張文通，魏 鳳，李 峰，苗立中，劉吉山，沈志強(qiáng)*，，

（1.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東 濱州 256600；2.山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600）

一例豬流行性腹瀉病的診斷與治療

張文通2，魏 鳳1，李 峰1，苗立中1，劉吉山1，沈志強(qiáng)*1，2，

（1.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東 濱州 256600；2.山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600）

山東省惠民縣某規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng)發(fā)生一例疑似豬流行性腹瀉病，根據(jù)發(fā)病情況調(diào)查、臨床癥狀、病理剖檢、病原分離、RT-PCR診斷，確診病原為豬流行性腹瀉病毒。根據(jù)確診結(jié)果，按照豬流行性腹瀉病防治措施操作，豬場(chǎng)發(fā)病情況立即得到好轉(zhuǎn)。

豬流行性腹瀉病；診治

豬流行性腹瀉（PED）是由豬流行性腹瀉病毒（PEDV）引起的豬病毒性腹瀉疫病，是嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)的重要疫病之一，給世界各國(guó)的養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失[1-2]。2014年2月，山東惠民縣某養(yǎng)豬場(chǎng)發(fā)生了以哺乳仔豬水樣腹瀉、并伴有嘔吐等特征的疑似豬流行性腹瀉疾病，現(xiàn)將診治過(guò)程報(bào)告如下。

1 發(fā)病情況

2014年2月初發(fā)現(xiàn)有哺乳仔豬（3～21日齡）嘔吐、腹瀉、脫水。同圈仔豬發(fā)病率達(dá)100%，不同圈發(fā)病仔豬死亡率在11.1%～30.0%。用抗生素治療無(wú)效。

2 臨床癥狀

發(fā)病哺乳仔豬普遍精神沉郁，食欲下降，水樣腹瀉、個(gè)別仔豬伴有嘔吐，仔豬普遍偏瘦，但體溫正常。

3 病理變化

剖檢病死仔豬發(fā)現(xiàn)：小腸擴(kuò)張、腸壁變薄，腸內(nèi)充滿黃色液體，腸系膜淋巴結(jié)水腫。

4 病毒分離鑒定

4.1 病料采集

取病死仔豬小腸黏膜、內(nèi)容物及水樣腹瀉糞便作為分離病毒的樣品，將樣品冷凍保存。

4.2 病料處理

將采集的樣品用滅菌PBS研磨，反復(fù)凍融，在4 ℃條件下3 000 r/min離心30 min、吸取上清，將上清液用0.22μm一次性濾器過(guò)濾除菌、分裝保存于-80 ℃?zhèn)溆谩?/p>

5 病毒的RT-PCR鑒定

5.1 引物設(shè)計(jì)

根據(jù)GenBank JN825712.1序列設(shè)計(jì)，擴(kuò)增長(zhǎng)度661 bp，用于鑒定豬流行性腹瀉病毒。引物序列如下：

上游引物：CGGTTCTATTCCCGTT

下游引物：GAAGCACTTTCTCACTATC

圖1 RT-PCR結(jié)果

5.2 病毒的RT-PCR RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物大小約660 bp，與預(yù)期一致（如圖1所示）。回收RTPCR產(chǎn)物，送往上海生物工程有限公司測(cè)序。測(cè)序結(jié)果與GenBank上報(bào)道的豬流行性腹瀉病毒序列同源性在96%～99%之間。

6 治療措施

經(jīng)上述診斷確認(rèn)病原為豬流行性腹瀉病毒。建議該養(yǎng)豬場(chǎng)采取如下措施：

6.1 保溫及消毒措施

建議保持豬舍溫度高于正常溫度1～2 ℃；保持豬舍衛(wèi)生整潔及全面、定期消毒。

6.2 補(bǔ)液，防止脫水措施

可以購(gòu)買(mǎi)正規(guī)廠家的優(yōu)質(zhì)口服補(bǔ)液鹽，讓發(fā)病豬群普遍飲用。

6.3 防止繼發(fā)細(xì)菌感染

提取病料的RNA，并同時(shí)提取PEDV陰性對(duì)照（細(xì)胞培養(yǎng)液）及PEDV陽(yáng)性細(xì)胞毒的RNA。病毒RNA用寶生物工程(大連)有限公司提供的RNA提取試劑盒提取，一步法RTPCR反應(yīng)成分及反應(yīng)程序如下。

RT-PCR反 應(yīng) 體 系 為：10×Buffer 5μL，MgCl2(25 mmol/ L) 10μL，dNTPs(10 mmol/L) 5μL，Rnase Inhibitor(40 U/μL) 1μL，AMV RTase XL(5u/μL) 1μL，AMV-Optimized Taq(5 U/μL) 1μL，上游引物P1（20μmol/L）1μL，下游引物P2（20μmol/L）1μL ，模板5μL，RNase Free ddH2O up to 50μL。

RT-PCR反應(yīng)條件為：50 ℃反轉(zhuǎn)錄1 h；94 ℃ 5 min；進(jìn)入PCR循環(huán)，94 ℃ 45 S，55 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，35個(gè)循環(huán)后，72 ℃延伸10 min。反應(yīng)結(jié)束后，用0.8%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)擴(kuò)增結(jié)果。

可用痢菌凈防止細(xì)菌感染。

6.4 高免血清療法

5.3 病毒的RT-PCR鑒定結(jié)果

瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)顯示，病毒的

對(duì)發(fā)病仔豬采用高免血清被動(dòng)治療方法。采集發(fā)病豬群中痊愈后老母豬血液，制備高免血清：分離血清（注意無(wú)菌操作），在血清中添加一定比例的阿莫西林抗生素。按照仔豬體重，肌肉注射高免血清（建議0.5 mL/kg，1次/d，連用2次）。

6.5 疫苗接種

建議對(duì)全場(chǎng)豬群緊急免疫豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)活疫苗。高免血清治愈的發(fā)病仔豬豬群1周后進(jìn)行疫苗接種。

該養(yǎng)豬場(chǎng)按照上述治療措施進(jìn)行了操作，發(fā)病豬群死亡率及發(fā)病率大幅降低。實(shí)施2周后病情基本緩解，豬場(chǎng)進(jìn)入穩(wěn)定狀態(tài)。

7 小結(jié)

自2011年以來(lái)，豬腹瀉病成為嚴(yán)重危害養(yǎng)豬行業(yè)的重大傳染病，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。專(zhuān)家證實(shí)豬流行性腹瀉病毒是豬腹瀉病的主要病原之一。筆者在收到山東惠民某豬場(chǎng)暴發(fā)疑似豬流行性腹瀉病的疫情后，通過(guò)發(fā)病情況調(diào)查、臨床觀察及病理剖檢，初步判斷疫情為豬流行性腹瀉引起。收集病料進(jìn)行病毒分離及RTPCR鑒定，證實(shí)病原為豬流行性腹瀉病毒。并按照豬流行性腹瀉疫情采取防治措施，經(jīng)過(guò)保溫、消毒、補(bǔ)液、防繼發(fā)感染及緊急免疫接種，疫情得到有效控制。

[1] 殷震，劉景華.動(dòng)物病毒學(xué)[M].2版.北京：科學(xué)出版社，1997：688-690.

[2] 蔡寶祥.動(dòng)物傳染病學(xué)[M].4版.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2001：300-301.

2015-07-06)

山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院院地科技合作引導(dǎo)計(jì)劃項(xiàng)目（214YDHZ32）；山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系生豬創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目（?SDAIT-06-022-15）

張文通，男（1979-），河南滎陽(yáng)人，碩士，助理研究員，主要從事基因工程疫苗研究。