徐麗芳， 陶建偉， 沈文婧

（上海應(yīng)用技術(shù)學(xué)院化學(xué)與環(huán)境工程學(xué)院，上海 201418）

釔增敏氧氟沙星熒光的研究及分析應(yīng)用

徐麗芳， 陶建偉， 沈文婧

（上海應(yīng)用技術(shù)學(xué)院化學(xué)與環(huán)境工程學(xué)院，上海 201418）

研究了在p H為6.7的醋酸-醋酸鈉介質(zhì)中，釔（Ⅲ）與氧氟沙星形成的配合物的熒光特性，并建立了測定氧氟沙星的熒光光度新方法.結(jié)果表明：在常溫下，激發(fā)狹縫為10 nm，發(fā)射狹縫為5 nm，熒光激發(fā)波長為292.0 nm，發(fā)射波長為470.9 nm處，釔（Ⅲ）與氧氟沙星形成的二元配合物有靈敏的熒光發(fā)射峰；氧氟沙星在6.0×10-2～1.0μmol／L范圍內(nèi)與體系的熒光強(qiáng)度呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.999 3，該方法的檢出限為1.6 nmol／L.本方法操作簡單、靈敏度高，用于氧氟沙星片劑的分析，結(jié)果令人滿意.

氧氟沙星；釔；熒光光度法；熒光強(qiáng)度

氧氟沙星（Ofloxacin）又名氟嗪酸（結(jié)構(gòu)式見圖1），是第三代氟喹諾酮類藥物，具有抗菌譜廣和抗菌活性強(qiáng)的特點(diǎn)，在臨床上主要用于尿路感染、腸管感染、呼吸道感染、肺炎、耳鼻咽喉感染、皮膚軟組織感染、膽管感染、婦科感染、前列腺炎以及傷寒等治療.分析氧氟沙星的常用方法有高效液相色譜法［1-3］、紫外可見分光光度法［4-6］，也有電位滴定法［7］和化學(xué)發(fā)光法［8］.其中，紫外可見分光光度法雖然儀器價(jià)廉、操作簡便，但其溶液的吸光度易受溶劑極性、溶液p H和溫度等因素的影響；電位滴定法對電極穩(wěn)定性要求較高；高效液相色譜法雖然選擇性較好、準(zhǔn)確性高，但其流動相通常是有毒溶劑，不利于環(huán)保.從利用熒光性質(zhì)測定氧氟沙星的文獻(xiàn)報(bào)道［9-11］可知，熒光分光光度法大多在水溶劑中進(jìn)行，且其靈敏度高、穩(wěn)定性好.本文研究了釔離子與氧氟沙星形成的二元配合物的熒光性質(zhì)，建立了一個(gè)測定氧氟沙星含量的新方法，本方法靈敏度高、無毒、簡便、快速.

圖1 氧氟沙星結(jié)構(gòu)式Fig.1 Structure of ofloxacin

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Cary Eclipse熒光分光光度儀（美國瓦里安）；PHS-3D型p H計(jì)（上海三信儀表廠）；Waters高效液相色譜儀（515泵、2487UV檢測器）；M2P微量分析天平（德國賽多利斯）.

氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)溶液（對照品由中國藥品生物制品鑒定所提供）：準(zhǔn)確稱取一定量氧氟沙星對照品，配制為2.0 mmol／L的儲備液；0.01 mol／L釔（Ⅲ）儲備液：準(zhǔn)確稱取一定量優(yōu)級純氧化釔于小燒杯中，加入適量2 mol／L鹽酸，在通風(fēng)櫥內(nèi)加熱使之溶解完全，蒸發(fā)至近干，冷卻后將溶液全部移入100 m L容量瓶內(nèi)，用去離子水稀釋至刻度，搖勻，臨用時(shí)用去離子水稀釋至所需濃度；p H為6.7的醋酸-醋酸鈉溶液；鹽酸左氧氟沙星片（山東羅欣藥業(yè)股份有限公司，0.1 g／粒，批號：090106）；鹽酸左氧氟沙星片（上海天賜福生物工程有限公司，0.1 g／粒，批號：081101）；實(shí)驗(yàn)用水均為去離子水.

1.2 方法

在10 m L具塞比色管中加入一定量氧氟沙星溶液，2 mmol／L釔（Ⅲ）溶液1.0 m L、p H為6.7的醋酸-醋酸鈉溶液1.0 m L，并用去離子水稀釋至刻度，搖勻，放置15 min.在室溫下，用1 cm石英比色皿，設(shè)置激發(fā)狹縫為10 nm，發(fā)射狹縫為5 nm，于激發(fā)波長為292.0 nm、發(fā)射波長為470.9 nm處，以含釔（Ⅲ）溶液的試劑參比，用分光光度計(jì)測定釔（Ⅲ）和氧氟沙星二元配合物的熒光強(qiáng)度.

