何 釗，李 嫻，孫 龍，陳智勇，馮 穎

(中國林業(yè)科學研究院資源昆蟲研究所，國家林業(yè)局資源昆蟲培育與利用實驗室，昆明 650224)

自由基是生物體新陳代謝過程中產生的一類可以單獨存在、具有高度氧化活性、帶有一個或幾個不配對電子的原子團或原子，其化學性質相當活躍(Mcclements et al.，2009)。生物體內一定的自由基水平是維持正常生命活動所必須的，其與細胞的增殖、分化、凋亡、壞死等多種生理、病理現(xiàn)象密切相關(Zhang et al.，2009)。機體的氧化與抗氧化在正常情況下處于一種動態(tài)的平衡之中，各種外源性和內源性的氧化應激均會影響動物體內自由基穩(wěn)定平衡性動態(tài)(Gulcin et al.，2012)，如果自由基產生過多或清除過少機體內就會有剩余自由基，自由基及其代謝產物積累過多可引起細胞代謝功能障礙及損傷，過量的自由基攻擊DNA、蛋白質和碳水化合物等生物大分子，產生多種不良后果(如腫瘤、畸形及衰老等)(Asker et al.，2009;Jia et al.，2009)。由于天然抗氧化劑能夠減少自由基對人體的損傷及減緩慢性疾病的發(fā)生，維持細胞和機體的健康，而且在安全性方面天然抗氧化劑比合成抗氧化劑更具有優(yōu)勢，近幾年來對其研究日益重視(Xu et al.，2009)。

目前已證實具有抗氧化活性的物質有來源于植物、動物、微生物的黃酮、多酚、多肽及生育酚和維生素C(Vc)等(Song et al.，2009;Gulcin et al.，2012;Li et al.，2013)，其中也包括多糖。多糖是廣泛存在于自然界的天然高分子化合物，具有增強機體免疫、抗腫瘤、降血糖、抗衰老等多種生物活性(何釗等，2008)。近年來對植物源多糖和真菌源多糖的自由基清除、抗氧化功效日益受到關注(方積年等，2007)。如靈芝多糖(Youguo et al.，2009)能明顯增加小鼠血液中的SOD 含量和谷胱甘肽酶的活力，銀耳多糖(吳瓊等，2009)可抑制自由基過氧化作用，鐵皮石斛多糖(何鐵光等，2007)可以降低自由基和H2O2誘發(fā)的小鼠肝組織丙二醛的生成。與其它生物多糖相比，對昆蟲來源多糖研究相對較少，但已有的研究發(fā)現(xiàn)昆蟲多糖與其他多糖一樣具有一定的生物活性，如白蠟蟲雌Ericerus pela Cavannes成蟲(馮穎等，2006a，2006b;何釗等，2008)多糖由水提醇沉制備，主要單糖組成為甘露糖、葡萄糖及半乳糖等組成，是白蠟蟲具有提高免疫作用的成分之一，堿提的家蠶Bombyx mori L.蛹多糖(孫龍等，2006)具有非特異免疫、細胞免疫及體液免疫功能，美洲大蠊Periplaneta americana L.多糖(孫龍等，2009)具有非特異性免疫及體液免疫功能;黃粉蟲Terebrio molitor L.多糖(何釗等，2011)的提取及抗氧化研究發(fā)現(xiàn)其多糖具有抗氧化作用。本文對傳統(tǒng)資源昆蟲白蠟蟲雌成蟲、家蠶蛹、藥用昆蟲美洲大蠊、喙尾琵甲Blaps rhynchopetera F.及可人工養(yǎng)殖的蝗蟲Hieroglyphus annulicornis 等5種昆蟲多糖進行體外抗氧化活性研究，為開發(fā)和利用昆蟲來源多糖、拓寬昆蟲資源利用途徑提供基礎。

1 材料與方法

1.1 儀器

Varioskan Flash 多功能讀數(shù)儀(美國Thermo scientific)、二氧化碳培養(yǎng)箱(美國 Thermo scientific)、細胞活力計數(shù)儀(美國Beckman)

