劉夢杰，佟繼銘，宋素英，萬慧杰，盧 寧，張樹峰△

（1.河北省中藥研究與開發(fā)重點實驗室/承德醫(yī)學院中藥研究所，河北承德 067000；2.河北聯(lián)合大學中醫(yī)學院）

大黃對雌性幼年大鼠血清GnRH、LH、FSH、P、E2水平的影響*

劉夢杰1，佟繼銘1，宋素英2，萬慧杰1，盧 寧1，張樹峰1△

（1.河北省中藥研究與開發(fā)重點實驗室/承德醫(yī)學院中藥研究所，河北承德 067000；2.河北聯(lián)合大學中醫(yī)學院）

目的：觀察大黃水提物對雌性幼年大鼠血清促性腺激素釋放激素（GnRH）、黃體生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）、孕酮（P）、雌二醇（E2）水平的影響。方法：4周齡雌性SD大鼠20只，隨機分為正常對照組和大黃水提物2.0g/kg組，每組10只，連續(xù)灌胃給藥30天。采用ELISA法檢測各組大鼠血清GnRH、LH、FSH、P、E2的水平。結(jié)果：與正常對照組大鼠比較，大黃水提物2.0g/kg組大鼠GnRH、P、E2激素水平明顯降低（P＜0.05），LH、FSH激素水平明顯升高（P＜0.05）。結(jié)論：大黃水提物可明顯影響雌性幼年大鼠下丘腦-垂體-卵巢軸的激素水平。

大黃水提物；雌性幼年大鼠；GnRH；LH；FSH；P；E2

大黃是一種多年生草本植物，自古為臨床常用藥，又稱為黃良、川軍、火參、綿紋等［1］。現(xiàn)代醫(yī)學研究證明，大黃具有抑菌、止血、降血壓、涼血解毒、利濕退黃等功效［2］。美國學者諾爾曼?泰勒的《改變世界的植物》一書將大黃列為“有全球影響”的十幾種藥物之一［3］。隨著研究的深入與廣泛，研究發(fā)現(xiàn)大黃具有嚴重的胃腸道反應、免疫抑制、生殖系統(tǒng)毒性等毒副作用，進而大黃的毒理學研究引起學者的廣泛重視［4］。有報道稱，大黃可使金黃地鼠、小鼠生精小管上皮細胞層斷裂脫落，大鼠及金黃地鼠性器官萎縮［5-6］。本課題組的前期研究亦發(fā)現(xiàn)，長期灌胃大黃提取物，對雌性和雄性大鼠的生殖系統(tǒng)均可造成不同程度的損害［7-8］。另有文獻記載，不同周齡大鼠對大黃的耐受性不同，大黃的不良反應與大鼠的周齡有關(guān)［9］。本研究在前期研究的基礎(chǔ)上，給予4周齡雌性SD大鼠長期灌胃大黃水提取物，檢測大鼠血清中促性腺激素釋放激素（GnRH）、黃體生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）、孕酮（P）、雌二醇（E2）的變化情況，以期為今后大黃的臨床用藥提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥 大黃（Rheum palmatum L），安國市長安中藥材有限公司，批號：20090902，經(jīng)承德醫(yī)學院中藥研究所劉翠哲研究員鑒定為掌葉大黃的干燥根莖；大鼠GnRH、LH、FSH、P、E2、ELISA試劑盒，購自上海索寶生物科技有限公司。Multiskan MK3酶標儀，美國Thermo。

1.2 大黃水提取物的制備 大黃藥材粉碎為粗粉，10倍水浸泡2h，合并提取液，過濾，40℃減壓濃縮至生藥量含量為0.4g/ml備用。

1.3 實驗動物分組及處理 4周齡雌性SD大鼠20只，SPF級，購自北京華阜康生物科技股份有限公司，許可證號：SCXK（京）2009-0004。大鼠隨機分為正常對照組、大黃水提物2.0g/kg組，每組10只，大黃水提物組大鼠連續(xù)灌胃給藥30d。

1.4 指標檢測 各組大鼠于給藥結(jié)束后第2天腹主動脈采血，3500r/min離心10min取血清，-20℃冰箱保存，采用ELISA法檢測大鼠GnRH、LH、FSH、E2、P的水平。

1.5 統(tǒng)計分析 應用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計分析，組間計量資料的比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

與正常對照組大鼠比較，大黃水提物2.0g/kg組大鼠各激素水平都有所變化，其中GnRH、P、E2激素水平明顯降低（P＜0.05），LH、FSH激素水平明顯升高（P＜0.05）。見附表：

附表 大黃對雌性幼年大鼠血清GnRH、LH、FSH、P、E2水平的影響（±s，n=10）

附表 大黃對雌性幼年大鼠血清GnRH、LH、FSH、P、E2水平的影響（±s，n=10）

指標 　　正常組 　　大黃水提物組（2.0g/kg） 　P GnRH（ng/L） 　19.78±1.08 　18.56±0.20 　?。?.05 LH（ng/L） 　1254.44±17.57 　1280.83±19.42 　?。?.05 FSH（IU/L） 　5.67±0.05 　5.78±0.08 　?。?.05 P（ng/L） 　731.0±30.06 　693.5±12.02 　?。?.05 E2（ng/L） 　32.49±0.32 　31.31±0.74 　?。?.05