2 結(jié)果與討論

2.1 熒光光譜的條件選擇

2.1.1 熒光體系的選擇

按實(shí)驗(yàn)方法配制釔（Ⅲ）和氧氟沙星二元配合物體系，對體系進(jìn)行激發(fā)波長和熒光波長的掃描.另取2支10 m L具塞比色管，1支只加1 mmol／L釔（Ⅲ）工作液，另1支只加氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)溶液，并進(jìn)行激發(fā)波長和熒光波長的掃描.3個(gè)體系掃描所得熒光激發(fā)和發(fā)射光譜如圖2所示.

圖2 熒光激發(fā)和發(fā)射光譜Fig.2 Fluorescence excitation and emission spectra

由圖2可知，釔（Ⅲ）在470.9 nm處無熒光發(fā)射，而釔（Ⅲ）與氧氟沙星組成的二元配合物與氧氟沙星單體在292.0 nm激發(fā)波長和470.9 nm發(fā)射波長處的峰型及其出峰位置基本相符，且二元配合物的熒光強(qiáng)度明顯高于氧氟沙星單體.可見釔對氧氟沙星熒光有明顯的增敏作用.發(fā)光機(jī)理可能是由于氧氟沙星上的羰基和羧酸基團(tuán)與Y3+結(jié)合形成一個(gè)六圓環(huán)，使配合物的平面結(jié)構(gòu)更加穩(wěn)定，提高了體系的熒光強(qiáng)度.配合物結(jié)構(gòu)推測如圖3所示.

圖3 配合物結(jié)構(gòu)Fig.3 Structure of complex

2.1.2 激發(fā)狹縫和熒光發(fā)射狹縫的選擇

通過對激發(fā)狹縫和熒光發(fā)射狹縫的寬度選擇試驗(yàn)得到，當(dāng)激發(fā)狹縫為10 nm、發(fā)射狹縫為5 nm時(shí)，釔（Ⅲ）和氧氟沙星二元體系的熒光強(qiáng)度最大.

2.2 不同p H值醋酸-醋酸鈉對熒光強(qiáng)度的影響

按試驗(yàn)方法配制二元配合物，僅改變醋酸-醋酸鈉介質(zhì)的p H值.測定二元配合物熒光強(qiáng)度，p H值與熒光強(qiáng)度關(guān)系曲線如圖4所示.由圖可知，醋酸-醋酸鈉溶液p H值為6.4～7.0時(shí)，二元配合物的熒光強(qiáng)度基本保持不變.

圖4 p H值對熒光強(qiáng)度的影響Fig.4 Effect of p H on fluorescence intensity

取p H值為6.7的醋酸-醋酸鈉進(jìn)行用量試驗(yàn)，得緩沖溶液用量為1.0 m L時(shí)最佳，如圖5所示.

圖5 緩沖溶液用量對熒光強(qiáng)度的影響Fig.5 Effect of the concentration of buffer solution on fluorescence intensity

2.3 釔（Ⅲ）用量的影響

釔（Ⅲ）離子濃度對體系熒光強(qiáng)度的影響如圖6所示.由圖可見，當(dāng)釔（Ⅲ）的物質(zhì)的量為2 mmol／L，用量在0.80～2.00 m L范圍內(nèi)，釔（Ⅲ）與氧氟沙星的配合物熒光強(qiáng)度穩(wěn)定.取2 mmol／L的釔（Ⅲ）溶液1 m L.

2.4 反應(yīng)時(shí)間和溫度的影響

每隔一定時(shí)間測定釔（Ⅲ）與氧氟沙星配合物體系的熒光強(qiáng)度.結(jié)果顯示，當(dāng)配合物形成10 min后，反應(yīng)達(dá)到平衡，熒光強(qiáng)度穩(wěn)定，室溫下可穩(wěn)定6 h.本試驗(yàn)在反應(yīng)15 min后測定熒光強(qiáng)度，結(jié)果如圖7所示.

圖6 釔（Ⅲ）用量對熒光強(qiáng)度的影響Fig.6 Effect of the concentration of buffer solution on fluorescence intensity

圖7 反應(yīng)時(shí)間對熒光強(qiáng)度的影響Fig.7 Effect of reaction time on fluorescence intensity

考察了釔（Ⅲ）與氧氟沙星配合物在20、30、40、50、60°C恒溫15 min的熒光強(qiáng)度，如圖8所示.結(jié)果顯示，在室溫（20°C）時(shí)，釔（Ⅲ）與氧氟沙星配合物的熒光強(qiáng)度明顯好于體系在30、40、50、60°C水浴加熱后的熒光強(qiáng)度.可見二元配合物的穩(wěn)定性隨著溫度的升高而下降.反應(yīng)的溫度取室溫.

