李愛(ài)朵 趙建華 杜俊芳 秦劍平 李增開(kāi) 李新春

（1，陜西省榆林市神木縣畜牧獸醫(yī)技術(shù)推廣站 719300； 2，陜西省絨山羊工程技術(shù)研究中心 719000）

補(bǔ)硒-VE及授精方法對(duì)薩?？搜虺瑪?shù)排卵和受精率的影響

李愛(ài)朵1趙建華1杜俊芳1秦劍平1李增開(kāi)1李新春2*

（1，陜西省榆林市神木縣畜牧獸醫(yī)技術(shù)推廣站 719300； 2，陜西省絨山羊工程技術(shù)研究中心 719000）

選擇做胚胎移植供體120只薩福克母羊，采用2因素4重復(fù)試驗(yàn)，在飼養(yǎng)管理和激素處理相同的條件下，進(jìn)行補(bǔ)加亞硒酸鈉-VE和不同輸精方式試驗(yàn)，研究其對(duì)供體母羊排卵和受精率的影響。結(jié)果表明：肌注亞硒酸鈉-VE的試驗(yàn)組受體母羊，每只平均沖胚11.5枚，顯著高于對(duì)照組（8.9枚）（p＜0.01），且組內(nèi)各重復(fù)間差異不顯著（p＞0.05），可見(jiàn)，在缺硒地區(qū)在配種前給母羊補(bǔ)充硒-VE對(duì)其排卵有明顯的影響；采用內(nèi)窺鏡子宮角輸精法，受精率97.02%，而采用常規(guī)子宮頸口輸精法，受精率82.57%，二者差異顯著（p＜0.05），說(shuō)明內(nèi)窺鏡子宮角輸精法，是一種效果很好的人工授精輸精方法。

薩?？四秆颍环敝?；胚胎移植；亞硒酸鈉VE注射液；內(nèi)窺鏡子宮角輸精法；常規(guī)輸精法；超數(shù)排卵；受精率；試驗(yàn)

胚胎移植技術(shù)在家畜的育種繁育中應(yīng)用很普遍，而且越來(lái)越商業(yè)化。為了增加純種薩?？巳庋虻臄?shù)量，神木縣從2010年起就引進(jìn)該技術(shù)對(duì)薩?？巳庋蜻M(jìn)行胚胎移植。但是移植供體羊排卵數(shù)量少、受體受精率低是制約這項(xiàng)技術(shù)推廣的瓶頸。為此我們分析了影響供體母羊超數(shù)排卵的諸多因素，比如有供體羊的體況、年齡、胎次、季節(jié)，前期的營(yíng)養(yǎng)水平，超排處理選用的激素類型、劑量以及配種的方法等。在微量營(yíng)養(yǎng)方面， 《動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)》、 《動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與代謝病防治》等教程描述，硒缺乏明顯影響繁殖性能，對(duì)家畜繁殖的影響主要表現(xiàn)在公畜精液不良，母畜受胎率低下甚至不孕，妊娠畜會(huì)出現(xiàn)流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎等現(xiàn)象[1,2]。吳森研究，添加適量硒可使超數(shù)排卵試驗(yàn)羊黃體飽滿，回收胚胎數(shù)和可利用胚胎數(shù)均顯著提高，超數(shù)排卵情況較好。補(bǔ)硒在一定程度上提高了母羊的超排效果[3]。神木縣屬于硒缺乏地區(qū)，本次試驗(yàn)擬探討補(bǔ)充外源硒和VE對(duì)超排的影響，在體況、年齡、胎次和季節(jié)、超排處理選用的激素及劑量等因素盡可能一致的情況下，給供體試驗(yàn)羊使用微量元素硒和VE注射液與不使用的羊?qū)Ρ龋瑫r(shí)探討選用內(nèi)窺鏡人工授精法與普通子宮角輸精法的不同效果。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)的時(shí)間和地點(diǎn)