1.2 材料與試劑

原料:白蠟蟲雌成蟲、蝗蟲、美洲大蠊、喙尾琵甲、家蠶蛹通過水提醇沉制備(孫龍等，2007;何釗等，2008;孫龍等，2009)，超濾濃縮(NW=3000)，Sevag 法脫蛋白后冷凍干燥得到白蠟蟲多糖、蝗蟲多糖、美洲大蠊多糖、琵甲多糖及蠶蛹多糖。

試劑:二苯代苦味肼基自由基(DPPH·)、三吡啶三吖嗪(tripyridyl-triazine，TPTZ)(美國Sigma)，Dulbecco's modified Eagle's medium(DMEM)高糖培養(yǎng)基(美國Gibco)，胎牛血清(美國Hyclon)，胰蛋白酶(美國Amresco)，磷酸鹽緩沖液(PBS)(美國Hyclon)，甲基噻唑基四唑溴鹽(MTT)(美國Amresco)，二甲基亞砜(DMSO)(美國Amresco)，其余均為國產分析純。人神經母細胞瘤細胞(SH-SY5Y)購至中國科學院昆明動物研究所。

1.2 實驗方法

1.2.1 鐵離子總還原/抗氧化能力(Ferric reducing/antioxidant power，F(xiàn)RAP 法)

FRAP 試劑:10 mmol/L 的TPTZ(用40 mmol/L鹽酸溶解)，20 mmol/L 的FeCl3·6H2O 和pH 3.6的乙酸緩沖液以1∶1∶10 的體積比混勻，在37℃下保溫備用(Benzie et al.，1996)。

標準曲線的繪制:分別吸取0.1 mL 不同濃度的FeSO4溶液，各加入3.9 mL FRAP 試劑，混勻后37℃下反應10 min，測定593 nm 下吸光值。以吸光度為縱坐標，F(xiàn)eSO4濃度為橫坐標，繪制標準曲線。

樣品測定:0.1 mL 不同濃度(0.05-1.0 mg/mL)樣品稀釋液，加入3.9 mL FRAP 試劑，混勻后37℃反應10 min，593 nm 下測定吸光值。以去離子水作為空白對照，樣品還原能力以達到同樣吸光度所需的FeSO4的摩爾濃度表示。

1.3.2 清除DPPH·自由基

0.4mmol/L DPPH·乙醇溶液0.2 mL 與1.0 mL不同濃度(0.05-1.0 mg/mL)的樣品混和，再加2 mL 去離子水，充分混勻后在暗處靜置30 min，517 nm 處測定其吸光度。清除率計算公式為:清除率(%)=［A0-(Ai-Aj)］/A0×100%，式中Ai為樣品與DPPH·反應后體系的吸光度;Aj為樣品本身吸光度(以0.2 mL 乙醇替代DPPH·);A0為未加樣品空白值(以去離子水替代樣品)的吸光度(Dasgupta et al.，2004)。

1.3.3 清除·OH 自由基

采用Fenton 反應產生羥自由基，反應體系中含0.5 mL 8.8 mmol/L H2O2，0.5 mL 9 mmol/L FeSO4、0.5 mL 9 mmol/L 水楊酸-乙醇溶液、不同濃度(0.05-1.0 mg/mL)多糖4 mL，混勻后加0.5 mL 9mmol/L H2O2啟動反應，37℃水浴反應30 min，在510 nm 下測量吸光值。清除率計算公式為:·OH 清除率(%)=［A0-(Ai-Aj)］/A0×100%，式中，A0為未加樣品(以去離子水代替樣品)的空白對照液吸光度;Ai為加入多糖溶液后反應體系的吸光度;Aj為不加H2O2的多糖溶液(以去離子水代替H2O2)本底吸光度(楊江濤等，2008)。