圖8 反應(yīng)溫度對熒光強(qiáng)度的影響Fig.8 Effect of reaction temperature on fluorescence intensity

2.5 工作曲線、線性范圍和檢出限的測定

在上述最優(yōu)條件下，改變氧氟沙星的濃度，得本文方法的線性回歸方程為F=7.704×108c-1.072，r=0.999 3.氧氟沙星的線性范圍為6.0× 10-2～1.0μmol／L.以3.3倍信噪比計(jì)算，測得本方法的檢測限為1.6 nmol／L.

2.6 樣品分析

2.6.1 樣品的處理

隨機(jī)取不同批號鹽酸左氧氟沙星片劑10粒，準(zhǔn)確稱取其總質(zhì)量，研細(xì)混勻，然后準(zhǔn)確稱取總質(zhì)量的1／50，倒入100 m L容量瓶，加入適量去離子水及數(shù)滴0.5%NaOH溶液，超聲儀處理3 min后，用去離子水稀釋至刻度并搖勻.如有沉淀則用干燥中速濾紙過濾，濾液的前4～5 m L棄去，剩余濾液用干燥的容量瓶保存，作為儲備液.測定時(shí)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍取一定量稀釋.

2.6.2 樣品的測定

取樣品測定液，分別以本法和藥典法［12］進(jìn)行測定，結(jié)果如表1所示.查統(tǒng)計(jì)表得到在置信度為95%的情況下，t=2.57，F(xiàn)=5.05，由表1樣品測定結(jié)果可見，2個(gè)樣品的t和F檢驗(yàn)值均小于該臨界值，說明本法與藥典法無顯著差別.

表1 樣品的測定結(jié)果（n=6）Tab.1 Determination results of samples（n=6）

2.6.3 樣品的測定及回收率試驗(yàn)

對鹽酸左氧氟沙星片劑進(jìn)行重復(fù)6次的加標(biāo)法回收率試驗(yàn)，表明用本方法所得回收率為97.3%～106.5%，平均回收率為102.3%和103.4%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.5%和2.2%.

3 結(jié) 語

本文建立了在常溫、水溶液中用熒光分光光度法測定氧氟沙星含量的新方法.本方法操作簡單、靈敏度高、穩(wěn)定性好，為測定微量乃至痕量氧氟沙星提供了一個(gè)新的途徑.

［1］ 劉自揚(yáng)，董玲玲，范強(qiáng)，等.HPLC-PDAD法檢測3種中獸藥散劑中違規(guī)添加4種喹諾酮類藥物的研究［J］.中國獸藥雜志，2014，48（4）：29-31.

［2］ Huet A-C，Charlier C，Tittlemier S A，et al.Simultaneous determination of（fluoro）quinolone antibiotics in kidney，marine products，eggs，and muscle by enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）［J］. Journal of Agricultural and Food Chemistry，2006，54（8）：2822-2827.

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［8］ 周娟，楊華松，呂簽泉，等.魯米諾-鐵氰化鉀化學(xué)發(fā)光體系測定氧氟沙星［J］.光譜實(shí)驗(yàn)室，2012，29（4）：2132-2134.

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［11］ 吳國娟，吳敏，韓雪嬌，等.熒光猝滅法研究氧氟沙星與Cu2+的絡(luò)合［J］.化學(xué)通報(bào)，2013，76（11）：1045-1048.

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（編輯 呂丹）

Research and Application of Yttrium Sensitized Fluorescence Spectroscopy of Ofloxacin

XU Lifang， TAO Jianwei， SHEN Wenjing
（School of Chemical and Environmental Engineering，Shanghai Institute of Technology，Shanghai 201418，China）

The fluorescence characteristics formed by yttrium（Ⅲ）and ofloxacin complexes were investigated with acetic acida-sodium acetic acid buffer solution（p H=6.7）.The results showed that the ofloxacin binary complexes fluorescence had a sensitive fluorescence emission peak when excitation wavelength 292.0 nm and emission wavelength 470.9 nm，the excitation slit 10 nm and emission slit 5 nm at normal temperature.The linear range of the complex system was 6.0×10-2to 1.0μmol／L and the correlation coefficient was 0.999 3.The detection limit was 1.6 nmol／L.The method is easy to operate，with high sensitivity，and is proved to be satisfactory for its application into the determination of ofloxacin drug in tablets.

ofloxacin；yttrium；fluorescence spectroscopy；fluorescence intensity

O 657.3

A

1671-7333（2015）04-0333-04

10.3969／j.issn.1671-7333.2015.04.004

2015-03-31

徐麗芳（1961-），女，講師，主要研究方向?yàn)榉治龌瘜W(xué).E-mail：xulifang＠sit.edu.cn

陶建偉（1976-），男，工程師，主要研究方向?yàn)榉治龌瘜W(xué).E-mail：tjw＠sit.edu.cn