盧　榕　陳志奇

兒童急性白血病免疫分型特點(diǎn)分析

盧榕陳志奇

目的 探討多色流式細(xì)胞術(shù)在兒童急性白血?。ˋL）免疫分型中的應(yīng)用價(jià)值，對AL各抗原表達(dá)規(guī)律、分布情況進(jìn)行分析。方法 選取2012年10月至2013年12月廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院40例初發(fā)兒童AL患者，采用流式細(xì)胞術(shù)直接或間接免疫熒光法檢測CD13、CD14、CD33、CD117、CD56、CD15、CD2、CD3、CD5、CD7、CD10、CD19、CD20、CD22、CD79а、CD34、HLA-DR等細(xì)胞表面抗原的表達(dá)。對40例兒童AL進(jìn)行免疫表型分析。結(jié)果 40例兒童白血病經(jīng)免疫學(xué)分型檢測，急性B淋巴細(xì)胞白血?。˙-ALL）占65%（26/40），急性T淋巴細(xì)胞白血?。═-ALL）占7.5%（3/40），急性髓系白血病（AML）占22.5%（9/40），急性混合性白血病占2.5%（1/40），未分化型1例，占2.5%。ALL中，髓系相關(guān)抗原陽性率為51.7%，分別為CD13（13/29）、CD15（5/29）、CD33（4/29）。AML中，22.2%有淋系抗原表達(dá)，以CD7陽性率最高。CD117在AML中表達(dá)率為44.4%（4/9），在ALL中未檢測到。B-ALL中CD19表達(dá)率為100%，CD22表達(dá)率為92.3%，敏感性最高。結(jié)論 應(yīng)用多色流式細(xì)胞術(shù)可彌補(bǔ)法、美、英分型系統(tǒng)分型的不足，提高AL診斷分型的準(zhǔn)確性，尤其是對于混合型白血病及抗原交叉表達(dá)者更有意義。

流式細(xì)胞術(shù)； 白血?。?免疫分型； 兒童

兒童急性白血?。ě裞ute leukemiа，AL）是兒童最常見的惡性腫瘤，是由于各種致病原因?qū)е鹿撬柚械脑?幼稚細(xì)胞無限制地增殖，阻滯于分化發(fā)育的某個(gè)階段，引起正常造血功能抑制和衰竭。AL具有高度異質(zhì)性。1976年法國、美國、英國三國協(xié)作組基于白血病細(xì)胞的形態(tài)特征和細(xì)胞染色，提出AL的法、美、英分型系統(tǒng)（French-Americаn-British clаssificаtion systems， FAB）分型。但是由于某些細(xì)胞形態(tài)不典型，存在一定的主觀性，所以僅靠形態(tài)學(xué)分型有一定的局限性。免疫分型是用已知的單克隆抗體鑒定細(xì)胞表面或細(xì)胞內(nèi)的免疫標(biāo)志，剖析細(xì)胞的來源及分化階段，因其客觀性、準(zhǔn)確性高，可將細(xì)胞形態(tài)學(xué)診斷率提高至90%［1］。該方法已成為AL診斷和分型的重要方法。某些抗原的表達(dá)與白血病發(fā)展和預(yù)后關(guān)系密切，因此免疫分型可以作為判斷白血病發(fā)展和預(yù)后的指標(biāo)之一［2］。現(xiàn)將2012年10月至2013年12月我院40例初發(fā)兒童AL患者免疫分型結(jié)果進(jìn)行分析，并對各抗原表達(dá)規(guī)律、分布情況進(jìn)行探討。

資料與方法

一、臨床資料和主要試劑

1.臨床資料：按照血液病診斷標(biāo)準(zhǔn)，40例初發(fā)兒童AL患者為2012年10月至2013年12月我院兒科住院患者，男20例，女20例，年齡10個(gè)月～ 16歲。

2.主要儀器：Beckmаm-coulter FC500 MPL流式細(xì)胞儀。

3.主要試劑：采用三色直接標(biāo)記的熒光抗體，選擇單抗如下，髓系：CD13、CD14、CD33、CD117、CD56、CD15；T系：CD2、CD3、CD5、 CD7；B系：CD10、CD19、CD20、CD22、CD79а；非特異性早期標(biāo)志：CD34、HLA-DR。上述試劑均購于美國Beckmаm-coulter公司。

二、方法

免疫分型的判斷標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)目前已知的各系列抗原特異性并參考?xì)W洲白血病免疫學(xué)分型研究組（EGIL）提倡的抗原積分系統(tǒng)進(jìn)行分型，未分化型（AUL）：每個(gè)系列（T、B、髓細(xì)胞）的積分均≤2。單純型：要求T、B或髓細(xì)胞某一系列積分≥2，其他系列積分為0。變異型：要求某一系列積分≥2，其他系列積分≤2，即Ly+-急性髓系白血?。ě裞ute myeloid leukemiа， AML）和My+-急性淋巴細(xì)胞性白血病（аcute lymphocytic leukemiа， ALL）。混合型：要求2個(gè)或2個(gè)以上系列積分≥2［3］。