3 討論

下丘腦-垂體-卵巢軸（HPO）是一個完整的神經(jīng)內(nèi)分泌軸，三個組分相互調(diào)節(jié)和制約，表現(xiàn)為女性正常的月經(jīng)周期、生殖器官形態(tài)與功能的周期性變化。下丘腦弓狀核神經(jīng)內(nèi)分泌細胞分泌的GnRH以脈沖式釋放到垂體前葉，與垂體前葉的促性腺激素細胞表面的受體結(jié)合，刺激FSH和LH的分泌，進而通過血液循環(huán)到達卵巢，調(diào)節(jié)E2與P的分泌水平以及卵子的生成［10］。FSH、LH是由腺垂體分泌的具有調(diào)節(jié)作用的糖蛋白，可促進卵泡的成熟［11］。卵巢主要分泌雌激素和孕激素，雌激素中以E2的活性最強，可協(xié)同F(xiàn)SH促進卵泡的發(fā)育并誘導LH峰的出現(xiàn)從而排卵，還可促進子宮的發(fā)育使子宮內(nèi)膜發(fā)生周期性變化；孕激素主要為P，具有調(diào)節(jié)腺垂體激素分泌并在排卵前協(xié)同雌激素誘發(fā)LH分泌出現(xiàn)高峰，影響生殖器官的生長發(fā)育等功能。因此，各激素的正常分泌是生殖功能正常的主要因素，下丘腦分泌的GnRH對垂體分泌的FSH、LH有正反饋調(diào)節(jié)作用，同時，F(xiàn)SH、LH也受E2、P的負反饋調(diào)節(jié)。

本研究結(jié)果顯示，與正常對照組比較，大黃水提物2.0g/kg組大鼠血清GnRH、E2、P激素水平降低，F(xiàn)SH、LH激素水平升高。本課題組的前期研究已經(jīng)證明，大黃水提物可致卵巢萎縮，各級卵泡數(shù)減少等［7］。結(jié)合本研究結(jié)果，推斷大黃水提物致卵巢病變可能是由于其干擾生殖內(nèi)分泌的激素水平，使激素分泌紊亂所致。而本研究結(jié)果顯示的大黃致HPO軸內(nèi)分泌激素的紊亂，考慮是為保持HPO軸激素平衡由反饋調(diào)節(jié)所致，但具體是否為組織本身病變而導致激素水平的變化，還需進一步對組織進行病理觀察。

綜上所述，長期應用大黃水提物可影響大鼠HPO軸激素水平，本研究可為今后大黃的臨床安全用藥提供依據(jù)。

［1］郭鵬，張鐵軍，朱雪喻，等.大黃毒性的現(xiàn)代研究與減毒對策［J］.中藥草，2009，40（10）：1671-1674.

［2］金蘭.大黃的藥理作用及臨床應用進展［J］.中國醫(yī)藥指南，2013，11（11）：487-488.

［3］王清秀，吳純啟，廖明陽.大黃及其主要成分的毒性毒理研究［J］.毒理學雜志，2007，21（4）：301-302.

［4］趙軍寧，王曉東.大黃毒理學研究進展［J］.中醫(yī)藥學報，1990，（5）：48-50.

［5］苗明三，王燦.中藥對生殖系統(tǒng)毒性的研究分析［J］.時珍國醫(yī)國藥，2008，19（2）：284-285.

［6］沈丕安.中藥不良反應與臨床［M］.第1版.上海：第二軍醫(yī)大學出版社，2007.275-276.

［7］盧寧，張樹峰，佟繼銘.大黃水提物對成年大鼠子宮及卵巢的影響［J］.中國實驗方劑學雜志，2013，19（21）：258-261.

［8］胡曉丞，李亞洲，佟繼銘，等.大黃提取物對成年大鼠睪丸的毒性作用［J］.中國藥理學與毒理學雜志，2012，26（5）：658-663.

［9］王紅娟.不同年齡大鼠對大黃的耐受性差異及其在兒科合理用藥的意義［D］.北京：北京中醫(yī)藥大學，2009.

［10］魏鎖成，鞏轉(zhuǎn)娣，歐陽霞輝，等.GnRH激動劑主動免疫母羊?qū)ι臣に氐淖饔茫跩］.中國免疫學雜志，2012，28（2）：132-136.

［11］吳端宗，林國誠.ELISA測定血清LH、FSH的方法學評價［J］.現(xiàn)代檢驗醫(yī)學雜志，2002，17（2）：15-16.

INFLUENCES OF RHUBARB ON GNRH， LH， FSH， P AND E2LEVEL IN SERUM OF YOUNG FEMALE RATS

LIU Meng-jie， TONG Ji-ming， SONG Su-ying， et al

（Hebei Key Laboratory of Research and Exploitation of Traditional Chinese Medicine/ Institute of Chinese Materia Medica，Chengde Medical College， Hebei Chengde 067000， China）

Objective： To observe the infl uences of aqueous extract of Rhubarb on gonadotrophin releasing hormone （GnRH）， luteinizing hormone （LH）， follicle-stimulating hormone （FSH）， progesterone （P） and estradiol （E2） level in serum of young female rats. Methods：20 4-week female SD rats were randomly divided into normal control group and Rhubarb aqueous extract （2.0g/kg） group， with 10 rats in each group. The GnRH， LH， FSH， P and E2level in serum of rats were detected by ELISA after the rats were lavaged with Rhubarb aqueous extract for 30-day. Results： Compared with rats in normal control group， the GnRH， P and E2level in serum of rats in Rhubarb aqueous extract group decreased obviously （P＜0.05）； LH and FSH level increased obviously （P＜0.05）.Conclusions： Rhubarb aqueous extract can infl uence the hormone level of hypothalamic-hypophyscal-ovarian axis of young female rats obviously.

Aqueous extract of Rhubarb； Young female rats ； Gonadotrophin releasing hormone （GnRH）； Luteinizing hormone （LH）； Follicle-stimulating hormone （FSH）； Progesterone （P）； Estradiol （E2）

R285.5

A

1004-6879（2015）02-0102-03

2014-09-26）

* 河北省教育廳重大項目（2009301）