吳 波，蔣武毅，段龍川，羅厚強(qiáng)

（1.溫州市動物疫病預(yù)防控制中心，浙江溫州 325000；2.溫州市農(nóng)產(chǎn)品檢驗測試中心，浙江 溫州 325000；3.溫州科技職業(yè)學(xué)院 動科系，浙江 溫州 325006）

頭孢喹諾與恩諾沙星聯(lián)合用藥對黃羽肉雞人工誘發(fā)常見細(xì)菌病的療效觀察

吳 波1，蔣武毅2，段龍川3，羅厚強(qiáng)3

（1.溫州市動物疫病預(yù)防控制中心，浙江溫州 325000；2.溫州市農(nóng)產(chǎn)品檢驗測試中心，浙江 溫州 325000；3.溫州科技職業(yè)學(xué)院 動科系，浙江 溫州 325006）

為了掌握頭孢喹諾與恩諾沙星聯(lián)合用藥對黃羽肉雞人工誘發(fā)感染大腸桿菌、沙門氏菌和禽多殺性巴氏桿菌的治療效果，采用頭孢喹諾和恩諾沙星分別以0.25 mg·kg-1（皮下注射）和100 mg·L-1（飲水）劑量聯(lián)合給藥，并與2種藥物以臨床劑量單用做對比。結(jié)果表明，頭孢喹諾和恩諾沙星以低劑量聯(lián)合用藥的治療效果顯著優(yōu)于頭孢喹諾臨床用藥劑量單用，極其顯著優(yōu)于恩諾沙星臨床用藥劑量單用。

頭孢喹諾；恩諾沙星；雞；細(xì)菌病

目前，家禽飼養(yǎng)過程中很多病毒性疾病得到了控制，但細(xì)菌性疾病卻越來越嚴(yán)重，如大腸桿菌病、雞白痢、雞霍亂、雞慢性呼吸道病、雞傳染性鼻炎等，臨床上容易導(dǎo)致雞發(fā)病的細(xì)菌主要有大腸桿菌、沙門氏菌和禽多殺性巴氏桿菌［1］這幾種病，特別是巴氏桿菌病，令不少養(yǎng)殖戶感到頭痛。用藥時有好轉(zhuǎn)，暫停死亡，停藥2 d后，病程又出現(xiàn)反復(fù)，死亡增加，難以根治。其原因可能由于未能對癥治療，部分藥物使用頻繁且配伍不科學(xué)，使細(xì)菌產(chǎn)生很強(qiáng)的耐藥性，這幾種病常給養(yǎng)殖戶造成很大的經(jīng)濟(jì)損失，如何在較短時間內(nèi)通過臨床和實驗室檢測，并且及時提出治療措施，對減少養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟(jì)損失起著至關(guān)重要的作用。

恩諾沙星（Enrofloxacin，EF）是廣泛應(yīng)用于畜禽養(yǎng)殖業(yè)中的第3代喹諾酮類抗菌藥，主要用于治療畜禽細(xì)菌性疾病和支原體感染［2］，作為動物專用抗菌藥物，具有抗菌譜廣、殺菌活性強(qiáng)、與其他抗菌藥物無交叉耐藥性等特點，已備受獸醫(yī)界重視［3］。頭孢喹諾作為動物專用第四代頭孢菌素類抗生素，對大多數(shù)革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌都有很強(qiáng)的殺滅作用，并且不易產(chǎn)生耐藥性，在可食用組織中殘留較少，安全性較高［4］。已有研究表明2種藥物聯(lián)用對雞大腸桿菌的體外抑菌試驗有較好的協(xié)同作用［5］，但是對黃羽肉雞人工誘發(fā)大腸桿菌、沙門氏菌和禽多殺性巴氏桿菌混合感染的療效研究尚未見報道。

1 材料和方法

1.1 材料

供試藥品。硫酸頭孢喹諾，商品名克百特，含量2.5%，生產(chǎn)批號為120801，購自于江蘇倍康藥業(yè)有限公司。乳酸恩諾沙星，由浙江國邦藥業(yè)有限公司提供，批號121108-1，含量99.5%。

