CIP2A及c-Myc在老年膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及相關(guān)性

李培棟王新軍單嶠吳躍輝王振

(鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院神經(jīng)外科，河南鄭州450052)

摘要〔〕目的探討癌性抑制因子(CIP)2A和(c-Myc)在老年膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)并分析兩者表達(dá)的相關(guān)性。方法運(yùn)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)CIP2A和c-Myc在52例老年膠質(zhì)瘤和12例正常腦組織中的表達(dá)情況，分析CIP2A和c-Myc與膠質(zhì)瘤組織學(xué)分級(jí)的相關(guān)性以及兩者表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果CIP2A和c-Myc蛋白在老年膠質(zhì)瘤組織中的陽(yáng)性率分別為65.4%(34/52)和59.6%(31/52)，而兩者在正常腦組織中的陽(yáng)性率差異顯著〔16.7%(2/12)和25.0%(3/12)，χ2=9.403,P=0.002；χ2=4.691,P=0.030〕。CIP2A和c-Myc蛋白表達(dá)與腫瘤組織病理分化顯著相關(guān)(χ2=4.544，P=0.033；χ2=5.369，P=0.020)。Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示老年膠質(zhì)瘤組織中CIP2A與c-Myc蛋白表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.613，P=0.005)。結(jié)論老年膠質(zhì)瘤組織中CIP2A高表達(dá)與腫瘤組織病理分化密切相關(guān)，并與c-Myc蛋白表達(dá)呈顯著正相關(guān)，提示CIP2A可能通過(guò)穩(wěn)定癌蛋白c-Myc促進(jìn)老年膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展。

關(guān)鍵詞〔〕CIP2A；c-Myc；膠質(zhì)瘤

中圖分類號(hào)〔〕R73〔

基金項(xiàng)目：河南省科學(xué)研究(No.092102310090)

通訊作者：王新軍(1965-),男，博士，教授，主任醫(yī)師，主要從事腦膠質(zhì)瘤個(gè)體化治療研究。

第一作者：李培棟(1971-)，男，副主任醫(yī)師，主要從事腦血管病、腦腫瘤研究。

蛋白磷酸酶2A(PP2A)的癌性抑制因子(CIP2A)通過(guò)抑制PP2A對(duì)c-Myc S62的脫磷酸化作用，從而遏制PP2A介導(dǎo)的c-Myc降解，穩(wěn)定腫瘤細(xì)胞中c-Myc蛋白水平〔1〕。之前報(bào)道稱CIP2A在胃癌組織中表達(dá)升高，干擾其表達(dá)導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞集落生成受損、細(xì)胞衰老和腫瘤分化〔2〕。另外在人頭頸部腫瘤、結(jié)腸癌、乳腺癌和口腔鱗狀細(xì)胞癌中均發(fā)現(xiàn)CIP2A高表達(dá)〔3，4〕，但CIP2A在老年膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)及其與c-Myc的相關(guān)性少有報(bào)道。本課題分析CIP2A和c-Myc與老年膠質(zhì)瘤臨床病理特征的相關(guān)性及兩者表達(dá)的相關(guān)性，初步探討CIP2A在老年膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中的作用。

1資料與方法

1.1一般資料52例膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本來(lái)源于2008～2012年本院病理科保存的石蠟標(biāo)本，男31例，女21例，年齡61～78歲。按2000年WHO神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ+Ⅱ級(jí)27例，Ⅲ+Ⅳ級(jí)25例，所有組織標(biāo)本經(jīng)術(shù)后病理學(xué)證實(shí)。正常腦組織來(lái)源于12例腦外傷或腦出血患者在手術(shù)非功能區(qū)入路過(guò)程中必須切除的腦組織標(biāo)本，獲得患者知情同意，男8例，女4例，年齡60～76歲。兩組患者性別比及年齡無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，具有可比性。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1CIP2A和c-Myc蛋白的免疫組化染色采用標(biāo)準(zhǔn)生物素-鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶(SP)法對(duì)4 μm石蠟切片進(jìn)行染色。切片在60℃烤箱中烘烤60 min，然后經(jīng)二甲苯脫蠟和再水化，0.01 mol/L檸檬酸鹽緩沖液(pH 6.0)抗原熱修復(fù)，室溫冷卻20 min，0.3% Trixon-X100處理30 min，3%雙氧水-甲醇封閉內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性，正常血清封閉非特異性結(jié)合，切片經(jīng)CIP2A(1∶250，Novus Biologicals)和c-Myc(1∶400，Cell Signaling Technology)抗體4℃孵育過(guò)夜。沖洗后滴加生物素標(biāo)記的二抗(SP試劑盒，北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)，室溫孵育30 min。滴加辣根酶標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液，室溫孵育30 min。滴加二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，蘇木蘇輕度復(fù)染。酒精梯度脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.2.2免疫組化染色評(píng)估所有切片由兩位研究人員進(jìn)行評(píng)估，染色強(qiáng)度評(píng)分：0分；陰性；1分；弱陽(yáng)性；2分；中度；3分；強(qiáng)陽(yáng)性。陽(yáng)性細(xì)胞百分比評(píng)分：無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞，0分，≤25%，1分，26%～50%，2分；51～75%，3分；>75%，4分。染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞百分比評(píng)分相乘≥1分則認(rèn)為CIP2A或c-Myc蛋白陽(yáng)性表達(dá)〔5〕。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行分析，分類資料運(yùn)用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析。

