江曉霽 方勇飛 馮曉楓 潘柏良 流 沙 陳筱珺 王 恒 劉曉飛

（1.解放軍第三二四醫(yī)院，重慶 400020；2.第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院，重慶 400038；3.重慶市中醫(yī)院，重慶 400021）

高原臍貼軟膏對家兔皮膚急性毒性和刺激性的實(shí)驗(yàn)研究*

江曉霽1，2方勇飛2△馮曉楓1潘柏良3流 沙1陳筱珺1王 恒2劉曉飛2

（1.解放軍第三二四醫(yī)院，重慶 400020；2.第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院，重慶 400038；3.重慶市中醫(yī)院，重慶 400021）

目的 觀察高原臍貼軟膏對家兔皮膚是否有急性毒性及刺激性。方法 將16只家兔隨機(jī)分為4組，即完整皮膚實(shí)驗(yàn)組、完整皮膚對照組、破損皮膚實(shí)驗(yàn)組和破損皮膚對照組。在脫毛及破損皮膚造模24 h后，分別予試驗(yàn)組和對照組家兔高原臍貼軟膏和空白基質(zhì)軟膏。給藥24 h后，連續(xù)觀察14 d并稱量家兔體質(zhì)量。家兔12只，隨機(jī)分為完整皮膚組和破損皮膚組。家兔背部兩側(cè)分別給予高原臍貼軟膏和空白基質(zhì)軟膏，連續(xù)觀察72 h有無局部皮膚刺激反應(yīng)。結(jié)果 試驗(yàn)家兔無急性中毒表現(xiàn)，試驗(yàn)組與對照組家兔體質(zhì)量無明顯差異（P＞0.05）。家兔接觸高原臍貼軟膏后皮膚刺激分值為0，無皮膚刺激性。結(jié)論 高原臍貼軟膏經(jīng)皮給藥對家兔無急性毒性，對家兔皮膚無刺激性，是一種安全性較好的外用制劑。

高原臍貼軟膏 皮膚急性毒性 皮膚刺激性

近年來，進(jìn)入高原工作生活或旅游的人越來越多，而急性高原反應(yīng)（AMS）是人們進(jìn)入高原的重要障礙，其發(fā)病率可達(dá)50%至65%［1］。針對AMS，筆者在經(jīng)方小柴胡湯的基礎(chǔ)上進(jìn)行加減，研制出了高原臍貼軟膏，其藥物組成為柴胡、黨參、半夏、生姜、肉桂、胡椒、冰片、乳香、沒藥。筆者通過到高原實(shí)地進(jìn)行隨機(jī)對照試驗(yàn)，初步證實(shí)高原臍貼軟膏貼臍對AMS有明顯的預(yù)防效果［2］?，F(xiàn)將前期高原臍貼軟膏對家兔皮膚急性毒性和刺激性的實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果進(jìn)行報道，以說明其臨床實(shí)驗(yàn)前安全性研究結(jié)果。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 健康成年新西蘭兔，雌雄各半，體質(zhì)量（2.0±0.5）kg，毛色純白。購自第三軍醫(yī)大學(xué)附屬大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所實(shí)驗(yàn)動物中心，分籠飼養(yǎng)于第三軍醫(yī)大學(xué)附屬西南醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室動物平臺，室溫20℃左右，相對濕度57%，飼養(yǎng)過程中自由進(jìn)食和飲水。

1.2 藥物與試劑 高原臍貼軟膏每支20 g，生產(chǎn)批號120401；安慰劑軟膏為不含藥物成分的膏藥基質(zhì)材料，每支20 g，生產(chǎn)批號120402，均由重慶市中醫(yī)院藥劑科生產(chǎn)。醫(yī)用消毒酒精，500mL/瓶，由第三軍醫(yī)大學(xué)藥劑科生產(chǎn)。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 體重計；科德士牌電推剪；醫(yī)用無菌刀片；醫(yī)用棉簽、軟尺等。

