人體正常組織和惡性腫瘤組織XB130蛋白表達(dá)

廖夢(mèng)穎陳斌1劉堅(jiān)1張為民1丁彥青

(南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院病理學(xué)系，廣東廣州510515)

摘要〔〕目的分析XB130蛋白在人體腫瘤組織中的分布特點(diǎn)及相關(guān)性。方法應(yīng)用免疫組化法和組織芯片技術(shù)檢測(cè)XB130蛋白在人體比較常見的惡性腫瘤組織中的分布。結(jié)果XB130蛋白在15 種正常人組織中，即胃黏膜、腎皮質(zhì)組織、甲狀腺組織中高表達(dá)，在肺泡上皮、子宮內(nèi)膜中未見XB130蛋白陽性表達(dá)，其余組織均為中-低表達(dá)。常見18種腫瘤組織及生殖系統(tǒng)腫瘤中，除子宮頸鱗狀細(xì)胞癌XB130為陰性，其余腫瘤胰腺導(dǎo)管腺癌、前列腺腺癌、乳腺浸潤性導(dǎo)管癌、乳腺浸潤性小葉癌、乳腺導(dǎo)管原位癌、卵巢間變型無性細(xì)胞瘤等腫瘤細(xì)胞XB130 蛋白高表達(dá)；甲狀腺乳頭狀癌、胃腺癌、結(jié)腸腺癌、直腸腺癌、肝細(xì)胞性肝癌、腎透明細(xì)胞型腎癌、肺鱗狀上皮癌、肺腺癌、食管鱗狀細(xì)胞癌、卵巢漿液性乳頭狀腺癌、卵巢囊腺癌等低表達(dá)。結(jié)論XB130蛋白在多種腫瘤組織中高表達(dá)，首次報(bào)道在前列腺癌中高表達(dá)，表明XB130可能在促進(jìn)前列腺癌發(fā)生發(fā)展起到一定作用。

關(guān)鍵詞〔〕XB130；免疫組化；組織芯片

中圖分類號(hào)〔〕R39〔

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金(81101822)

通訊作者：丁彥青(1950-)，男，碩士，博士生導(dǎo)師，教授，主要從事腫瘤病理研究。

1廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院

第一作者：廖夢(mèng)穎(1987-)，女，碩士，醫(yī)師，主要從事腫瘤病理研究。

產(chǎn)生腫瘤的大多原因是其多種基因表達(dá)失常，XB130是一種新型接頭蛋白，位于染色體10q25.3，編碼一種818個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)，因?yàn)榉肿恿看笮∈?30 kD〔1〕。目前在甲狀腺、胃癌、人肺上皮細(xì)胞、胰腺導(dǎo)管癌等組織和細(xì)胞中對(duì)XB130基因進(jìn)行了初步分析〔2，3〕，本文旨在觀察人體正常組織和常見惡性腫瘤組織中XB130的分布和表達(dá)及相關(guān)性。

1材料與方法

1.1標(biāo)本廣州軍區(qū)廣州總區(qū)院2002 年1月至2013 年1月手術(shù)切除的常見腫瘤組織蠟塊標(biāo)本，男57例，女28例；正常組織蠟塊標(biāo)本，男32例，女15 例；年齡60～83歲(平均71.5)歲。所有組織均用10%中性甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋。

1.2組織芯片的構(gòu)建參照蔣會(huì)勇等〔4〕方法并作部分改進(jìn)，利用常用的國產(chǎn)石蠟，按常規(guī)方法制作空白蠟塊作為受體蠟塊，多器官常見癌/正常11種，每種3～5例，包括甲狀腺乳頭狀癌、食管鱗癌、胃腺癌、結(jié)腸腺癌、直腸腺癌、肝細(xì)胞肝癌、胰腺導(dǎo)管癌、肺鱗癌、肺腺癌、乳腺導(dǎo)管癌、腎透明細(xì)胞癌。正常人組織包括甲狀腺、食管、胃、結(jié)腸、直腸、肝、胰腺、肺。生殖系統(tǒng)癌/正常5種，每種3～10例，包括前列腺癌10例，乳腺癌7例，卵巢癌7例，子宮頸鱗狀細(xì)胞癌3例，子宮內(nèi)膜癌4例。首先對(duì)于每一個(gè)石蠟塊要進(jìn)行切片，采用受體針組織陣列儀的方法在蠟塊上制備扎針受體，在每個(gè)蠟塊切2張切片，厚4 μm，將供體組織芯放入受體蠟塊的受體孔中。依次添入組織芯，5℃烤3 h，置于4℃冰箱保存?zhèn)溆?，最后設(shè)計(jì)并制作成功14行×9列和10行×6列組織芯片兩個(gè)。每張切片偶有1～2 個(gè)位點(diǎn)未切全或掉片(圖1)。