1.3.4 清除超氧陰離子(O2-·)活性

采用鄰苯三酚自氧化法測定清除O2-·活性。50 mmol/L Tis-HCl 緩沖液(pH=8.0，含1 mM EDTA)2.8 mL 與0.1 mL 各濃度(1-10 mg/mL)樣品混和，置于25℃水浴中預熱20 min，再加入0.2 mL 6 mmol/L 鄰苯三酚溶液(以10 mmol/L HCl 配制)，迅速混勻并計時，以10 mmol/L HCL為參比，325 nm 處每隔30 s 測定反應體系的吸光值，共記錄前4 min，計算吸光度值隨時間的變化值(鄰苯三酚自氧化速率)。清除率計算公式為:O2-·抑制率(%)=(1-樣品自氧化速率/空白自氧化速率)×100%(何釗等，2011)。

1.3.5 對H2O2氧化損傷細胞模型的保護作用

人神經母細胞瘤細胞(SH-SY5Y)采用含10% 胎牛血清的DMEM 培養(yǎng)液、于37℃、5%CO2、95%空氣、飽和濕度的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，0.25%胰酶消化傳代，選取對數(shù)生長期細胞進行實驗。96 孔培養(yǎng)板中加入6×105cells/mL 濃度的對數(shù)生長期細胞(200 μL/孔)，培養(yǎng)24 h 后吸棄上清液，加入200 μL 含0.1、1、10、100 及1000 μg/mL 的不同濃度多糖樣品培養(yǎng)基(200 μL/孔)，每個濃度設4個平行孔，同時設正常對照組(未損傷細胞)、模型組(細胞損傷、未給藥加入等量培養(yǎng)基)，200 μg/mL 維生素C 為陽性組。各組細胞培養(yǎng)24 h 后取出吸棄上清液，用磷酸鹽緩沖液清洗一遍，每孔加入200 μL、含800 μmol/L H2O2的DMEM 培養(yǎng)液，處理1h 后加入MTT 溶液(5 mg/mL，20 μLμg/孔)培養(yǎng)4 h，吸棄上清液，加入150 μL/孔DMSO，振蕩15 min，570 nm 波長測定各孔吸光度，按照公式:細胞相對存活率(%)=(樣品孔吸光度/未損傷對照孔吸光度)×100%計算細胞相對存活率，根據(jù)細胞相對存活率的高低確定抗氧化能力的強弱，細胞存活率高，即多糖抗氧化能力較強(Cho et al.，2008)。

1.4 數(shù)據(jù)處理

抗氧化試驗均重復三次，由Excel 2003 軟件處理數(shù)據(jù)，結果以±s 表示，組間差異進行方差分析。

2 結果與分析

2.1 5種昆蟲多糖的鐵離子總還原/抗氧化能力

5種多糖的鐵離子總還原能力如圖1 所示，在試驗濃度條件下5種昆蟲多糖均表現(xiàn)出了還原能力，總還原能力與濃度呈正相關，且具有較好的線性關系。但各種昆蟲多糖的總還原能力有一定的差異，其中白蠟蟲多糖的總還原能力在這5種昆蟲多糖中最強，蠶蛹多糖的總還原能力最弱，5種多糖間的總還原能力具有顯著性差異(P＜0.05)，相同濃度下各昆蟲多糖總還原能力順序為白蠟蟲多糖＞琵甲多糖＞蝗蟲多糖＞美洲大蠊多糖＞蠶蛹多糖。

2.2 5種昆蟲多糖清除DPPH·自由基能力

圖1 昆蟲多糖的還原力Fig.1 Ferric reducing power of insect polysaccharides at different concentrations

5種多糖對DPPH 自由基清除能力如圖2 所示，5種昆蟲多糖均顯示了一定的對DPPH·清除能力，隨著多糖濃度的升高，對DPPH·清除能力增加，且各多糖間對DPPH·清除能力有一定差別。根據(jù)各多糖對DPPH·產生50% 清除效果(IC50值)所需濃度量來判斷各多糖對DPPH·的清除能力為:白蠟蟲多糖(IC50為0.28 mg/mL)＞琵甲多糖(IC50為0.4 mg/mL)＞美洲大蠊多糖(IC50為0.49 mg/mL)＞蝗蟲多糖(IC50為0.60 mg/mL)＞蠶蛹多糖(IC50＞1.0 mg/mL);蠶蛹多糖的對DPPH·清除能力最弱，試驗范圍內其對DPPH·的清除率均低于20%，而其余4種昆蟲多糖的清除效果較為接近。