本次試驗(yàn)從2013年的8月20日開(kāi)始，在神木縣爾林兔鎮(zhèn)的神木縣西農(nóng)畜牧科技示范牧場(chǎng)（以下簡(jiǎn)稱為一場(chǎng)）、瑞章農(nóng)林牧發(fā)展有限公司（以下簡(jiǎn)稱為二場(chǎng)）、神木縣沃源農(nóng)業(yè)有限公司（以下簡(jiǎn)稱為三場(chǎng)）和中雞鎮(zhèn)的神木縣旺升農(nóng)民專業(yè)合作社（以下簡(jiǎn)稱為四場(chǎng)）開(kāi)展試驗(yàn)。

1.2 試驗(yàn)材料

1.2.1 供體羊

供體母羊的選擇：選健康無(wú)病、有正常的產(chǎn)羔記錄，膘情適中的2～4.5周歲的純種薩?？四秆?20只，所有供體羊120只全來(lái)自神木縣西農(nóng)畜牧科技示范牧場(chǎng)，將所選的供體羊隨機(jī)分成4組投放到四大羊場(chǎng)由專人飼喂，以備試驗(yàn)用；配種公羊的選擇：純種薩?？斯颍?周歲以上，體況健壯，膘情較好，有豐富的配種經(jīng)驗(yàn)。這次配種用的公羊均來(lái)自神木縣西農(nóng)畜牧科技示范牧場(chǎng)，共4只，由神木縣西農(nóng)畜牧科技示范牧場(chǎng)飼養(yǎng)，以備配種用。

受體羊1000只（實(shí)際施行胚移手術(shù)的955只），由進(jìn)行試驗(yàn)的4個(gè)場(chǎng)提供，主要為肉羊雜交個(gè)體和購(gòu)買的小尾寒羊雜交個(gè)體，體格較大，健康無(wú)病。

1.2.2 同期發(fā)情藥物、微量元素和VE

同期發(fā)情所用藥物：促卵泡素（FSH）、促排 3號(hào)（LRH-A3）由寧波第二激素廠生產(chǎn)；氯前列醇鈉注射液（PG）由寧波三生藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；孕酮陰道海綿栓由西北農(nóng)林科技大學(xué)研制。

微量元素硒和VE：用亞硒酸鈉VE注射液（以下簡(jiǎn)稱“硒-VE”），由哈爾濱摩天農(nóng)科獸藥有限公司生產(chǎn)。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)設(shè)計(jì)為2因素4個(gè)重復(fù)（場(chǎng)）試驗(yàn)，將120只試驗(yàn)羊隨機(jī)分成8組，分到4個(gè)羊場(chǎng)，即1-Ⅰ，1-Ⅱ；2-Ⅰ，2-Ⅱ；3-Ⅰ，3-Ⅱ；4-Ⅰ，4-Ⅱ。硒-VE因素試驗(yàn)：每場(chǎng)-Ⅱ?yàn)樵囼?yàn)組，-Ⅰ為對(duì)照組，試驗(yàn)組補(bǔ)加硒-VE，對(duì)照組不補(bǔ)，其他條件一致；輸精方法試驗(yàn)：1-Ⅰ，1-Ⅱ；2-Ⅰ，2-Ⅱ?yàn)樵囼?yàn)組，采用內(nèi)窺鏡子宮角人工輸精法，3-Ⅰ，3-Ⅱ；4-Ⅰ，4-Ⅱ?yàn)閷?duì)照組，采用常規(guī)子宮頸口人工輸精法。

1.3.2 試驗(yàn)期飼養(yǎng)管理

將選出進(jìn)行胚胎移植的供、受體羊和其它的羊分開(kāi)，逐只進(jìn)行B超檢查，采血化驗(yàn)布病，分別單獨(dú)組群；每一場(chǎng)的供體母羊隨機(jī)分成Ⅰ、Ⅱ組，每組15只，飼喂相同的粗飼料和精飼料。粗飼料是青貯玉米、沙打旺和紫花苜蓿干草，自由采食；精飼料（玉米78%、菜粕4%、豆粕12%、食鹽1%）。每只羊補(bǔ)飼0.6kg/日。專人飼養(yǎng)，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理。