圖1　全器官及生殖系統(tǒng)組織芯片大體圖

1.3免疫組化方法采用EnVisionTM二步法，65℃烤片2～4 h，組織芯片脫蠟至水；在功率850 W的微波爐中加熱20 min后用蒸餾水沖洗2 min；再浸泡于枸櫞酸鹽緩沖液(pH6.0)中，再加熱3 min，有效消除過氧化物酶的活性；蒸餾水沖洗2 min；PBS 沖洗，2 min×3 次；加入1∶100抗體稀釋液稀釋濃縮型兔抗人XB130多克隆抗體PAB16763(Abnova 生物公司)；37℃孵育2 h；PBS沖洗，2 min×3 次；滴加鼠抗兔(辣根過氧化物酶標(biāo)記，EnVisionTM試劑盒，DaKo產(chǎn)品)，30 min后37℃孵育，PBS沖洗，2 min×3 次；DAB顯色3 min自來水沖洗，采用蘇木精復(fù)染，梯度乙醇脫水，XB130蛋白在血管內(nèi)皮的表達(dá)為自身切片的陽性對(duì)照，每批實(shí)驗(yàn)設(shè)陽性和陰性對(duì)照。PBS 液取代一抗作陰性對(duì)照。

1.4結(jié)果判定參照Shiozaki等〔5〕的方法，XB130 蛋白表達(dá)結(jié)果評(píng)分方法為，對(duì)著色細(xì)胞陽性率結(jié)合染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分，染色強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：0分無色，1分淡黃色，2分棕黃色，3分棕褐色。陽性細(xì)胞按百分比評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)胞未見染色為0分，<10%細(xì)胞陽性染色為1分，10%～50% 2分，50%～80% 3分，>80% 4分。將每張切片著色程度得分與百分率得分相乘為最后得分，0～1 分為“﹣”；2～4 分為“+”；5～7 分為“”；8～12 分為“”；“”為蛋白高表達(dá)，“-～+”低表達(dá)，為中度表達(dá)。

2結(jié)果

2.1XB130蛋白在正常組織中的表達(dá)組織芯片10種正常組織中，肺泡上皮、子宮內(nèi)膜未見XB130 蛋白陽性表達(dá)，其余7種正常組織均可見不同程度陽性表達(dá)。在食管黏膜、肝臟組織、宮頸組織、結(jié)腸黏膜、胃黏膜、直腸黏膜、胰腺、乳腺組織、卵巢組織、正常前列腺可見部分細(xì)胞XB130蛋白低～中度表達(dá)，胃黏膜、腎皮質(zhì)組織、甲狀腺組織中高表達(dá)(圖2，圖3)；此外，在淋巴結(jié)、皮膚、腦組織也可見部分細(xì)胞XB130 蛋白低表達(dá)。

2.2XB130蛋白在腫瘤組織中的表達(dá)圖4，圖5可見，18種腫瘤組織，除子宮鱗狀細(xì)胞癌中陰性表達(dá)，其余腫瘤組織均可見不同程度的XB130 蛋白表達(dá)。其中胰腺導(dǎo)管腺癌、前列腺腺癌、乳腺浸潤性導(dǎo)管癌、乳腺浸潤性小葉癌、乳腺導(dǎo)管原位癌、卵巢間變型無性細(xì)胞瘤等腫瘤細(xì)胞XB130蛋白高表達(dá)；正常組織和卵巢漿液性乳頭狀腺癌、食管鱗狀細(xì)胞癌、卵巢囊腺癌等腫瘤低至中度表達(dá)。前列腺癌旁組織或者間質(zhì)纖維明顯增生的前列腺組織及增生期子宮內(nèi)膜可見XB130 蛋白低～中度表達(dá)。

