康欣梅，王 慧，王 麗，湯大北，張清媛

（哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院內(nèi)科，黑龍江哈爾濱 150081）

大豆苷元對(duì)乳腺癌生長和血管生成的影響

康欣梅，王 慧，王 麗，湯大北，張清媛

（哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院內(nèi)科，黑龍江哈爾濱 150081）

大豆異黃酮（soybean isoflavone）存在于堅(jiān)果、蠶豆、大豆及豆制品中，具有廣泛的營養(yǎng)學(xué)價(jià)值。其化學(xué)結(jié)構(gòu)已經(jīng)非常明確，基本骨架為3-苯基苯并二氫呋喃，包括染料木黃酮（又名染料木素）（genistein）、黃豆素（glycetein）和大豆苷元（daidzein）3種苷元［1］，染料木黃酮和大豆苷元是大豆異黃酮中活性最為顯著的兩類［2］。

大豆異黃酮與哺乳動(dòng)物雌激素有相似的分子結(jié)構(gòu)［3］，能與雌激素受體（estrogen receptor，ER）結(jié)合，發(fā)揮雌激素樣作用［4］，如治療絕經(jīng)后女性更年期綜合征、抗骨質(zhì)疏松、抗氧化、心血管保護(hù)、抗腫瘤等［4-6］。大豆苷元是大豆異黃酮中的一類，目前的研究發(fā)現(xiàn)大豆異黃酮具有誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡［7］、抑制腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲等作用［8］，但對(duì)于大豆苷元與腫瘤血管生成關(guān)系方面的研究鮮見報(bào)道。本研究擬通過建立乳腺癌大鼠模型，檢測大豆苷元與乳腺癌大鼠血管調(diào)節(jié)因子和微血管密度（microvessel density，MVD）的關(guān)系，進(jìn)而探討大豆苷元對(duì)乳腺癌血管生成和腫瘤生長的影響。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

SD大鼠，雌性，6周齡，體質(zhì)量（180±5）g，購自黑龍江省腫瘤防治研究所動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（黑）2006-2008。使用許可證號(hào)：SYXK（黑）2006-030。大豆苷元購自西安飛達(dá)生物技術(shù)有限公司；7，12-二甲基苯蒽（7，12-dimethylbenz［α］ anthraxcene， DMBA）購自美國Sigma公司；單克隆CD34抗體為美國Santa Cruz公司產(chǎn)品；TUNEL試劑盒購自上海羅氏公司；抗-BrdU抗體（美國Sigma公司）購自上海貿(mào)易有限公司；大鼠血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、堿性成纖維細(xì)胞生長因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）和內(nèi)皮抑素（endostatin）ELISA試劑盒均為美國R&D公司產(chǎn)品。

1.2 乳腺癌大鼠模型的建立及分組

取60只大鼠，每只給予含20 mg DMBA的玉米油1mL灌胃（根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定造模的DMBA劑量）。約6～8周后可觸及腫瘤，當(dāng)腫瘤生長至300～450 mm3時(shí)，將大鼠隨機(jī)分為5組，每組12只，每日分別給予0（對(duì)照組）、10、25、50和75 mg/kg大豆苷元灌胃，繼續(xù)喂養(yǎng)8周后終止實(shí)驗(yàn)。斷髓法處死大鼠，立刻心臟穿刺取血離心后儲(chǔ)存于-80 ℃冰箱，并將腫瘤切除后稱取質(zhì)量，隨后置于10%福爾馬林液固定，石蠟包埋，切片。

1.3 微血管密度MVD的檢測

取大鼠乳腺腫瘤石蠟標(biāo)本切片，切片厚約5 μm，二甲苯中脫蠟，高溫高壓組織抗原修復(fù)，按說明滴加CD34抗體，采用免疫組化SP法檢測腫瘤的MVD。CD34定位于血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿，呈棕黃色。用CD34免疫染色標(biāo)本切片，標(biāo)記其中的微血管，以血管內(nèi)皮細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)。MVD計(jì)數(shù)：參照Weidner等［9］報(bào)道的方法，即先在低倍鏡（40倍）下全面觀察CD34染色陽性的血管，選取腫瘤微血管著色細(xì)胞密集的區(qū)域，然后在高倍鏡（200倍）下鑒別著色的血管，并計(jì)數(shù)。隨機(jī)選取5個(gè)不重復(fù)的200倍視野進(jìn)行計(jì)數(shù)，求其平均值即為該切片的MVD值。以上免疫組化染色結(jié)果均由具備多年病理診斷經(jīng)驗(yàn)的技術(shù)人員3人參與判定。