圖2 昆蟲多糖對DPPH·清除能力Fig.2 The scavenging activity on DPPH·of insect polysaccharides

2.3 5種昆蟲多糖清除羥(·OH)自由基能力

5種多糖對羥自由基的清除能力如圖3 所示，5種昆蟲多糖對羥自由基的清除能力隨濃度的增加而增強，當多糖濃度大于0.5 mg/mL 琵甲多糖、美洲大蠊多糖及蠶蛹多糖清除羥自由基能力逐漸達到飽和，變化趨緩;當多糖濃度達到1.0 mg/mL時，蠶蛹多糖、美洲大蠊多糖和琵甲多糖對羥自由基的清除率均接近100%。根據(jù)各多糖對羥自由基產生50%清除效果所需量(IC50)來判斷，各多糖對·OH 的清除能力為蠶蛹多糖(IC50為0.22 mg/mL)＞白蠟蟲多糖(IC50為0.27 mg/mL)＞美洲大蠊多糖(IC50為0.28 mg/mL)＞琵甲多糖(IC50為0.34 mg/mL)＞蝗蟲多糖(IC50＞1.0 mg/mL)，且蠶蛹多糖、白蠟蟲多糖、琵甲多糖及美洲大蠊多糖的IC50較為接近;蝗蟲多糖的清除能力最弱，在試驗范圍內其對羥自由基的清除能力低于50%，表明其對羥自由基的清除能力不明顯。

圖3 昆蟲多糖對羥自由基的清除作用Fig.3 The scavenging activity of different polysaccharides on hydroxyl radicals

2.4 5種昆蟲多糖對超氧陰離子(O2-·)抑制能力

圖4 為5種昆蟲多糖對超氧陰離子清除效果，由圖可知5種多糖對超氧陰離子有一定的清除作用，隨濃度增加清除效果有一定的提升。其中美洲大蠊多糖的對超氧陰離子清除能力相對最強，琵甲多糖、蝗蟲多糖及蠶蛹多糖清除效果較弱;在實驗范圍內，只有美洲大蠊多糖對超氧陰離子清除率能達到50%以上，其余均低于50%，說明幾種多糖對超氧陰離子的清除作用不明顯。

圖4 昆蟲多糖對超氧陰離子清除作用Fig.4 The scavenging activity of different polysaccharides on superoxideradicals

2.5 昆蟲多糖對H2O2損傷細胞保護作用

采用H2O2損傷人神經母細胞瘤細胞造模，正常組(即未損傷組)細胞相對存活率為100%，H2O2損傷后的SH-SY5Y 細胞存活率為61.8±8.8%，明顯低于正常對照組(P＜0.01)，陽性對照200 μg/mLVc 能顯著增加H2O2氧化損傷的細胞相對存活率(84.0%±4.4%，P＜0.01)，對模型細胞顯示出較好的抗氧化活性，表明本評價體系可行。

5種多糖在本文造模條件下，對過氧化氫損傷細胞保護作用結果見圖5，圖中0 μg/mL 多糖濃度組即為模型組(未給藥)。白蠟蟲多糖和美洲大蠊多糖在試驗濃度較高的1000 μg/mL 條件下能夠增加損傷細胞的存活率，但在其它濃度條件下的損傷細胞存活率沒有提高;蠶蛹多糖僅在低濃度的0.1 μg/mL 條件下能增加細胞存活率，濃度增加存活率反而下降;琵甲多糖在1-1000 μg/mL 濃度范圍均能增加細胞存活率，且1-10 μg/mL 存活率高于100-1000 μg/mL 濃度;蝗蟲多糖在1-100 μg/mL 范圍內細胞存活率增加，其它濃度下?lián)p傷細胞存活率沒有增加。試驗結果表明，5種昆蟲多糖對過氧化氫損傷的細胞均有一定保護作用，可提高損傷細胞的存活率，但作用濃度范圍及保護程度上存在一定差異，且量效關系不明顯。