圖2　正常組織HE染色(×200)

圖3　各組XB130蛋白表達(dá)(DAB，×200)

圖4　腫瘤組織HE染色(×200)

圖5　各腫瘤組織XB130蛋白表達(dá)(DAB,×200)

3討論

肌動(dòng)蛋白絲相關(guān)蛋白(AFAP)是一種小型的接頭蛋白家族。在克隆人類AFAP(hAFAP)的過程中發(fā)現(xiàn)了一種新型接頭蛋白，命名為AFAP1L-2，也叫XB130。XB130在細(xì)胞質(zhì)彌漫性分布，具有信號(hào)傳導(dǎo)的作用，并且細(xì)胞黏附需要AFAP形成肌動(dòng)蛋白纖維〔6〕。Liu等〔7〕發(fā)現(xiàn)XB130在人甲狀腺和脾臟中高表達(dá)，與本研究結(jié)果一致。甲狀腺癌中XB130為低表達(dá)，但是呈現(xiàn)出促進(jìn)甲狀腺腫瘤的生長。XB130的沉默導(dǎo)致甲狀腺癌細(xì)胞增殖、遷移能力降低，異體移植瘤的生長速度減慢，提示XB130在甲狀腺癌中有促癌作用〔8，9〕。在胃癌中，用5-FU治療的患者中，XB130高表達(dá)的患者比低表達(dá)的有較高的生存率。高表達(dá)XB130可能是胃癌患者預(yù)后高生存率和低復(fù)發(fā)率的一個(gè)診斷標(biāo)志物〔10〕。這樣矛盾的基因差異并不少見，如低表達(dá)的癌基因Bcl-2和Bcl-B為胃癌預(yù)后的不良因素〔11〕，而抑癌基因p53的過量表達(dá)會(huì)降低整體生存率〔12〕。在胰腺導(dǎo)管癌中XB130表達(dá)與胰腺導(dǎo)管癌臨床分期、轉(zhuǎn)移和生存之間的關(guān)系，證明XB130高表達(dá)時(shí)胰腺導(dǎo)管癌分級(jí)越高，更易轉(zhuǎn)移和更短的生存時(shí)間〔13〕，與本研究結(jié)果一致。本研究提示XB130 蛋白可能在前列腺癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮促進(jìn)作用，可能成為判斷前列腺癌的新標(biāo)志。

用小分子RNA干擾人肺上皮細(xì)胞內(nèi)源性XB130降低c-Src活性，產(chǎn)生IL-8并發(fā)生Akt磷酸化〔14〕。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，XB130結(jié)合磷脂酰肌醇-3-激酶的亞基p85a，隨后通過RET/PTC通路介導(dǎo)甲狀腺癌細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)〔15〕，并導(dǎo)致自發(fā)凋亡和增強(qiáng)凋亡刺激物誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡。此外，XB130具有高親和性lamellipodial的F-肌動(dòng)蛋白網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，并參與腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)和侵襲〔16〕。在甲狀腺癌中利用短發(fā)夾RNA干擾XB130表達(dá)后，可引起基因表達(dá)譜發(fā)生顯著改變，其中57個(gè)基因都與細(xì)胞增殖或生存，其中包括許多轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)。路徑分析顯示，涉及XB130的疾病，排名靠前的都是與癌癥相關(guān)，并且最主要的分子和細(xì)胞的功能是細(xì)胞生長、增殖及細(xì)胞周期〔17〕。這些研究結(jié)果提示，XB130的表達(dá)可能會(huì)影響細(xì)胞的增殖、存活、遷移和侵襲。本文首次發(fā)現(xiàn)前列腺癌中也可見XB130 蛋白的高表達(dá)，深入研究XB130在腫瘤發(fā)展過程中的機(jī)制，能使其成為癌癥的新治療靶點(diǎn)。

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〔2013-09-19修回〕

(編輯苑云杰)