1.4 腫瘤細(xì)胞凋亡測定

熒光素標(biāo)記的dUBP在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶的作用下，可與凋亡細(xì)胞中斷裂的DNA的3'-OH末端連接，按照TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒的說明來檢測凋亡過程中細(xì)胞核DNA的斷裂情況。隨機(jī)選取5個(gè)不重復(fù)的視野進(jìn)行計(jì)數(shù)及統(tǒng)計(jì)分析。細(xì)胞凋亡指數(shù)用陽性細(xì)胞數(shù)占細(xì)胞總數(shù)的百分率計(jì)算。

1.5 腫瘤細(xì)胞增殖檢測

用5-溴脫氧尿嘧啶核苷（5-bromo-2-deoxyuridine，BrdU）免疫組織化學(xué)檢測細(xì)胞增殖。每只鼠處死前2h腹膜內(nèi)給予50 mg/kg BrdU，BrdU標(biāo)記的細(xì)胞核被抗-BrdU抗體所識(shí)別。隨機(jī)選取5個(gè)不重復(fù)的視野進(jìn)行計(jì)數(shù)及統(tǒng)計(jì)分析。細(xì)胞增殖指數(shù)用被標(biāo)記的細(xì)胞數(shù)占細(xì)胞總數(shù)的百分比計(jì)算。

1.6 血管生成相關(guān)因子的測定

取乳腺癌大鼠心臟部位離心血標(biāo)本。VEGF、bFGF和內(nèi)皮抑素水平測定用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測，嚴(yán)格按照ELISA檢測試劑盒說明書進(jìn)行操作。具體步驟：根據(jù)說明書分別配制VEGF、bFGF和內(nèi)皮抑素的標(biāo)準(zhǔn)品濃度，向板孔中依次加入0.1 mL標(biāo)準(zhǔn)品，1孔只加樣品稀釋液作調(diào)零孔。酶標(biāo)板加蓋37 ℃反應(yīng)90 min。甩去板內(nèi)液體，用吸紙盡量吸干。再依次向各標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入0.1 mL酶標(biāo)抗體工作液，37 ℃反應(yīng)60 min。后用0.01 mol/L PBS洗滌3次，每次約1 min。然后向各標(biāo)準(zhǔn)品孔中依次加入0.1 mL親和素-過氧化物酶復(fù)合物工作液，37 ℃反應(yīng)30 min。再用0.01 mol/L PBS洗滌3次，每次約1 min。之后向每孔加入90 μL在37 ℃平衡30 min的顯色液，37 ℃避光18 min。隨即每孔加入50 μL終止液，液體由藍(lán)轉(zhuǎn)黃。于酶標(biāo)儀上測定各孔D（450） 值并記錄相應(yīng)濃度。所有試驗(yàn)樣本均重復(fù)1次。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)均使用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用方差分析，其中兩兩比較用S-N-K法。以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2 結(jié) 果

2.1 大豆苷元對(duì)瘤體質(zhì)量和MVD的影響

與對(duì)照組比較，50和75 mg/kg大豆苷元組大鼠瘤體質(zhì)量較對(duì)照組顯著減輕（P＜0.05）。大豆苷元對(duì)MVD的影響見圖1。75 mg/kg大豆苷元組的MVD較對(duì)照組明顯下降（P＜0.05），其余組的MVD較對(duì)照組差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 各組大鼠瘤體質(zhì)量和MVD的比較±s）

與對(duì)照組比較，*P＜0.05.

