馬慧玲 鄭 霞 陳 靜 王苗利 孫圣福 藺曉月 徐 鴻 徐 聰（山東省動物疫病預(yù)防與控制中心 山東 濟南 250022）

山東省規(guī)?；i場偽狂犬病感染流行率調(diào)查

馬慧玲 鄭 霞 陳 靜*王苗利 孫圣福 藺曉月 徐 鴻 徐 聰（山東省動物疫病預(yù)防與控制中心 山東 濟南 250022）

2013年3月，規(guī)模場在95%的置信度下，預(yù)期流行率為40%，可接受誤差9.5%的情況下對山東省規(guī)模豬場估計流行率采樣；場內(nèi)在95%的置信度下，預(yù)期流行率為10%，試驗敏感性100%的情況下對場內(nèi)個體采用發(fā)現(xiàn)疫病策略采樣，通過對山東省14個地市102個規(guī)模豬場的2835份血清樣品進行野毒抗體檢測，結(jié)果顯示，在95%的置信度下，山東省內(nèi)豬場的血清野毒抗體陽性率為65.59%，豬樣品血清野毒抗體陽性率為44.10%；西北地區(qū)陽性檢出率最高，為57.67%；中部地區(qū)最低，為31.83%，東部地區(qū)和西南地區(qū)分別為48.33% 和37.75%不等；種豬野毒感染陽性率最高，為67.84%，其次是育肥豬和保育豬，分別為47.83% 和35.20%，初生仔豬最低，為21.05%；大型豬場為33.48%，中型豬場為44.89%，小型豬場為55.42%；春冬季節(jié)陽性率較高，分別為53.54%和57.92%；夏秋季節(jié)相對較低，分別為33.25%和35.05%；結(jié)果表明，山東省內(nèi)普遍存在豬偽狂犬病毒感染狀況。

偽狂犬病(Pseudorabies,PR)是由皰疹病毒科、α-皰疹病毒亞科的偽狂犬病毒(Pseudorabiesvirus，PRV)引起的多種家畜和野生動物共患的急性接觸性傳染病，其主要癥狀為發(fā)熱、奇癢(豬除外)、繁殖障礙、腦脊髓炎等[1]。豬是偽狂犬病的主要傳染源和自然貯存宿主[2]，感染仔豬主要表現(xiàn)神經(jīng)癥狀，成年豬主要為流產(chǎn)、死胎等繁殖障礙和呼吸道癥狀[3]。我國自1948年，劉永純年報道過偽狂犬病以來[4]，該病已經(jīng)擴大到黑龍江、吉林、上海、廣東、陜西、河南、甘肅、山東等30多個省、市、自治區(qū)，其中臺灣已成功根除[5]。給畜牧業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失，嚴重阻礙了我國養(yǎng)豬業(yè)的可持續(xù)發(fā)展，是困擾豬場發(fā)展的重要疾病因素之一。該病常見的傳播方式：（1）直接接觸傳播：易感豬與感染豬直接鼻對鼻的接觸將病毒傳播，及破損的皮膚和配種接觸等發(fā)生病毒感染[6]；（2）空氣傳播：空氣傳播為該病主要的方式，病毒從排毒豬的鼻分泌物以及唾液中排出，逐漸形成氣溶膠，然后隨空氣的氣流傳播至同一豬場，甚至隨風(fēng)傳到9km或更遠的豬場的易感豬群；（3）垂直感染：PRV可經(jīng)胎盤、乳汁傳播給子代[7]，但是母體的免疫球蛋白不能傳遞給子代，因此通過垂直傳播導(dǎo)致仔豬死亡率達到100%[8]。（4）間接傳播：經(jīng)病毒污染后的器具、尸體、飼料、飲水以及帶病的鼠類、貓等被易感豬食入后，經(jīng)消化道感染[9]。

山東省是畜牧大省，養(yǎng)豬業(yè)是本省養(yǎng)殖業(yè)的重要組成部分之一。隨著近幾年來的迅速發(fā)展，豬群的疫病也越來越嚴重，嚴重制約著養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，造成了直接的經(jīng)濟損失。豬偽狂犬病是目前危害我省養(yǎng)豬業(yè)的重要疾病之一，有必要對豬偽狂犬病的流行現(xiàn)狀進行調(diào)查，掌握該病的感染和流行情況。

1 調(diào)查材料

1.1 材料 2013年3月，山東省14個地市的102個不同規(guī)模的豬場，采集及送檢的2835份血清樣品，其中包括新生仔豬血清703份，保育豬血清659份，育肥豬血清646份，種豬血清827份。