2結(jié)果

2.1老年膠質(zhì)瘤及正常腦組織中CIP2A和c-Myc的表達(dá)CIP2A和c-Myc蛋白陽(yáng)性反應(yīng)為棕黃色或棕褐色，CIP2A蛋白主要定位在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜，而c-Myc蛋白主要定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核。CIP2A和c-Myc蛋白在老年膠質(zhì)瘤組織中的陽(yáng)性率分別為65.4%(34/52)和59.6%(31/52)，而兩者在正常腦組織中的陽(yáng)性率分別為16.7%(2/12)和25.0%(3/12)，差異顯著(χ2=9.403,P=0.002；χ2=4.691,P=0.030)。見圖1。

圖1　CIP2A和c-Myc蛋白在各組織中的表達(dá)與 正常腦組織中的免疫組化染色(SP，×400)

2.2CIP2A和c-Myc蛋白表達(dá)與老年膠質(zhì)瘤組織學(xué)分級(jí)的相關(guān)性CIP2A和c-Myc蛋白在高組織學(xué)分級(jí)(Ⅲ+Ⅳ)的膠質(zhì)瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為80.0%(20/25)和76.0%(18/25)，而在低組織學(xué)分級(jí)(Ⅰ+Ⅱ)的膠質(zhì)瘤組織中陽(yáng)性表達(dá)率為51.9%(14/27)和44.4%(13/27)，二者差異顯著(χ2=4.544，P=0.033；χ2=5.369，P=0.020)。

2.3老年膠質(zhì)瘤組織中CIP2A與c-Myc蛋白表達(dá)相關(guān)性應(yīng)用Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示老年膠質(zhì)瘤組織中CIP2A與c-Myc蛋白表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.613，P=0.005)。

3討論

惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤如多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(GBM)是最常見和高侵襲性的腦原發(fā)惡性腫瘤，盡管在過(guò)去的20年里手術(shù)、放療和化療取得了一定的進(jìn)展，但GBM患者的預(yù)后仍沒有明顯的改善〔6〕。CIP2A由于具有轉(zhuǎn)化人永生化細(xì)胞的能力而被證實(shí)為一種癌蛋白，最近CIP2A過(guò)表達(dá)在多種人類腫瘤中被報(bào)道，更重要的是許多研究發(fā)現(xiàn)CIP2A可以充當(dāng)不同實(shí)體腫瘤和血液系統(tǒng)腫瘤的預(yù)后分子標(biāo)志物，如非小細(xì)胞肺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、卵巢癌、腎癌、舌癌、食管腺癌、膀胱癌和慢性髓樣白血病〔7〕。既往有學(xué)者也證實(shí)了CIP2A在大多數(shù)星形細(xì)胞瘤中表達(dá)水平異常升高〔8〕，與本研究結(jié)果一致。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)CIP2A蛋白表達(dá)與老年膠質(zhì)瘤分化程度呈顯著相關(guān)，Yi等〔8〕也發(fā)現(xiàn)CIP2A過(guò)表達(dá)與星形細(xì)胞瘤高腫瘤分級(jí)顯著正相關(guān)，提示CIP2A在可能作為膠質(zhì)瘤潛在的預(yù)后指示標(biāo)志物。

c-Myc作為一個(gè)經(jīng)典的促癌蛋白參與許多生物學(xué)功能如細(xì)胞增殖、分化、衰老、凋亡和轉(zhuǎn)化，而在老年膠質(zhì)瘤組織中已經(jīng)證實(shí)存在c-Myc蛋白過(guò)表達(dá)〔9～11〕。CIP2A是一個(gè)細(xì)胞PP2A抑制因子，通過(guò)抑制PP2A介導(dǎo)的c-Myc絲氨酸62號(hào)位脫磷酸化作用從而限制c-Myc蛋白水解。本文既往研究證實(shí)在膠質(zhì)瘤細(xì)胞系A(chǔ)172和U87中干擾CIP2A表達(dá)可以導(dǎo)致c-Myc蛋白表達(dá)水平降低和半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3分裂體表達(dá)升高，另外干擾CIP2A導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞增殖減少和凋亡增加〔11〕，提示CIP2A可能通過(guò)穩(wěn)定c-Myc蛋白促進(jìn)膠質(zhì)瘤惡性生物學(xué)行為。

綜上所述，CIP2A和c-Myc在老年膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)升高，其高表達(dá)與老年膠質(zhì)瘤分化不良相關(guān)，而且CIP2A可能是一個(gè)潛在的老年膠質(zhì)瘤治療靶點(diǎn)。

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〔2013-09-15修回〕

(編輯袁左鳴)