圖5 昆蟲多糖對H2O2損傷細胞保護作用Fig.5 Inhibition of H2O2-induced cell death by insect polysaccharides

3 結論與討論

通過化學抗氧化和細胞抗氧化兩種體外抗氧化性能試驗顯示，5種昆蟲多糖對不同的自由基體系呈現(xiàn)出了清除活性，對過氧化氫損傷的人神經母細胞瘤細胞細胞均有一定保護作用，研究結果表明昆蟲多糖與其它來源多糖類似具有較好的抗氧化活性，經過深入研究可作為天然抗氧化劑利用。

多糖的結構與其抗氧化活性具有相關性(Synytsya et al.，2013)，如分子量越小的多糖抗氧化活性越強，從綠茶中分離得到3種雜多糖(Chen，2008)，其中分子量最小的多糖抗氧化能力顯著高于其它分子量較大的兩種多糖;另外多糖分子中所含有吸電子基團影響清除自由基能力，如枸杞中提取的各多糖組分在清除自由基能力上強弱不一，除分子量外還受糖醛酸含量等多種因素影響(Lin，2009)。5種昆蟲多糖來源不同且具有不同的化學結構，其中白蠟蟲多糖的單糖組成為葡萄糖、半乳糖和甘露糖(何釗等，2008);美洲大蠊多糖的單糖組成以甘露糖、葡萄糖和半乳糖為主，含少量木糖、阿拉伯糖及葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸(孫龍等，2009);蠶蛹多糖以葡萄糖為主含少量鼠李糖、甘露糖、半乳糖及葡萄糖醛酸(孫龍等，2007);琵甲多糖含阿拉伯糖、葡萄糖、鼠李糖半乳糖及葡萄糖醛酸(孫龍，2007)。5種昆蟲多糖在各體外抗氧化活性檢測中呈現(xiàn)一定的差異，應與這5種多糖的單糖組成、結構等化學性質有關。

體外抗氧化作用評測的機理多樣，F(xiàn)RAP 和DPPH 法屬于基于電子轉移(SET)方法，羥自由基和超氧自由基活性氧自由基方法，其它還有基于原子轉移(HAT)方法;而對過氧化氫損傷細胞保護作用為細胞抗氧化，為檢測抗氧化活性的生物類方法(Gulcin et al.，2012)。由于體外檢測的機理不同，在研究中需要通過多種方法聯(lián)合檢測才能全面準確評價待測物的抗氧化性能，以確保結果的可靠。

本文中5種昆蟲多糖的體外抗氧化相對維生素C 效果要弱，對過氧化氫損傷的細胞均有一定保護作用，但作用濃度范圍及保護程度上存在一定差異，且量效關系不明顯。分析其原因可能是維生素C 和昆蟲多糖的抗氧化機理上存在差異，也可能是由于提取物中有效活性物質含量較低造成的。對掛金燈Physalis alkekengi var.francheti 中的多糖進行提取分離并進行體外抗氧化活性研究表明，分離提純后的各多糖組分抗氧化活性顯著高于粗多糖(Ge et al.，2009)。Sun 等(2009)將紫球藻Porphyridium cruentum 中提取的多糖降解為不同分子量組分，對降解后各組分及原始提取多糖的抗氧化活性進行了比較，發(fā)現(xiàn)原始提取多糖無顯著抗氧化活性，而降解后小分子量多糖均顯著地具有不同程度的抗氧化活性，并認為多糖具有抗氧化活性是由分子量、多糖所帶基團等多個因素共同作用的結果。由此分析5種昆蟲多糖的體外抗氧化活性差異應與其純度和結構等有關，分離純化后抗氧化能力能否進一步提升以及測定各多糖結構確定與抗氧化能力的差異尚待研究。

References)

Asker MMS，Ahmed YM，Ramadan MF.Chemical characteristics and antioxidant activity of exopolysaccharide fractions from Microbacterium terregens［J］.Carbohydrate Polymers，2009，77(3):563-567.