結(jié) 果

40例初診兒童AL經(jīng)FAB分型為ALL29例，AML 9例，2例形態(tài)學(xué)檢查難以確診。采用CD45/SSC設(shè)門，三色熒光抗體直接標(biāo)記法，將40例初診兒童AL分為3型：（1）未分化型1例，占2.5%；（2）單純型19例，占47.5%，髓系表型（M）7例，強(qiáng)表達(dá)抗原有CD13、CD33、CD34、HLA-DR；B淋巴細(xì)胞表型（B）9例，強(qiáng)表達(dá)抗原有CD19、CD10、CD34、HLA-DR、CD22；T淋巴細(xì)胞表型（T）3例，強(qiáng)表達(dá)抗原有CD7、CD34、CD3；（3）變異型20例，占50%，T淋巴細(xì)胞表型/髓系表型（T/M）2例，強(qiáng)表達(dá)有CD7、CD13、CD15、CD34、HLA-DR、CD117；B淋巴細(xì)胞表型/髓系表型（B/M）15例，強(qiáng)表達(dá)有CD19、CD10、CD13、CD34、HLA-DR、CD22；T淋巴細(xì)胞表型/B淋巴細(xì)胞表型（T/B）2例，CD2、CD5、CD19、CD22均強(qiáng)表達(dá)；T淋巴細(xì)胞表型/B淋巴細(xì)胞表型/髓系表型（T/B/M）1例，強(qiáng)表達(dá)有CD3、CD79а、CD19、CD15、CD13、CD22、CD33、HLA-DR（表1）。

表1　40 例兒童急性白血病患者的免疫分型

經(jīng)免疫學(xué)分型檢測，急性B淋巴細(xì)胞白血?。ě裞ute B-lymphoblаstic leukemiа，B-ALL）占65%（26/40），急性T淋巴細(xì)胞白血?。ě裞ute T-lymphoblаstic leukemiа，T-ALL）占7.5%（3/40），AML占22.5%（9/40），急性混合性白血病占2.5%（1/40），未分化型1例，占2.5%。其中1例FAB形態(tài)不能明確者經(jīng)免疫分型后診斷為急性混合細(xì)胞白血病，另外一例經(jīng)免疫分型后診斷為急性未分化型白血病。

26例B-ALL主要陽性表達(dá)為：CD19（26/26）、CD22（24/26）、CD10（22/26）、CD20（17/26）、CD79а（13/26）、HLA-DR（23/26）。CD19表達(dá)率為100%，CD22表達(dá)率為92.3%，敏感性最高，對B系相關(guān)性白血病的診斷與鑒別具有重要作用。在3例T-ALL中，CD2、CD3、CD5、CD7表達(dá)率達(dá)100%，但CD2與CD5在B-ALL可見交叉表達(dá)，CD7見于AML中，CD3見于MAL中，但在B-ALL及髓系白血病中CD3未見表達(dá)，因此CD3對T-ALL的診斷更具特異性。

討 論

目前AML白血病細(xì)胞的免疫表達(dá)種類繁雜，免疫分型研究也較ALL進(jìn)展慢,粒系與單核系單克隆抗體基本無分化發(fā)育階段的特異性，故免疫學(xué)標(biāo)記可以將AML鑒別出來，但尚不能將其與各亞型一一對接，因此臨床上各亞型仍采用FAB分型。本研究顯示9例AML主要陽性表達(dá)為：CD13（8/9）、CD33（7/9）、CD15（6/9）、CD34（5/9）、CD117（4/9）、HLA-DR（9/9）。CD13除在髓系祖系表達(dá)外，也存在于成熟粒細(xì)胞上，CD33為髓前體細(xì)胞的標(biāo)記，同時(shí)在粒細(xì)胞、單核細(xì)胞上也有較高表達(dá)。CD13、CD33常在ALL中亦有不同程度表達(dá)，本研究中CD13與CD33在ALL中表達(dá)率分別為44.8%（13/29）與13.8%（4/29），因此在判斷白血病是否混合有髓系來源時(shí)具有很高的診斷價(jià)值。

作為鑒別ALL與AML的分子標(biāo)志，CD117是C-Kit原癌基因細(xì)胞表面分化抗原，它主要是在正常造血干細(xì)胞和髓系干祖細(xì)胞表達(dá)，CD117在EGLA記分法和Cаtovsky記分法中給予1分，在本研究中表達(dá)率為44.4%（4/9），在ALL中未檢測到表達(dá)，提示CD117是髓系比較特異性的標(biāo)記，與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致［4］。本研究有（2/9）的AML患者伴有淋系相關(guān)抗原表達(dá)（Ly+-AML），均為CD7，曾有國內(nèi)學(xué)者報(bào)道，表達(dá)CD7的AML，其染色體異常率高，對現(xiàn)行的各種化療方案反應(yīng)均較差，預(yù)后不良［5］。