1.2 主要試劑 PRV(gpI)抗體檢測試劑盒(IDEXX)。

1.3 主要儀器 酶標儀洗板機(BioTek公司，美國)、酶標儀(EXL 800 Universal Microplate Reader，美國)、高速離心機(Thermo，美國)、電子分析天平(美國雙杰公司)、電熱恒溫水浴鍋(嘉興市中新醫(yī)療儀器有限公司)。

2 調(diào)查方法

2.1 采樣設(shè)計 在95%的置信度下，預(yù)期流行率為40%，可接受誤差9.5%的情況下，對山東省規(guī)模豬場采用估計流行率策略進行采樣。在95%的置信度下，預(yù)期流行率為10%，試驗敏感性100%的情況下對場內(nèi)個體采用發(fā)現(xiàn)疫病策略采樣。樣品涵蓋山東省14個地市102個規(guī)模豬場的2835份血清樣品進行野毒抗體檢測，其中包括新生仔豬血清703份，保育豬血清659份，育肥豬血清646份，種豬血清827份。

2.2 PRV(gpI)野毒抗體檢測 按照PRV(gpI)抗體檢測試劑盒(IDEXX)的操作方法進行：（1）首先將豬偽狂犬野毒抗體檢測試劑盒恢復(fù)至室溫，按照1:9的比例用蒸餾水將10倍濃縮洗滌液稀釋倒入洗板機，備用。（2）取干凈的96孔樣品稀釋板，在A1、A2孔加入陰性對照50μl，A3、A4孔加入陽性對照50μl；然后按縱向每孔依次加入50μl的待檢樣品，然后每孔加入50μl的樣品稀釋液，備用。（3）取出PRV抗原包被板，將稀釋好的樣品轉(zhuǎn)移到對應(yīng)位置。（4）室溫孵育1h，或放置4℃冰箱過夜孵育。（5）設(shè)置洗板機，每孔300μl，每板洗滌3次，進行洗滌。最后一次洗滌結(jié)束，將包被板殘留液體扣拍在吸水紙上。（6）每孔加入辣根過氧化物酶標記的PRV抗gpI抗體100μl。（7）室溫下孵育20min。（8）重復(fù)步驟5。（9）每孔加入TMB底物100μl。（10）避光條件下室溫孵育15min。（11）每孔加入終止液50μl，終止反應(yīng)。（12）使用酶標儀讀取A(650)下的，樣品與對照結(jié)果。

3 結(jié)果

3.1 山東省規(guī)?；i場PRV血清野毒抗 送檢的102個規(guī)?；i場中，陽性場數(shù)67個，場陽性率65.69% ；2835份血清中1250份陽性樣品，樣品野毒抗體平均陽性率為44.10 %。

3.2 山東省規(guī)?；i場不同地區(qū)PRV血清野毒抗體 根據(jù)山東省地理位置的差異，對采樣的14個地級市進行以下劃分：東部地區(qū)包括濰坊、東營、青島、威海；中部地區(qū)包括濟南、泰安、淄博、臨沂；西北地區(qū)包括德州、聊城、濱州；西南地區(qū)包括菏澤、濟寧、棗莊。西北地區(qū)陽性檢出率最高，為57.67%；中部地區(qū)最低，為31.83 %，東部地區(qū)和西南地區(qū)分別為48.33% 和37.75%不等，表明山東各地區(qū)規(guī)?；i場豬偽狂犬病野毒感染情況仍較為普遍，結(jié)果見表1。

表1 山東省不同地區(qū)豬偽狂犬病抗體檢測結(jié)果 (個、%、份)

3.3 不同生長階段的豬PRV血清野毒抗體 對不同階段豬群統(tǒng)計，結(jié)果顯示種豬野毒感染陽性率最高，為67.84%，其次是育肥豬和保育豬，分別為47.83% 和35.20%，初生仔豬最低，為21.05%。結(jié)果在卡方檢驗和極大似然估計下P值都是小于0.05的，因此不同階段豬陽性率存在顯著差異，結(jié)果見表2。

表2 不同生長階段豬偽狂犬病抗體檢測結(jié)果 (份、%)

3.4 不同規(guī)模養(yǎng)殖場的豬PRV血清野毒抗體 根據(jù)存欄母豬頭數(shù)對102個豬場進行劃分，山東地區(qū)不同規(guī)模的豬場均存在PRV野毒感染現(xiàn)象，大型豬場為33.48%，中型豬場為44.89%，小型豬場為55.42%。結(jié)果在卡方檢驗和極大似然估計下P值都是小于0.05的，因此不同規(guī)模豬場陽性率存在顯著差異，結(jié)果見表3。

表3 不同規(guī)模豬場豬偽狂犬病抗體檢測結(jié)果 (個、%、份)