Benzie IF，Strain JJ.The ferric reducing ability of plasma(FRAP)as a measure of“antioxidant power”:the FRAP assay［J］.Analytical Biochemistry，1996，239(1):70-76.

Dasgupta N，De B.Antioxidant activity of Piper betle L.leaf extract in vitro［J］.Food Chemistry，2004，88(2):219-224.

Chen H，Zhang M，Qu Z，et al.Antioxidant activities of different fractions of polysaccharide conjugates from green tea(Camellia Sinensis)［J］.Food Chemistry，2008，106(2):559-563.

Cho ES，Lee KW，Lee HJ.Cocoa procyanidins protect PC12 cells from hydrogen-peroxide-induced apoptosis by inhibiting activation of p38 MAPK and JNK［J］.Mutation Research，2008，640(1):123-130.

Dasgupta N，De B.Antioxidant activity of Piper betle L.leaf extract in vitro［J］.Food Chemistry，2004，88(2):219-224.

Fang JN，Dingf K.Bioactivities，isolation and purification methods of polysaccharide［J］.Chinese Journal of Natural Medicines，2007，5(5):338-347.［方積年，丁侃.天然藥物——多糖的主要生物活性及分離純化方法［J］.中國天然藥物，2007，5(5):338-347］

Feng Y，Chen XM，Ma Y，et al.Experimental study on immunomodulation of white wax scale(Ericerus pela Chavannes)［J］.Forest Resarch，2006，19(2):221-224.［馮穎，陳曉鳴，馬艷，等.白蠟蟲免疫調節(jié)作用試驗研究［J］.林業(yè)科學研究，2006，19(2):221-224］

Feng Y，Chen XM，He Z，et al.Antimutation experiment of white wax scale(Ericerus pela)and analysis of main function factors［J］.Forest Resarch，2006，19(3):284-288.［馮穎，陳曉鳴，何釗，等.白蠟蟲抗突變實驗與主要功效成分分析［J］.林業(yè)科學研究，2006，19(3):284-288］

Ge Y，Duan Y，F(xiàn)ang G，et al.Polysaccharides from fruit calyx of Physalis alkekengi var.francheti:Isolation，purification，structural features and antioxidant activities［J］.Carbohydrate Polymers，2009，77(2):188-193.

Gulcin I.Antioxidant activity of food constituents:an overview［J］.Arch.Toxicol.，2012，86(3):345-391.

He TG，Yang LT，Li YR，et al.Effects of the polysaccharides DCPP1a-1 from suspension-cultured protocorm s of Dendrobium candidum on oxygen radical and lipid peroxidation［J］.Natural Product Research and Development，2007(3)，19:410-414.［何鐵光，楊麗濤，李楊瑞，等.鐵皮石斛原球莖多糖DCPP1a-1 對氧自由基和脂質過氧化的影響［J］.天然產物研究與開發(fā)，2007，19(3):410-414］

He Z，Sun L，F(xiàn)eng Y，et al.The extraction of polysaccharide from white wax scale and analysis of monosaccharide compositions［J］.Forest Research，2008，21(6):792-796.［何釗，孫龍，馮穎，等.白蠟蟲多糖的提取及單糖組分分析［J］.林業(yè)科學研究，2008，21(6):792-796］

He Z，F(xiàn)eng Y，Sun L，et al.Optimization of extraction process by using response surface methodology and antioxidant activity of polysaccharide from yellow mealworm［J］.Journal of Food Science and Biotechnology，2011，30(5):641-647.［何釗，馮穎，孫龍，等.黃粉蟲多糖響應面法提取及抗氧化活性［J］.食品與生物技術學報，2011(5):641-647］

Jia J，Zhang X，Hu Y，et al.Evaluation of in vivo antioxidant activities of Ganoderma lucidum polysaccharides in STZ-diabetic rats［J］.Food Chemistry，2009，115(1):32-36.