組

2.2 大豆苷元對(duì)大鼠腫瘤細(xì)胞凋亡和增殖的影響

與對(duì)照組比較，75 mg/kg大豆苷元組的凋亡指數(shù)升高（增加了22.5%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；此濃度組增殖指數(shù)雖然降低（減小了8.4%），但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。75 mg/kg組的凋亡/增殖比是對(duì)照組的1.5倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05）。見表2。

表2 大豆苷元對(duì)細(xì)胞凋亡、增殖和凋亡/增殖比的影響（±s）

與對(duì)照組比較，*P＜0.05.

組別凋亡指數(shù)（%）增殖指數(shù)（%）凋亡/增殖比對(duì)照組10. 2± 0. 8 7 4. 7 ± 6 . 20. 14± 0. 03大豆苷元10 m g / k g 9 . 8 ± 0. 7 7 9 . 3± 5. 40. 13± 0. 0325 m g / k g 10. 5± 1. 07 2. 5± 5. 9 0. 16 ± 0. 0250 m g / k g 9 . 5± 0. 9 7 8 . 5± 8 . 30. 12± 0. 017 5 m g / k g 12. 5± 1. 5* 6 8 . 4± 6 . 10. 21± 0. 02*

2.3 大豆苷元對(duì)大鼠血液中VEGF、bFGF和內(nèi)皮抑素表達(dá)水平的影響

與對(duì)照組比較，25、50和75 mg/kg大豆苷元組大鼠血液中的VEGF水平依次降低，且呈劑量依賴性（P＜0.05），而50和75 mg/kg組的內(nèi)皮抑素水平增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）；各組bFGF水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）。見表3。

3 討 論

腫瘤的生長依賴于血管的生成最早由Folkman［10］提出，他認(rèn)為當(dāng)腫瘤直徑超過2 mm時(shí)就需要新生血管形成。腫瘤血管的生成是指腫瘤細(xì)胞通過分泌細(xì)胞因子誘發(fā)毛細(xì)血管新生，并最終形成微循環(huán)網(wǎng)，是由血管生成刺激因子和抑制因子共同調(diào)控的復(fù)雜過程。誘導(dǎo)血管的生成是惡性腫瘤無限生長、浸潤與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的前提之一，在腫瘤的生長過程中，新生的毛細(xì)血管既為腫瘤的生長提供了營養(yǎng)物質(zhì)，又為腫瘤的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移準(zhǔn)備了條件［11］。因此，如何抑制腫瘤血管生成，是當(dāng)前腫瘤治療的熱點(diǎn)之一。本研究即是通過抑制大鼠乳腺癌的血管生成，從而抑制乳腺癌的發(fā)生發(fā)展。

乳腺癌作為一種血管依賴性腫瘤，其生長、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)受多種細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)，目前已知的血管生成刺激因子有VEGF、bFGF、轉(zhuǎn)化生長因子1（transforming growth factor，TGF-1）、血小板衍生內(nèi)皮細(xì)胞生長因子等［12］，研究發(fā)現(xiàn)VEGF是已知最強(qiáng)的促血管生成因 子［13］，也是目前發(fā)現(xiàn)的刺激腫瘤血管形成的最關(guān)鍵因子，在腫瘤血管生成過程中發(fā)揮核心作用［14］；血管生成抑制因子有：內(nèi)皮抑素、血管抑制素（angiostain）、血小板因子-4（platelet factor-4，PF-4）、干擾素-α（interferon-α，IFN-α）等［12］，其中最重要的是內(nèi)皮抑素。本試驗(yàn)中涉及到的細(xì)胞因子有VEGF、 bFGF和內(nèi)皮抑素，通過血管生成刺激因子和血管生成抑制因子來共同調(diào)節(jié)大鼠乳腺癌的血管生成。

乳腺腫瘤血管的形成首先打破了局部正性和負(fù)性調(diào)節(jié)因子之間的平衡，誘導(dǎo)宿主血管的增殖反應(yīng)，而增殖形成的這些微血管不同于正常血管，其結(jié)構(gòu)和功能均表現(xiàn)異常，乳腺腫瘤內(nèi)的血液灌注量分布不均，血液不能正常流動(dòng)，腫瘤血管壁發(fā)育不成熟，通透性較高，且乳腺癌組織內(nèi)缺乏淋巴管吸收滲出液，致使乳腺癌內(nèi)形成了間質(zhì)高壓區(qū)［15］。此外，由于間質(zhì)壓在腫瘤邊緣處急劇下降，導(dǎo)致大量攜帶血管生成因子和腫瘤細(xì)胞的間質(zhì)液從腫瘤邊緣滲漏到周圍正常組織中，從而促進(jìn)腫瘤的擴(kuò)散［15-16］。