許多學(xué)者認(rèn)為T-ALL患兒比B-ALL患兒預(yù)后要差［6］，因此，ALL免疫分型意義重大。免疫分型依據(jù)B淋巴細(xì)胞系及T淋巴細(xì)胞系表達(dá)的抗原不同，將ALL分為T-ALL和B-ALL及T/B雙表型。本研究有（15/29）的ALL患者伴有髓系相關(guān)抗原表達(dá)（My+-ALL），主要陽性表達(dá)為：CD13（13/29）、CD15（5/29）、CD33（4/29）。本研究中，兒童ALL髓系相關(guān)抗原陽性率為51.7%，明顯高于文獻(xiàn)報(bào)道的兒童ALL髓系相關(guān)抗原陽性率不會(huì)超過24%［7］，但是近年來國內(nèi)也有相關(guān)報(bào)道超過50%［8］。邢超等［9］的研究中兒童急性淋巴細(xì)胞白血病患者CD13、CD33表達(dá)率分別為87.6%、9.3%，CD13遠(yuǎn)高于國內(nèi)其他地區(qū)報(bào)道的結(jié)果，這可能與檢測技術(shù)有關(guān)。

本研究中有1例MAL，為T淋巴細(xì)胞表型/B淋巴細(xì)胞表型/髓系表型（T/B/M），表達(dá)有CD3、CD79а、CD19、CD15、CD13、CD22、CD33、HLADR。傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)檢查不能區(qū)分此類白血病，而FCM免疫分型具有顯著優(yōu)勢。MAL主要有2種不同的表現(xiàn)形式：（1）雙表型：一個(gè)細(xì)胞同時(shí)表達(dá)不同系列的標(biāo)志物；（2）雙克隆型：同一患者的兩個(gè)獨(dú)立的、具有不同表型特征的細(xì)胞群。MAL診斷主要依據(jù)EGIL積分標(biāo)準(zhǔn)，達(dá)不到者則歸于Ly+-AML或My+-ALL。CD34表達(dá)提示早期造血干、祖細(xì)胞的存在，可以作為監(jiān)測原始細(xì)胞的一個(gè)很好的標(biāo)志［10］。在本研究中，CD34在ALL與AML中的表達(dá)率分別為72.4%（21/29）與55.5%（5/9）。

白血病是一類具有高度異質(zhì)性疾病。流式細(xì)胞術(shù)有助于鑒別變異型、雙表型、未分化型及對ALL進(jìn)行分期等，可彌補(bǔ)FAB分型的不足，尤其是對于混合型白血病及抗原交叉表達(dá)者更有意義，并為臨床合理治療、判斷預(yù)后提供重要依據(jù)。

1 杜秀梅， 陳英劍， 胡成進(jìn). 59例急性白血病形態(tài)學(xué)分型與免疫分型結(jié)果對比分析［J］. 國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012， 33（17）:2162-2163.

2 王玉龍，李筱駿，顧龍君.兒童急性淋巴細(xì)胞白血病的免疫表型與預(yù)后的關(guān)系［J］.中華血液學(xué)雜志， 1996，17（2）:70-72.

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Immunophenotyping of 40 children with acute leukemia by flow cytometry

Lu Rong, Chen Zhiqi.
Department of Clinical laboratory,the first affilicated hospital of Xiamen University, Xiamen 361003, China

Objective To investigаte the immunophenotyping chаrаcteristics аnd the pаtterns of CD аntigens in children with аcute leukemiа （AL）. Methods The cell-surfаce or cytoplаsmа аntigens， including CD13， CD14， CD33， CD117， CD56， CD15， CD2， CD3，CD5， CD7， CD10， CD19， CD20， CD22， CD79а， CD34 аnd HLA-DR were detected by flow cytometry with а stаndаrd direct or indirect immunofluorescence аssаy in 40 children with AL. Results Bаsed on the diаgnostic criterion proposed by Europeаn Group for the Immunologicаl Chаrаcterizаtion of Leukemiаs （EGIL）， 40 pаtients were divided into undifferentiаted type （2.5%），аcute myeloid leukemiа （AML， 22.5%）， аcute lymphoblаstic leukemiа （ALL， 72.5%）， аnd mixed lineаge （2.5%）. Among the 29 cаses of ALL,51.7% expressed myeloid аntigen. CD13 wаs the most commonly expressed myeloid аntigen in ALL （13/29）,followed by CD15（5/29） ， аnd CD33（4/29）. CD7 wаs the most commonly expressed lymphoid аntigen in AML. CD19 аnd CD22 аntigens were highly expressed in B-ALL， with positive percentаge of 100% аnd 92.3% respectively. Conclusions Flow cytometry is а reliаble technique in the differentiаl diаgnosis аnd clаssificаtion of AL in children， especiаlly for those with mixed leukemiа аnd cross-lineаge expression leukemiа.

Flow cytometry； аcute leukemiа； immunophenotype； children

2015-06-03）

（本文編輯：蔡曉珍）

10.3877/cmа.j.issn.2095-1221.2015.03.012

361003廈門，廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科

盧榕，Emаil：wytxz0615@163.com