1.3.3 供體羊補(bǔ)加硒-VE的處理

從2013年8月21日（配種前15d）開(kāi)始，對(duì)每場(chǎng)的Ⅱ組供體羊（作為試驗(yàn)組）開(kāi)始注射硒-VE，直至配種結(jié)束，劑量為每天3ml/只，方法是每天上午一次性分點(diǎn)肌肉注射。Ⅰ組供體羊作為對(duì)照組，不注射任何藥物，其他飼養(yǎng)管理與試驗(yàn)組相同只。

1.3.4 對(duì)供體羊同期發(fā)情、超數(shù)排卵、配種以及胚胎收集

對(duì)每場(chǎng)的供體羊Ⅰ、Ⅱ組同時(shí)處理，一場(chǎng)是從8月22號(hào)開(kāi)始肌注PG，每只1ml，以后每隔兩天分別處理二場(chǎng)，三場(chǎng)，四場(chǎng)；注射PG后2d開(kāi)始觀察發(fā)情，并對(duì)發(fā)情情況做了記錄；發(fā)情2d后開(kāi)始置栓，12d后去栓，去栓后對(duì)正常發(fā)情的供體羊肌注FSH，每只2.5ml，每12h注射1次，連續(xù)用3d，然后進(jìn)入配種階段。供體羊發(fā)情8h后開(kāi)始配種，每8h配種一次，對(duì)首次配種的發(fā)情母羊肌注促排3號(hào)，每只10μl，供體羊前期處理結(jié)果見(jiàn)表1、2。

表1 供體羊同期發(fā)情處理記錄表

表2 供體羊超排處理記錄表

供體羊發(fā)情后開(kāi)始肌注促排3號(hào)，每只10μl，發(fā)情8h后開(kāi)始配種，所有的供體羊都進(jìn)行人工配種。為了比較內(nèi)窺鏡子宮角輸入法與常規(guī)人工授精的效果，對(duì)一、二場(chǎng)的羊采用內(nèi)窺鏡法進(jìn)行子宮角輸精法配種，此種方法是在供體羊發(fā)情8h后通過(guò)手術(shù)只配種一次。具體操作是將配種羊保定在手術(shù)臺(tái)上，局部麻醉，用手術(shù)刀在羊下腹部?jī)蓽\窩距離中線2cm處各打開(kāi)一個(gè)1～1.5cm的小口，內(nèi)窺鏡放入右邊刀口里觀察子宮角，用腸鉗放入左邊的刀口取出一側(cè)的子宮角，用1ml的注射器將稀釋好的精液注入子宮角0.5ml，輸完后將子宮角放回原處，然后找出另一側(cè)的子宮角用同樣的方法輸入后再放回原處，最后將傷口縫合；而三、四場(chǎng)的羊采用常規(guī)人工輸精法配種。此法就是將配種羊保定在輸精架上，利用羊的輸精槍將裝好的精液通過(guò)陰道進(jìn)入子宮頸口輸入子宮，用此種方法每只羊每8h配種一次，一個(gè)情期共配種3次。

供體羊在配種后6～6.5d開(kāi)始沖胚，在沖胚手術(shù)前24h停食并做好手術(shù)前的準(zhǔn)備。一場(chǎng)供體羊在9月17日手術(shù)沖胚，以后每隔兩天進(jìn)行其它場(chǎng)的沖胚手術(shù)。

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)采用Excel軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理，然后DPS7.05數(shù)據(jù)處理軟件進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)[4]。試驗(yàn)數(shù)據(jù)和分析結(jié)果均以 “平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 補(bǔ)充硒-VE對(duì)胚移供體母羊排卵效果