1.4 家兔皮膚急性毒性試驗(yàn) 1）試驗(yàn)方法。將16只家兔按體質(zhì)量由低到高編號，然后用隨機(jī)數(shù)字表法將其分為4組，即完整皮膚實(shí)驗(yàn)組、完整皮膚對照組、破損皮膚實(shí)驗(yàn)組和破損皮膚對照組，每組4只。在給藥前24 h，用電推剪在所有實(shí)驗(yàn)兔背部脫毛，脫毛面積約150 cm2，然后進(jìn)行破損皮膚造模，將破損皮膚實(shí)驗(yàn)組和破損皮膚對照組8只實(shí)驗(yàn)兔背部脫毛區(qū)用75%酒精消毒，然后用無菌刀片在脫毛區(qū)劃“井”字，以滲血為度。脫毛造模24 h后，在完整皮膚實(shí)驗(yàn)組和破損皮膚實(shí)驗(yàn)組8只實(shí)驗(yàn)兔背部脫毛區(qū)均勻涂抹高原臍貼軟膏5 g。在完整皮膚對照組和破損皮膚對照組8只實(shí)驗(yàn)兔背部脫毛區(qū)均勻涂抹空白基質(zhì)軟膏5 g。給藥24 h后，用溫水洗凈所有實(shí)驗(yàn)兔背部脫毛區(qū)殘余藥物。洗脫藥物后即開始觀察，連續(xù)14 d，每日2次。2）觀察指標(biāo)。依據(jù)藥物毒理研究方法［3］，擬定《實(shí)驗(yàn)動物觀察指征表》進(jìn)行觀察。表內(nèi)項(xiàng)目包括實(shí)驗(yàn)兔皮膚、毛發(fā)、飲食、二便、呼吸、眼和黏膜的變化、精神狀態(tài)、四肢活動及死亡情況。如遇死亡，及時進(jìn)行尸檢和肉眼觀察，有肉眼可見病變時，進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。給藥后7 d、14 d稱量體質(zhì)量。

1.5 家兔皮膚刺激性試驗(yàn) 1）試驗(yàn)方法。將12只新西蘭兔用隨機(jī)數(shù)字表法分為完整皮膚組和破損皮膚組，各6只。在給藥前24 h，用電推剪在所有實(shí)驗(yàn)兔背部脊柱兩側(cè)脫毛，脫毛面積左右各3 cm×3 cm。將破損皮膚組6只實(shí)驗(yàn)兔背部脫毛區(qū)用75%酒精消毒，然后用無菌刀片在脫毛區(qū)劃“井”字，以滲血為度。給藥采用左右側(cè)自身對照。脫毛及破損皮膚造模24 h后，兩組12只實(shí)驗(yàn)兔均在背部左側(cè)脫毛區(qū)均勻涂抹高原臍貼軟膏1.5 g；在右側(cè)脫毛區(qū)均勻涂抹空白基質(zhì)軟膏1.5 g。給藥24 h后，用溫水洗凈所有實(shí)驗(yàn)兔背部脫毛區(qū)殘余藥物。洗脫藥物后1、24、48、72h，連續(xù)肉眼觀察實(shí)驗(yàn)兔脫毛區(qū)皮膚有無紅斑及水腫。2）評價標(biāo)準(zhǔn)。依據(jù)藥物毒理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)［3］，用《皮膚刺激反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)》進(jìn)行評分，并以公式“刺激平均分值=（紅斑形成總分+水腫形成總分）/動物總數(shù)”計算刺激平均分，按照《皮膚刺激強(qiáng)度評價標(biāo)準(zhǔn)》確定高原臍貼軟膏皮膚刺激性。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計軟件。實(shí)驗(yàn)兔體質(zhì)量以（±s）表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 家兔皮膚急性毒性實(shí)驗(yàn) 見表1。4組實(shí)驗(yàn)兔皮膚、毛發(fā)、飲食、二便、呼吸、眼和黏膜、精神狀態(tài)、四肢活動均正常，實(shí)驗(yàn)期內(nèi)無死亡。給藥后7、14 d稱量體質(zhì)量，完整皮膚實(shí)驗(yàn)組和完整皮膚對照組，破損皮膚實(shí)驗(yàn)組和破損皮膚對照組比較，體質(zhì)量無明顯差異（P＞0.05）。

表1 各組實(shí)驗(yàn)兔給藥前后體質(zhì)量比較（kg，±s）

表1 各組實(shí)驗(yàn)兔給藥前后體質(zhì)量比較（kg，±s）

組別 n 給藥后14 d給藥前 給藥后7 d完整皮膚實(shí)驗(yàn)組 4 2.36±0.13完整皮膚對照組 4 2.36±0.22破損皮膚實(shí)驗(yàn)組 4 2.46±0.12 1.92±0.15 2.15±0.17 1.92±0.09 2.22±0.19 1.90±0.15 2.21±0.14破損皮膚對照組 4 2.44±0.17 1.97±0.25 2.24±0.22

2.2 家兔皮膚刺激性實(shí)驗(yàn) 完整皮膚組和破損皮膚組12只實(shí)驗(yàn)兔在藥物去除1、24、48、72 h后均無皮膚紅斑、水腫（如圖1，圖2），皮膚刺激分值為0，皮膚刺激強(qiáng)度評價為無刺激性。見表2。

