檢測，分別同時(shí)檢測3個(gè)報(bào)告基因(LacZ，HIS3和ADE2)，如圖3。檢測結(jié)果表明，LacZ、HIS3和ADE2這三個(gè)報(bào)告基因均未出現(xiàn)自激活現(xiàn)象，因此該誘餌載體pGBKT7-HSPC238可用于后續(xù)文庫篩選。

2.3cDNA文庫轉(zhuǎn)化及陽性克隆篩選文庫質(zhì)粒轉(zhuǎn)化AH109感受態(tài)酵母菌后，在SD-3+3AT平板上繼續(xù)培養(yǎng)2周，共長出124個(gè)轉(zhuǎn)化菌落，挑選該124個(gè)陽性菌落檢測LacZ，HIS和ADE2三個(gè)報(bào)告基因。結(jié)果表明：60個(gè)酵母菌落內(nèi)無相互作用，45個(gè)酵母菌落內(nèi)有較強(qiáng)相互作用，19個(gè)酵母菌落內(nèi)有較弱的相互作用。

2.4陽性克隆質(zhì)粒的抽提及BLAST比對對64個(gè)有較強(qiáng)和較弱相互作用的陽性菌落進(jìn)行質(zhì)粒抽提做進(jìn)一步DNA測序和BLAST比對分析，結(jié)果列表如下(見表1)。經(jīng)查閱文獻(xiàn)，初步發(fā)現(xiàn)RPL5可能是與HSPC238相互作用的目標(biāo)蛋白之一。

3討論

Entrez PubMed 數(shù)據(jù)庫提示HSPC238 基因編碼的蛋白質(zhì)含有一個(gè)鋅指結(jié)構(gòu)域，鋅指結(jié)構(gòu)是許多真核生物或病毒蛋白質(zhì)所含有的保守的、富含半胱氨酸的、由40到60個(gè)氨基酸殘基組成的區(qū)域[2]。既往研究提示,鋅指結(jié)構(gòu)域是泛素蛋白酶體途徑中E3連接酶的重要活性區(qū)域,而許多含鋅指結(jié)構(gòu)的蛋白都可以在泛素蛋白酶體通路中扮演E3酶的角色[3,4]。另有研究表明含鋅指結(jié)構(gòu)的蛋白可參與轉(zhuǎn)錄調(diào)控,在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及侵襲中發(fā)揮作用[5-8]。由此可見,鋅指結(jié)構(gòu)域可能通過介導(dǎo)蛋白質(zhì)之間的相互作用,參與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、病毒復(fù)制等多種生物學(xué)途徑,因而該結(jié)構(gòu)域成為各種蛋白質(zhì)發(fā)揮其重要功能的關(guān)鍵部位所在[9]。已有文獻(xiàn)報(bào)道HSPC238蛋白具有E3酶活性[10],本課題組前期研究還表明，該蛋白質(zhì)在肝癌中具有明顯的抑癌作用[11]，此外，再未檢索到該蛋白的相關(guān)研究報(bào)道。然而對于該基因如何控制肝癌細(xì)胞的凋亡及其通過何種下游靶蛋白發(fā)生作用，其作用的靶蛋白有哪些？這些問題仍有待解決。酵母雙雜交(yeast two-hybrid system)技術(shù)恰好為回答這些問題提供了切實(shí)可行的實(shí)驗(yàn)途徑。

為此，本研究擬構(gòu)建pGBKT7-HSPC238誘餌載體，利用酵母雙雜交技術(shù)初步篩選與HSPC238相互作用的蛋白質(zhì)分子。本研究中，pGBKT7-HSPC238的3個(gè)隨機(jī)克隆經(jīng)sfiI酶切都能得到目的條帶(見圖1)。同時(shí)對回收的插入片段進(jìn)行測序比對，可以看到包括sfiI酶切位點(diǎn)在內(nèi)的序列都正常(見圖2)，未發(fā)生突變，可用作后續(xù)實(shí)驗(yàn)。此外，由于某些蛋白質(zhì)可直接激活酵母雙雜交系統(tǒng)中的報(bào)告基因，從而出現(xiàn)假陽性結(jié)果，甚至某些蛋白質(zhì)在酵母菌株內(nèi)表達(dá)時(shí)對酵母菌可以產(chǎn)生一定的毒性作用，所以對誘餌蛋白自激活作用及毒力的檢測是非常必要的。本研究在誘餌重組質(zhì)粒pGBKT7-HSPC238轉(zhuǎn)化感受態(tài)酵母菌株AH109的同時(shí)轉(zhuǎn)化pGBKT7空載體作為對照來檢測誘餌表達(dá)載體是否有自激活作用及毒性作用。結(jié)果表明，分別轉(zhuǎn)化重組誘餌載體pGBKT7-HSPC238和空載體pGBKT7后的酵母菌AH109在SD/-Trp平板中生長出的單克隆數(shù)量大致相近，表明pGBKT7-HSPC238對AH109無毒性作用；同時(shí)含pGBKT7-HSPC238的AH109在SD/-Trp、SD/-His、SD/-Leu、SD/-Ura平板上的不同生長狀況排除了自激活報(bào)告基因的作用，符合篩選cDNA文庫的需要。