此次試驗(yàn)原設(shè)計(jì)處理并沖胚的供體羊總共是120只，結(jié)果四場(chǎng)Ⅰ組有一只供體羊沒(méi)有沖胚，所以實(shí)際沖胚胎的供體羊是119只，總回收卵1212枚。其中補(bǔ)充 “硒-VE”組供體羊60只，共回收卵689枚，每只平均11.5±3.5枚，且組內(nèi)各場(chǎng)之間差異不顯著（p＞0.05）；對(duì)照組供體羊59只，總回收卵523枚，每只平均8.9±2.9枚，且組內(nèi)各場(chǎng)之間差異不顯著（p＞0.05）。Ⅰ、Ⅱ組回收卵均數(shù)之間差異極顯著（p＜0.01），詳見(jiàn)表3。

表3 補(bǔ)硒對(duì)供體羊沖胚數(shù)的影響

2.2 內(nèi)窺鏡子宮角輸精法與常規(guī)人工輸精法效果比較

一、二場(chǎng)采用內(nèi)窺鏡子宮角輸精法，總回收卵604枚，受精卵586枚，受精率97.02%，而三、四場(chǎng)用常規(guī)人工輸精法，總回收卵608枚，受精卵502枚，受精率82.57%，二者差異顯著（p＜0.05）。

3 討論與結(jié)論

3.1 使用硒-VE對(duì)胚移供體母羊排卵的影響

影響母羊同期發(fā)情排卵的因素很多，遺傳因素可能是最主要因素，不同品種羊的同期發(fā)情率差異較大，同一品種的同期發(fā)情主要受環(huán)境因素、激素水平和飼養(yǎng)管理等的影響[5-6]。在本試驗(yàn)中，使用硒-VE組供體母羊排卵率極顯著高于不使用該注射液的，說(shuō)明硒-VE對(duì)母羊卵巢和卵泡發(fā)育有著明顯的影響，可能是由于硒和VE不僅提供了供體母羊作為營(yíng)養(yǎng)所必需的微量元素、維生素，還影響到多種繁殖激素水平，進(jìn)而影響了受體羊的排卵效果[7]。

3.2 輸精部位和方法對(duì)供體母羊排卵受精率的影響

內(nèi)窺鏡子宮角輸精與子宮頸口輸精相比，輸精次數(shù)只有1次，而子宮頸口輸精2～3次；在同等密度和活力的條件下，子宮角輸精的精液量比陰道子宮頸口輸精少；由于精液被直接輸入子宮角內(nèi)，沒(méi)有了精子通過(guò)子宮頸管特殊構(gòu)造阻攔因素而減少輸入精子，減少了精子在子宮內(nèi)的運(yùn)行距離和時(shí)間，縮短精子與卵子相遇距離和時(shí)間，促進(jìn)和提高了精卵結(jié)合[8]，所以母羊卵子受胎率顯著高于子宮頸口輸精。內(nèi)窺鏡人工輸精法節(jié)省了公羊；雖然操作麻煩一點(diǎn)，但輸精次數(shù)減少，減少了工作量。

3.3 結(jié)論

在其他條件相同的情況下，使用硒-VE對(duì)提高薩?？斯w母羊的超數(shù)排卵數(shù)量和胚胎發(fā)育有顯著的效果，值得在生產(chǎn)中應(yīng)用推廣；使用內(nèi)窺鏡人工輸精法供體母羊的卵子受精率顯著高于常規(guī)子宮頸口人工輸精法，在生產(chǎn)中也值得提倡。

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陜西省科技統(tǒng)籌創(chuàng)新工程計(jì)劃項(xiàng)目資助（2014KTDZ02-01-01）。

李愛(ài)朵（1976-），女，陜西省神木縣人，畜牧師，主要從事畜牧技術(shù)推廣。

*通訊作者：李新春（1953-），男，陜西省佳縣人，教授，主要從事養(yǎng)羊技術(shù)教學(xué)與科研推廣工作。