圖1 洗脫藥物1 h后實(shí)驗(yàn)兔皮膚

圖2 洗脫藥物72 h后實(shí)驗(yàn)兔皮膚

表2 各組實(shí)驗(yàn)兔皮膚刺激性試驗(yàn)結(jié)果比較（分）

3 討 論

人體進(jìn)入高原后，高原缺氧可以引起消化分泌功能障礙和胃腸運(yùn)動異常，并導(dǎo)致胃腸黏膜損傷，直接影響機(jī)體營養(yǎng)吸收和能量供給，使發(fā)生AMS的危險性增高［4］。同時，胃腸黏膜損傷也會影響口服藥物的吸收，影響療效。目前，經(jīng)皮給藥系統(tǒng)由于可以避免胃腸道吸收困難、避免首過效應(yīng)、延長單次給藥療效、減少給藥次數(shù)以及減少毒副作用等優(yōu)點(diǎn)，已成為現(xiàn)代藥劑研究的熱點(diǎn)之一［5］。由此，筆者考慮改變給藥途徑，由口服給藥改為經(jīng)皮給藥。研究發(fā)現(xiàn)［6］，藥物經(jīng)臍部給藥的生物利用度是前臂給藥的1～6倍。這與中醫(yī)的臍療法不謀而合。研究證實(shí)［7］，中藥貼臍可以有效改善血氧分壓、呼吸頻率、心率等指標(biāo)。

因此，筆者開發(fā)高原臍貼軟膏以中藥外敷的方式防治AMS。高原臍貼軟膏是重點(diǎn)針對AMS胃腸道癥狀研制的以小柴胡湯化裁而成的純中藥制劑。小柴胡湯能提高人體血漿胃動素水平，降低血管活性腸肽的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)胃部平滑肌收縮，改善胃腸道功能［8］。現(xiàn)代藥理研究表明，柴胡可以解熱、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抗炎、抗病毒和調(diào)節(jié)免疫［9］，黨參具有抗缺氧、耐疲勞、增強(qiáng)免疫力、調(diào)節(jié)胃收縮及保護(hù)胃黏膜的作用［10］。兩味主藥合用，既可以增強(qiáng)自身免疫力，又具有抗炎、抗病毒的功效，共同起到預(yù)防作用。

高原臍貼軟膏研制完成后，需要先觀察其外用的安全性。在新西蘭兔皮膚急性毒性實(shí)驗(yàn)中，完整皮膚和破損皮膚的實(shí)驗(yàn)兔一次性接觸高原臍貼軟膏后，均未在短期內(nèi)出現(xiàn)急性毒性反應(yīng)，且其體質(zhì)量和接觸基質(zhì)軟膏的實(shí)驗(yàn)兔無差別，說明高原臍貼軟膏經(jīng)皮膚給藥并無急性毒性反應(yīng)。而在皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)中，無論完整皮膚還是破損皮膚組的實(shí)驗(yàn)兔在接觸高原臍貼軟膏后均未出現(xiàn)皮膚紅斑或水腫。而兔的皮膚敏感性比人更強(qiáng)，還有可能產(chǎn)生皮膚假陽性反應(yīng)［11］。因此，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果能夠較好說明高原臍貼軟膏并無皮膚刺激性。

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Study of Transdermal Drug Delivery of A ltiplano Navel Balm on Acute Toxicity and Irritation in Experimental Rabbits

JIANG Xiaoji1，2，F(xiàn)ANG Yongfeng1，F(xiàn)ENG Xiaofeng1，et al. 1 No.324 Hospital of PLA，Chongqing 400020，China；2 Southwest Hospital，Third Military Medical University，Chongqing 400038，China

Objective：To observe the acute toxicity and dermal irritation of transdermal drug delivery（TDD）of altiplano navel balm on experimental rabbit.Methods：1）Skin acute toxicity test：16 healthy New Zealand rabbits were randomly divided into 4 groups including the experimental group with integral skin，the control group with integral skin，the experimental group with damaged skin and control group with damaged skin.Altiplano navel balm and placebo balm were applied to the skin of rabbits respectively，and were removed after 24 hours.The observations were continued for 14 days.All rabbits were weighed at 7th day and 14th day.2）Skin irritation test：12 New Zealand rabbits were randomly divided into integral skin group and damaged skin group.Atiplano navel balm and placebo balm were applied to the right or left back skin of those rabbits respectively，and removed after 24 hours.Observations were continued for 72 hours to evaluate skin irritation.Results：None of experimental rabbits was dead and poisoned.There was no significant difference between the weight of experimental groups with those of control groups in 7th day and 14th day（P>0.05）.At 1，24，48，72 hours after removed drug，neither erythema nor edema occurred on the integral skin or damaged skin.Conclusion：Altiplano navel balm is safe.It is nontoxic to apply skin without excitant.

Altiplano navel balm；Acute dermal toxicity；Dermal irritation

R285.5

A

1004-745X（2015）05-0769-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.05.006

2015-02-26）

軍隊(duì)中醫(yī)藥科研專項(xiàng)重點(diǎn)課題（2010ZYZ134）

△通信作者（電子郵箱：fangyongfei@qq.com）