國內(nèi)外研究報(bào)道，大豆異黃酮抗腫瘤作用的機(jī)制有抑制細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，抗腫瘤血管生成等。張學(xué)增等［17］通過建立膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠模型，發(fā)現(xiàn)染料木素能夠抑制成纖維樣滑膜細(xì)胞的增殖；Mizushina等［18］研究發(fā)現(xiàn)染料木素通過抑制人類DNA 拓?fù)洚悩?gòu)酶II的活性來抑制癌細(xì)胞的增殖；Wang等［19］研究得出染料木黃酮可抑制大鼠動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的增殖。另有研究顯示大豆苷元可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，康杰芳等［20］研究發(fā)現(xiàn)3'-大豆苷元磺酸鈉對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7有促凋亡作用；Choi等［21］研究得出大豆苷元促進(jìn)人類乳腺癌細(xì)胞凋亡可能與ERα/C-erbB-2表達(dá)有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)大豆苷元可通過調(diào)節(jié)大鼠乳腺癌細(xì)胞因子的表達(dá)水平，從而抑制乳腺腫瘤的細(xì)胞增殖。

近年來，有不少研究發(fā)現(xiàn)植物提取物可抑制腫瘤的血管生成。本課題組前期研究［22］通過建立絕經(jīng)后大鼠乳腺癌模型，發(fā)現(xiàn)染料木素可抑制乳腺腫瘤的血管生成；鄭國燦等［23］研究得出牛蒡子苷元對(duì)腫瘤血管生成具有抑制作用。而有關(guān)大豆苷元與腫瘤血管調(diào)節(jié)因子和MVD關(guān)系的研究還較少，本實(shí)驗(yàn)建立了乳腺癌大鼠模型，得出當(dāng)大豆苷元的劑量在50 mg/kg以上時(shí)，大鼠瘤體質(zhì)量顯著減輕，大豆苷元的劑量達(dá)到75mg/kg時(shí)，凋亡/增殖比顯著增加，乳腺腫瘤MVD明顯下降，抑瘤效果更顯著；當(dāng)大豆苷元?jiǎng)┝吭?5 mg/kg以上時(shí)，隨劑量的增加可下調(diào)大鼠乳腺腫瘤中VEGF水平，50 mg/kg以上時(shí)可上調(diào)內(nèi)皮抑素水平。提示小劑量的大豆苷元對(duì)乳腺腫瘤生長的抑制作用較弱，較高劑量（≥50 mg/kg）的大豆苷元能降低大鼠乳腺腫瘤VEGF水平、增加內(nèi)皮抑素水平，進(jìn)而使大鼠乳腺腫瘤的微血管密度下降，可有效抑制乳腺腫瘤生長。

綜上所述，大豆苷元的抑瘤作用與抑制腫瘤的血管生成有關(guān)，這為針對(duì)乳腺癌血管調(diào)節(jié)因子的靶向治療提供了新的思路，但是還需要我們深入研究血管調(diào)節(jié)因子及其受體的調(diào)控機(jī)制，這些問題的闡明與解決在乳腺癌預(yù)防和乳腺癌治療上均具有重要的意義。

［1］ 姚守珍，王伊萍. 植物雌激素：大豆異黃酮的研究進(jìn)展［J］.國外醫(yī)學(xué)：婦幼保健分冊(cè)，2005，16（5）：315-317.

［2］ Setchell KD，Zimmer-Nechemias L，Cai J，et al. Exposure of infants to phytoestrogens from soybased infant formula［J］. Lancet，1997，350（9070）：23-27.

［3］ Glazier MG，Bowman MA. A review of the endence for the use of phytoeatrogens as a replacement for traditional eatrogen replacement therapy［J］. Arch Int Med，2001，161（9）：1161-1163.