受試菌株。大腸桿菌 （ATCC25922）、沙門氏菌 （ATCC14028）、禽多殺性巴氏桿菌（ATC12948）購自杭州天和微生物試劑有限公司。

培養(yǎng)基。肉湯培養(yǎng)基，MuellerHinton（簡稱MH）培養(yǎng)基，血清 MH肉湯培養(yǎng)基。固體培養(yǎng)基，血清瓊脂培養(yǎng)基、鮮血瓊脂培養(yǎng)基、普通瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基。上述各種培養(yǎng)基均按常規(guī)方法制備，并置于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

實驗動物。50日齡黃羽肉雞140羽，體重（1.45±0.2）kg，雌雄各半，試驗前確保沒有使用頭孢菌素類和喹諾酮類藥物。

1.2 方法

1.2.1 誘發(fā)感染

挑取特征性菌落先接種血平板，置37℃過夜培養(yǎng)，次日挑選單個菌落1～2個接種于5 m L培養(yǎng)基 （加5%血清）中，37℃培養(yǎng)18 h。2～7組試驗雞胸肌注射大腸桿菌、沙門氏菌和禽多殺性巴氏桿菌混合培養(yǎng)液0.3 m L（約含105活菌）。

1.2.2 給藥

試驗前精密稱取硫酸頭孢喹諾和乳酸恩諾沙星，無菌操作配制成工作濃度，人工誘發(fā)感染12 h后給藥。硫酸頭孢喹諾皮下注射，每日2次，連續(xù)給藥3 d后停藥；乳酸恩諾沙星在飲水中予以添加，每日2次，連續(xù)給藥5 d后停藥。

1.2.3 動物分組及處理

第1組為健康對照組，實驗動物不誘發(fā)感染，不給藥；第2組為感染對照組，實驗動物誘發(fā)感染，不給藥；第3組至第6組為藥物對照組，第7組為頭孢喹諾和恩諾沙星聯(lián)用試驗組 （表1）。

表1 實驗動物分組及處理

1.2.4 臨床觀察與實驗室鑒定

停藥后連續(xù)觀察10 d，每天記錄誘發(fā)感染前后觀察實驗動物臨床癥狀，對病死動物剖檢做細(xì)菌分離培養(yǎng)鑒定。

1.3 藥效評價

1.3.1 死亡率

在試驗期間，出現(xiàn)典型癥狀并死亡，尸體剖檢心臟、肝臟有典型的病變特征，判定為誘發(fā)感染引起死亡。根據(jù)死亡實驗動物數(shù)計算死亡率。

1.3.2 治愈率

在試驗期間，實驗動物經(jīng)給藥后，精神狀態(tài)、食欲等恢復(fù)正常，均屬治愈。根據(jù)治愈數(shù)占整個試驗動物總數(shù)計算治愈率。

1.3.3 有效率

在試驗期間，治愈的和沒有死亡但有臨床癥狀表現(xiàn)的實驗動物均為 “有效”；試驗結(jié)束時每組存活的數(shù)量占試驗動物總數(shù)的比率為有效率。

1.3.4 相對增重率

根據(jù)試驗開始及結(jié)束時每只實驗動物的體重，計算增重量及每組實驗動物的平均增重，并以健康對照組增重為100%，各組增重與之相比得各組相對增重量。

2 結(jié)果和分析

2.1 臨床觀察

人工誘發(fā)感染各組陸續(xù)出現(xiàn)不同程度的臨床癥狀。主要表現(xiàn)為精神萎靡、臥地昏睡或呆立，反應(yīng)遲鈍，食欲減退或廢絕。部分動物排泄白色帶綠糞便，呼吸不暢，發(fā)出咕嚕聲。雞冠和肉髯發(fā)紺呈黑紫色，肉髯常發(fā)生水腫。

剖檢死亡動物，發(fā)現(xiàn)其心包積液，皮下組織和腹腔中的脂肪、腸系膜有大小不等的出血點，胸腔、腹腔、氣囊和腸漿膜上常見纖維素性或干酪樣灰白色的滲出物。肝臟的病變較為明顯，表現(xiàn)為腫大、質(zhì)脆，呈棕紅色、棕黃色或紫紅色，表面有很多針頭帽大小或小米粒大小的灰白色或灰黃色的壞死點，部分可見點狀出血。