Li CX，Li FX，Li P，et al.Study on Antioxidant activity of flavonoids from Sophora japonica Linn leaves［J］.Natural Product Research Development，2013，25(5):676-680.［李彩霞，李復興，李鵬，等.國槐葉黃酮的抗氧化活性研究［J］.天然產物研究與開發(fā)，2013，25(5):676-680］

Lin CL，Wang CC，Chang SC，et al.Antioxidative activity of polysaccharide fractions isolated from Lycium barbarum Linnaeus［J］.International Journal of Biological Macromolecules，2009，45(2):146-151.

Mcclements DJ，Decker EA.Lipid oxidation in oil-in-water emulsions:impact of molecular environment on chemical reactions in heterogeneous food systems［J］.Journal of Food Science，2000，65(8):1270-1282.

Song YX，Wang CQ，Zhang GH，et al.Study on antoxidation effect of collagen peptide with different components［J］.Natural Product Research Development，2009，21(3):388-390.［宋育璇，王常青，張國華，等.不同組分膠原多肽抗氧化作用的比較研究［J］.天然產物研究與開發(fā)，2009，21(3):388-390］

Sun L.Studies on the Isolationand Purification of Polysaccharides from Three Insects and Their Immunomodulating Activities［D］.Beijing:Chinese Academy of Forestry，2007.［孫龍.三種昆蟲多糖的分離純化與免疫活性研究［D］.北京:中國林業(yè)科學研究院，2007］

Sun L，F(xiàn)eng Y，He Z，et al.Studies on alkaline solution extraction of polysaccharide from silkworm pupa and its immunomodula tingactivities［J］.Forest Research，2007，20(6):782-786.［孫龍，馮穎，何釗，等.蠶蛹多糖的堿液提取及免疫活性初步研究［J］.林業(yè)科學研究，2007，20(6):782-786］

Sun L，F(xiàn)eng Y，He Z，et al.Study on extraction，analysis of water soluble polysaccharide from cockroaches and its immunologic activities［J］.Forest Research，2009，22(2):256-261.［孫龍，馮穎，何釗，等.蟑螂水溶性多糖提取、分析及免疫活性研究［J］.林業(yè)科學研究，2009，22(2):256-261］

Sun L，Wang C，Shi Q，et al.Preparation of different molecular weight polysaccharides from Porphyridium cruentum and their antioxidant activities.［J］.International Journal of Biological Macromolecules，2009，45(1):42-47.

Synytsya A，Novak M.Structural diversity of fungal glucans［J］.Carbohydrate Polymer，2013，92(1):792-809.

Wu Q，Dai YG，Gao CC，et al.Antioxidations of acid-degrade water-soluble Polysaccharides from Tremella fuciformis［J］.Food Science，2009，30(13):93-96.［吳瓊，代永剛，高長城，等.酸降解水溶性銀耳多糖及抗氧化作用研究［J］.食品科學，2009，30(13):93-96］

Xu W，Zhang F，Luo Y，et al.Antioxidant activity of a water-soluble polysaccharide purified from Pteridium aquilinum［J］.Carbohydrate Research，2009，344(2):217-222.

Yang HT，Yang J，Xie H，et al.The antioxidantive activities of crude and pure polysaccharides from Rosa roxburghii in vitro［J］.Science and Technology of Food Industry，2008，29(2):94-96.［楊江濤，楊娟，謝紅，等.刺梨多糖粗品與純品體外抗氧化作用［J］.食品工業(yè)科技，2008，29(2):94-96］

Youguo C，Zongji S，Xiaoping C.Modulatory effect of Ganoderma lucidum polysaccharides on serum antioxidant enzymes activities in ovarian cancer rats［J］.Carbohydrate Polymers，2009，78(2):258-262.

Zhang Q，Zhang Z，Cheung H，et al.Antioxidant activity of Rhizoma smilacis Glabrae extracts and its key constituent-astilbin［J］.Food Chemistry，2009，115(1):297-303.