［4］ Robb EL，Stuart JA. Multiple phytoestrogens inhibit cell growth and confer cytoprotection by inducing manganese superoxide dismutase expression［J］. Phytother Res，2014，28（1）：120-131.

［5］ 張 明，那曉琳，楊 洋，等. 大豆黃素對(duì)有機(jī)氯類農(nóng)藥誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞增殖效應(yīng)的抑制作用［J］. 癌變·畸變·突變，2013，25（2）：96-99.

［6］ 許銀燕，管 靜. Genistein的生物學(xué)功能研究進(jìn)展［J］. 醫(yī)學(xué)綜述，2010，16（5）：735-737.

［7］ Zhang ZY，Wang CZ，Du GJ，et al.Genistein induces G2/M cell cycle arrest and apoptosis via ATM/p53-dependent pathway in human colon cancer cells［J］. Int J Oncol，2013，43（1）：289-296.

［8］ Cheng Bao，Hyeju Namgung，Jaehoo Lee，et al.Daidzein suppresses tumor necrosis factor-α induced migration and invasion by inhibiting hedgehog/gli1 signaling in human breast cancer cells［J］. J Agri Food Chem，2014，62（17）：3759-3767.

［9］ Weidner N. Current pathologic methods for measuring intratumoral microvessel density within breast carcinoma and other solid tumors［J］. Breast Cancer Res Treat，1995，36（2）：169-180.

［10］ Folkman J. Tumor angiogenesis：Therapeutic implications［J］. NEng J Med，1971，285（21）：1182-1186.

［11］ Enholm B，Karpanen T，Jeltsch M，et al. Adenoviral expression of vascular endothelial growth factor-C induces lymphangiogenesis in the skin［J］.Circres，2007，88（2）： 623-629.

［12］ 劉強(qiáng). 乳腺癌血管生成的研究進(jìn)展［J］. 中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2013，10（31）：162-164.

［13］ Robertson JD，Otwood NA，Rothenberg ML，et al. Phase Ⅲtrial of FOLFOX plus bevacizumab or cediranib （AZD2171） as first-line treatment of patients with metastatic colorectal cancer：HORIZON Ⅲ［J］. Clin Colorectal Cancer，2009，8（1）：59-60.

［14］ 劉崇梅，李岳，林明暉，等. VEGF在乳腺癌中的表達(dá)及其與ER、PR的相關(guān)性研究［J］. 現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2012，20（3）：527-529.

［15］ Jain RK，Tong RT，Munn LL. Effect of vascular normalization by antiangiogenic therapy on interstitial hypertension， peritumor edema，and lymphatic metastasis： insights from a mathematical model［J］. Cancer Res，2007，6 7（6）：2729-2735.

［16］ Fukumura D，Jain RK. Tumor microvasculature and microenvironment：targets for anti-angiogenesis and normalization［J］. Microvas Res，2007，74（2）：72-84.

［17］ 張學(xué)增，張育，沈維干，等. 金雀異黃素對(duì)膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠成纖維樣滑膜細(xì)胞MAPK信號(hào)通路的影響［J］. 中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2011，31（10）：1405-1408.

［18］ Mizushina Y，Shiomi K，Kuriyama I，et al.Inhibitory effects of a major soy isoflavone，genistein，on human DNA topoisomerase II activity and cancer cell proliferation［J］. Int J Oncol，2013，43（4）：1117-1124.

［19］ Wang X，Zhao T，Zhou S，et al.Mg2+-dependent modulation of BKCa channels by genistein in rat arteriolar smooth muscle cells［J］. J Cell Physiol，2014，229（3）：1981-1989.

［20］ 康杰芳，李 燾，李 燕，等. 3'-大豆苷元磺酸鈉對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7的促凋亡作用［J］. 北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，34（1）：48-51.

［21］ Choi EJ，Kim GH. Antiproliferative activity of daidzein and genistein may be related to ERα/c-erbB-2 expression in human breast cancer cells［J］. M ol Med Rep，2013，7（3）：781-784.