2.2 實驗室鑒定

革蘭氏染色陰性，培養(yǎng)物在麥康凱培養(yǎng)基上生長成紅色菌落，37～40℃下能發(fā)酵葡萄糖、乳糖，并產(chǎn)酸產(chǎn)氣。吲哚試驗和M.R試驗為陽性。

2.3 臨床藥效

頭孢喹諾與恩諾沙星聯(lián)合用藥對黃羽肉雞人工誘發(fā)常見細(xì)菌病的臨床藥效見表2。結(jié)果表明，各組實驗動物發(fā)病情況有明顯差異。感染對照組實驗動物死亡率較高，相對增重率低。經(jīng)頭孢喹諾和恩諾沙星單用或者聯(lián)用治療后，與感染對照組比較，能較為迅速減輕臨床癥狀，降低死亡率。頭孢喹諾臨床用量對照組與2藥聯(lián)用試驗組的各項評價指標(biāo)差異不大，后者治療效果略好。恩諾沙星臨床用量對照組死亡率和治愈率明顯低于2聯(lián)用試驗組，與頭孢喹諾低劑量對照組接近。2藥聯(lián)用試驗組在低劑量聯(lián)合使用時，對發(fā)病動物的治愈效果以及相對增重率 （90.58%）顯著優(yōu)于頭孢喹諾臨床用量對照組 （P＜0.05）；與其他對照組相比，各項評價指標(biāo)差異則極其顯著。

表2 頭孢喹諾與恩諾沙星聯(lián)合用藥對黃羽肉雞人工誘發(fā)常見細(xì)菌病的臨床藥效

3 小結(jié)和討論

實踐過程中會遇到人工誘發(fā)感染過重或過輕的情況，在評價藥效試驗中，人工接種細(xì)菌，復(fù)制適應(yīng)癥病例，是非常重要的步驟。根據(jù)細(xì)菌的增殖及致病力規(guī)律，認(rèn)為37℃培養(yǎng)16～18 h，細(xì)菌致病力最強(qiáng)［6］。再經(jīng)試驗確定適宜接種量，以誘發(fā)適應(yīng)癥［7］。因灌胃接種個體差異較大，本試驗采用胸肌注射細(xì)菌培養(yǎng)液。

隨著抗菌藥物使用的日益泛濫，細(xì)菌耐藥性問題已經(jīng)嚴(yán)重影響了抗生素類藥物的治療效果。有研究表明，氟喹諾酮類藥物在臨床上應(yīng)用最為廣泛且同類藥物之間存在交叉耐藥性，因此恩諾沙星等作為非常有效的抗菌藥物，已有相當(dāng)程度的耐藥性。從試驗結(jié)果可以顯示，其臨床用藥效果要弱于頭孢喹諾。頭孢喹諾作為較新的抗菌藥，相對于第3代頭孢菌素類抗菌藥頭孢噻呋鈉，對大部分耐藥菌仍具有較好的活性；其對細(xì)菌染色體和質(zhì)粒編碼的β-內(nèi)酰胺酶高度穩(wěn)定［8］，使得細(xì)菌不易產(chǎn)生耐藥性。頭孢喹諾和恩諾沙星抗菌機(jī)理不一樣，可以從不同途徑抑制并且殺死細(xì)菌，起到協(xié)同作用［5］。兩者聯(lián)用時的藥物濃度在臨床用藥量約1/4的情況下，治療效果還要優(yōu)于臨床用藥對照組。頭孢喹諾和恩諾沙星適當(dāng)?shù)呐湮橛盟幉坏艽蟠鬁p少用藥量，解決獸藥殘留問題，而且能較為有效地控制病情，一定程度上緩解耐藥菌泛濫的趨勢。

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（責(zé)任編輯：盧福莊）

S 858.31；R 969.3

A

0528-9017（2015）04-0565-03

10.16178/j.issn.0528-9017.20150438

2014-12-10

溫州市科技計劃項目 （2013N0010）

吳 波 （1981-），男，浙江溫州人，獸醫(yī)師，碩士，主要從事動物疫病綜合防控工作。E-mail：cris414727@126.com。

文獻(xiàn)著錄格式：吳波，蔣武毅，段龍川，等.頭孢喹諾與恩諾沙星聯(lián)合用藥對黃羽肉雞人工誘發(fā)常見細(xì)菌病的療效觀察 ［J］.浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，56（4）：565-567.