本研究進(jìn)一步將胎肝cDNA文庫轉(zhuǎn)入上述未出現(xiàn)自激活作用的AH109酵母菌，涂SD-3+3AT平板，繼續(xù)培養(yǎng)1~2周，獲得了124個(gè)陽性轉(zhuǎn)化菌落。挑取該陽性轉(zhuǎn)化菌落進(jìn)一步檢測LacZ、HIS和ADE2三個(gè)報(bào)告基因，初步判斷在這些菌落內(nèi)的相互作用。挑取可能存在相互作用的64個(gè)菌落增菌培養(yǎng)后抽提質(zhì)粒，做DNA測序和BLAST比對分析。查閱文獻(xiàn)，初步發(fā)現(xiàn)核糖體蛋白L5(Ribosomal protein L5,RPL5)可能是與HSPC238相互作用目標(biāo)蛋白之一，這為下一步的研究指明了方向。但由于通過酵母雙雜交技術(shù)篩選獲得的相互作用蛋白可能存在一定的假陽性結(jié)果，下一步本研究團(tuán)隊(duì)還需通過激光共聚焦、Pull-Down、免疫共沉淀等技術(shù)對HSPC238與RPL5的相互作用進(jìn)行系統(tǒng)驗(yàn)證。

核糖體蛋白L5在正常細(xì)胞增殖中具有重要的作用，有研究表明，RPL5的遺失并不會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞周期的停滯，但由于核糖體的減少及蛋白翻譯能力下降會(huì)抑制細(xì)胞分化周期的進(jìn)程[11]，近年來有學(xué)者發(fā)現(xiàn)RPL5的變異與先天性純紅細(xì)胞再生障礙性貧血相關(guān)[12,13]，但RPL5與肝癌的關(guān)系目前尚未見相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，這也是本課題組后續(xù)研究的一個(gè)方向。

總之，本研究成功構(gòu)建了HSPC238誘餌融合蛋白的表達(dá)載體pGBKT7-HSPC238，通過酵母雙雜交技術(shù)及文獻(xiàn)分析初步發(fā)現(xiàn)RPL5可能是與HSPC238相互作用的目標(biāo)蛋白之一，為后續(xù)進(jìn)一步深入研究HSPC238在肝癌中的作用機(jī)制奠定了的基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)：

[1]黃湘,譚家余,邱玉林,等.pDsRed1-C3/LOC51255真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及在HePG_2細(xì)胞的表達(dá)定位[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志,2009,25(5):402-405.

[2]Besold AN,Michel SL.Neural Zinc finger factor/myelin transcription factor proteins: metal binding,fold,and function[J].Biochemistry,2015,54(29):4443-4452.

[3]Hassink G,Kikkert M,Van Voorden S,etal.TEB4 is a C4HC3 RING finger-containing ubiquitin ligase of the endoplasmic reticulum[J].Biochem J,2005,388(Pt 2):647-655.

[4]Nakashima H,Nguyen T,Goins WF,etal.Interferon-stimulated gene 15 (ISG15) and ISG15-linked proteins can associate with members of the selective autophagic process,histone deacetylase 6 (HDAC6) and SQSTM1/p62[J].J Biol Chem,2015,290(3):1485-1495.

[5]Xie XM,Deng JY,Hou YC,etal.Evaluating the clinical feasibility: The direct bisulfite genomic sequencing for examination of methylated status of E3 ubiquitin ligase RNF180 DNA promoter to predict the survival of gastric cancer[J].Cancer Biomark,2015,15(3):259-265.

[6]Li Y,Yan X,Yan L,etal.High expression of Zinc-finger protein X-linked is associated with reduced E-cadherin expression and unfavorable prognosis in nasopharyngeal carcinoma[J].Int J Clin Exp Pathol,2015,8(4):3919-3927.

[7]Yuan L,Han J,Meng Q,etal.Muscle-specific E3 ubiquitin ligases are involved in muscle atrophy of cancer cachexia: an in vitro and in vivo study[J].Oncol Rep,2015,33(5):2261-2268.

[8]趙志虎,馬清鈞.鋅指結(jié)構(gòu):最普遍的核酸識(shí)別元件[J].生物技術(shù)通訊,2001,12(1):36-41.

[9]Brophy TM,Raab M,Daxecker H,etal.RN181,a novel ubiquitin E3 ligase that interacts with the KVGFFKR motif of platelet integrin alpha(IIb)beta3[J].Biochem Biophys Res Commun,2008,369(4):1088-1093.

[10]Wang S,Huang X,Li Y,etal.RN181 suppresses hepatocellular carcinoma growth by inhibition of the ERK/MAPK pathway[J].Hepatology,2011,53(6):1932-1942.

[11]Teng T,Mercer CA,Hexley P,etal.Loss of tumor suppressor RPL5/RPL11 does not induce cell cycle arrest but impedes proliferation due to reduced ribosome content and translation capacity[J].Mol Cell Biol,2013,33(23):4660-4671.

[12]Quarello P,Garelli E,Carando A,etal.Diamond-Blackfan anemia: genotype-phenotype correlations in Italian patients with RPL5 and RPL11 mutations[J].Haematologica,2010,95(2):206-213.

[13]Delaporta P,Sofocleous C,Stiakaki E,etal.Clinical phenotype and genetic analysis of RPS19,RPL5,and RPL11 genes in Greek patients with Diamond Blackfan Anemia[J].Pediatr Blood Cancer,2014,61(12):2249-2255.

[收稿2015-05-20修回2015-07-20]

(編輯張曉舟)