［22］ Kang XM，Jin S，Zhang QY. Antitumor and antiangiogenic activity of soy phytoestrogen on 7，12-Dimethylbenz［α］anthracene-induced mammary tumors following ovariectomy in Sprague-Dawley rats［J］. J Food Sci，2009，74（7）：237-242.

［23］ 鄭國燦，王兵，黃聰華，等. 牛蒡子苷元對(duì)腫瘤血管生成抑制作用的觀察［J］. 中華腫瘤防治雜志，2013，20（3）：177-180.

Effect of daidzein on the growth and angiogenesis of breast carcinoma

KANG Xinmei，WANG Hui，WANG Li，TANG Dabei，ZHANG Qingyuan
（Department of Medical Oncology， Tumor Hospital of Harbin Medical University， Harbin 150081， Heilongjiang， China）

目的：利 用7，12-二甲基苯蒽（DMBA）誘導(dǎo)的大鼠乳腺癌模型，探討大豆苷元對(duì)乳腺癌腫瘤血管生成的抑制作用及機(jī)制。方法：建立DMBA誘導(dǎo)的乳腺癌大鼠模型，隨機(jī)分為對(duì)照組、10、25、50和75 mg/kg大豆苷元灌胃組，觀察各組腫瘤生長情況，測定腫瘤微血管密度（MVD），并計(jì)算各組腫瘤的增殖指數(shù)和凋亡指數(shù)；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法檢測心臟離心血標(biāo)本中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、堿性成纖維細(xì)胞生長因子（bFGF）和內(nèi)皮抑素的水平。結(jié)果：與對(duì)照組比較，50和75m g/kg大豆苷元組大鼠瘤體質(zhì)量顯著減輕（P＜0.05），75 mg/kg大豆苷元組的凋亡指數(shù)增加，其抑制腫瘤血管生成的效果顯著（P均＜0.05）。與對(duì)照組比較，25、50和75mg/kg大豆苷元組的VEGF水平降低，且呈劑量依賴性（P＜0.05），同時(shí)50和75 mg/kg大豆苷元組的內(nèi)皮抑素水平增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。結(jié)論：較高劑量（≥50m g/kg）的大豆苷元能使大鼠乳腺腫瘤的微血管密度下降，可有效抑制乳腺腫瘤生長。

乳腺癌；大豆苷元；微血管密度；血管內(nèi)皮生長因子；內(nèi)皮抑素

OBJECTIVE:To evaluate the inhibitory effects of daidzein on angiogenesis of breast carcinoma，and to study their anti-cancer mechanisms by using the model of 7，12-dimethylbenz［α］anthraxcene （DMBA）-induced breast carcinoma in SD rats.METHODS：The DMBA -treated SD rats were randomly divided into control，10，25，50 and 75 mg/kg daidzein-gavaged groups. The growth of tumors was assessed in each group. The tumor microvessel density （MVD） was determined，and tumor proliferation index and apoptosis index were calculated. Moreover，vascular endothelial growth factor （VEGF），basic fibroblast growth factor （bFGF） and endostatin levels were measured by ELISA.RESULTS：Compared with the control group，tumor mass was reduced more significantly in the 50and 75 mg/kg daidzein groups （P＜0.05）. The apoptosis index of 75 mg/kg daidzein group was increased，and the effect of inhibiting tumor angiogenesis was significant （all P＜0.05）. Compared with the control group，the VEGF levels of 25，50and 75 mg/kg daidzein groups were all decreased，in a dose-dependent manner（P＜0.05），meanwhile endostatin levels were increased in the 50 and 75 mg/kg daidzein groups，and the differences were statistically significant （all P＜0.05）.CONCLUSION：Higher dose of daidzein （≥50 mg/kg） could decrease MVD of mammary tumor and inhibit the growth of breast carcinoma effectively in rats.

breast c arcinoma；daidzein；microvessel density；vascular endothelial growth factor；endostatin

R737.9

A

1004-616X（2015）01-0016-05

10.3969/j.issn.1004-616x.2015.01.004

2014-09-05；

2014-10-22

黑龍江省普通高等學(xué)校青年學(xué)術(shù)骨干支持計(jì)劃項(xiàng)目（1251G040）

作者信息： 康欣梅，E-mail：kxm791107@163.com；Tel：0451-86298683