3.5 不同季節(jié)的豬PRV血清野毒抗體 根據(jù)季節(jié)的劃分，對山東省部分地區(qū)規(guī)?；i場PRV血清野毒抗體結(jié)果可以看出，春冬季節(jié)陽性率較高，分別為53.54%和57.92%；夏秋季節(jié)相對較低，分別為33.25%和35.05%。結(jié)果在卡方檢驗和極大似然估計下P值都是小于0.05的，表明不同季節(jié)PRV陽性率存在顯著差異。結(jié)果見表4。

表4 不同規(guī)模豬場豬偽狂犬病抗體檢測結(jié)果 (個、%、份)

4 討論

4.1 不同階段的豬陽性率 種豬的陽性率最高為67.84%，這表明母豬的帶毒現(xiàn)象非常普遍，PRV仍然是山東省母豬繁殖障礙疾病的重要原因之一。新生仔豬及保育豬的抗體陽性率較低，分別為21.05%和35.20%，分析其主要原因是由于體內(nèi)存在有較高水平的母源抗體；另一方面是PRV感染仔豬的死亡率高，而所采集的血清樣本來自于被認為健康的豬群，這也是導(dǎo)致初生仔豬抗體陽性率的原因之一。因此初生仔豬與保育豬仍然是防控的重點，當(dāng)母源抗體降低到一定水平后，將成為豬偽狂犬病感染的主要易感豬群。

4.2 不同季節(jié)的豬陽性率 豬偽狂犬病一年四季均有發(fā)生，冬春季節(jié)感染率較高，夏秋季節(jié)相對感染率較低。分析原因主要是：第一，由于PRV存在熱敏感的生物學(xué)特性，因此，在低溫條件下更有利于病毒的生存。第二，冬春季節(jié)氣候較為寒冷，導(dǎo)致豬的應(yīng)激能力增強，因而免疫力下降，對各種疾病的易感性增強。第三，冬春季節(jié)由于氣候寒冷，因此養(yǎng)殖場多封閉進行飼養(yǎng)，導(dǎo)致圈舍內(nèi)空氣流通不良，促進疾病傳播。

4.3 不同規(guī)模的豬場陽性率 大型豬場陽性率最低，其次是中型豬場，小型豬場陽性率最高。分析原因為大型豬場對豬偽狂犬病的防疫比較重視，另外飼養(yǎng)管理比較到位。小型豬場衛(wèi)生環(huán)境較差，防疫比較混亂，人員流動頻繁，導(dǎo)致PRV的擴散與傳播?？梢娏己玫娘曫B(yǎng)環(huán)境及防控措施對于疾病的預(yù)防非常重要。

4.4 不同地區(qū)的豬場陽性率 本次調(diào)查范圍基本覆蓋了山東省，證明了豬偽狂犬病在山東省內(nèi)普遍存在，應(yīng)引起各地區(qū)的高度重視。

[1] 王莉娟, 陸明哲, 陳義平等. 偽狂犬病檢測技術(shù)研究進展[J]. 中國畜牧獸醫(yī). 2005(6): 42-44.

[2] 白文彬主編. 動物傳染病診斷學(xué)[M]. 北京: 中國農(nóng)業(yè)出版社, 2002: 47-57.

[3] NSECA A A, MAGALH ES C G, SALES E B, et al. Genotyping of the Pseudorabies Virus by Multiplex PCR Followed by Restriction Enzyme Analysis[J]. ISRN Microbiology, 2011: 1-4.

[4] 劉瀾, 龍冬, 朱萬光等. 山東省規(guī)?；i場偽狂犬病血清學(xué)調(diào)查[A]. 首屆中國獸藥大會-獸醫(yī)生物制品學(xué)、獸醫(yī)微生物學(xué)學(xué)術(shù)論壇論文集[C], 2008, 226-7.

[5] 孫剛, 韓波. 仔豬偽狂犬病的診斷與防制[J]. 黑龍江畜牧科技. 1999(1): 38-39.

[6] Christensen L S. Evidence of long distance airborne transmission of Aujeszky's Disease(Pseudorabies)virus. Vet Rec, 1990, 127: 471-474.

[7] Gloster J, Donaldson A l.Hough M N.Analysis of a series ofoutbreaks of Aujeszky's Disease in Yorkshire in 198l-82: The possibitity ofairborne disease spread. Vet Rec, 1984(114): 234-239.

[8] B.E斯特勞. 豬病學(xué)(第8版)[M]. 北京: 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社, 2000: 239-251.

[9] 牛建強, 藍天等. 偽狂犬病免疫凈化方案的評價[J]. 養(yǎng)豬, 2007(5): 55-56.

S858.28

A

1007-1733(2015)11-0055-03

2015-09-02）

種畜禽場疫病凈化技術(shù)示范與推廣項目

*通訊作者