杜淑霞，徐麗，廖延智，司徒滿泉，李文清

（1.廣東輕工職業(yè)技術(shù)學(xué)院，廣東廣州510300；2.暨南大學(xué)，廣東廣州510632）

HPLC法快速測定乳粉中VC棕櫚酸酯的含量

杜淑霞1，徐麗1，廖延智1，司徒滿泉1，李文清2

（1.廣東輕工職業(yè)技術(shù)學(xué)院，廣東廣州510300；2.暨南大學(xué)，廣東廣州510632）

建立了利用高效液相色譜儀快速測定乳粉中Vc棕櫚酸酯含量的方法。以含0.1%草酸的乙醇溶液為提取劑，以甲醇和0.15%草酸（體積比為90∶10）為流動(dòng)相，經(jīng)Inertsil ODS-SP色譜柱分離，采用二極管陣列檢測器，在245 nm波長下進(jìn)行測定。VC棕櫚酸酯的質(zhì)量濃度在0.5 μg/mL～100 μg/mL濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。以3倍基線噪聲所對應(yīng)的濃度計(jì)算VC棕櫚酸酯的檢出限為2 μg/g。加標(biāo)回收率在92.01%～105.84%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）在1.02%～2.70%之間。

VC棕櫚酸酯；高效液相色譜法（HPLC）；乳粉

VC棕櫚酸酯又稱抗壞血酸棕櫚酸酯（簡稱AP），分子式為C22H38O7，結(jié)構(gòu)式為

由棕櫚酸與L-抗壞血酸酯化而得。它是氧的清除劑、金屬螯合劑，同時(shí)保留了抗壞血酸的生理活性，被世界衛(wèi)生組織（WHO）食品添加劑委員會(huì)（FIO）定為具有營養(yǎng)性、無毒、高效，使用安全的抗氧劑，同時(shí)被美國藥典收載［1］，也是我國食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定許可的用于乳粉中的抗氧化劑［2］，起到抗氧化、護(hù)色、營養(yǎng)強(qiáng)化等功效，同時(shí)可以提高產(chǎn)品的貨架期［3］。VC棕櫚酸酯的應(yīng)用越來越廣泛，有必要建立簡單、快速的方法準(zhǔn)確地測定其含量，指導(dǎo)VC棕櫚酸酯的合理使用。目前，關(guān)于純的食品添加劑VC棕櫚酸酯的檢測方法主要有碘滴定法［4］，而2，6-二氯酚靛酚法［5］、薄層掃描法［6］和液相色譜法［7］，主要用于食用油脂、焙烤食品和方便米面食品中抗壞血酸棕櫚酸酯含量的測定。而關(guān)于乳粉中抗壞血酸棕櫚酸酯的檢測方法尚未見報(bào)道。本文用0.1%草酸的乙醇溶液提取試樣中的VC棕櫚酸酯，以甲醇和0.15%草酸為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫，使用高效液相色譜法可以快速地測定乳粉中抗壞血酸棕櫚酸酯的含量。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

VC棕櫚酸酯：東莞廣益食品添加劑有限公司提供；甲醇和乙腈為色譜純：迪馬公司；乙醇、草酸、檸檬酸、三氯乙酸為國產(chǎn)分析純試劑。

島津LC-20A高效液相色譜儀，配有LC-20AT溶液傳輸單元（泵）和SPD-M20A二極管陣列（PDA）檢測器：日本島津公司；色譜柱（Inertsil ODS-SP，5 μm，4.6 mm×250 mm）、BS210S電子天平：北京賽多利斯天平有限公司；HS6150D超聲波清洗器、MixPlus旋渦混合器：合肥艾本森科學(xué)儀器有限公司。

1.2方法

1.2.1色譜條件

色譜柱：Inertsil ODS-SP，5 μm，4.6 mm×250 mm；檢測器：二極管陣列（PDA）檢測器；柱溫：30℃；流速：1 mL/min；進(jìn)樣量：20 μL；檢測波長：245 nm；流動(dòng)相：甲醇：0.15%草酸溶液=90∶10（體積比）。

1.2.2VC棕櫚酸酯的穩(wěn)定性

準(zhǔn)確稱取0.100 0 g VC棕櫚酸酯分別用乙醇、0.1%草酸的乙醇溶液、0.1%檸檬酸的乙醇溶液、0.1%三氯乙酸的乙醇溶液溶解并定容至100 mL，移取其中5 mL于4個(gè)100 mL容量瓶中，分別用上述4種溶液定容至100 mL，得50 μg/mL的VC棕櫚酸酯溶液，用0.45 μm有機(jī)相濾膜過濾后按1.2.1色譜條件每隔一定時(shí)間進(jìn)樣一次，根據(jù)峰面積的變化判斷VC棕櫚酸酯在上述溶液中的穩(wěn)定性。

1.2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

準(zhǔn)確稱取0.100 0 g VC棕櫚酸酯用0.1%草酸的乙醇溶液溶解并定容至100 mL，得1 mg/mL的VC棕櫚酸酯溶液，用0.1%草酸的乙醇溶液稀釋成0.5、1、5、10、50、100 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)系列，用0.45 μm有機(jī)相濾膜過濾后在1.2.1色譜條件下依次注入液相色譜，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.4樣品的測定

稱取3 g～5 g試樣于50 mL離心管中，加入95%乙醇（其中含有0.1%的草酸）至25 mL，混勻，渦旋中速振蕩，離心，取上清液用0.45 μm有機(jī)相濾膜過濾后上機(jī)測定。根據(jù)保留時(shí)間定性，外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線定量。

2　結(jié)果與討論

2.1測定波長的選擇

所用溶劑或流動(dòng)相的不同可能影響化合物的最大吸收波長，本文將VC棕櫚酸酯標(biāo)準(zhǔn)溶液在200 nm～400 nm范圍利用二極管陣列檢測器進(jìn)行紫外掃描，發(fā)現(xiàn)在波長為245 nm處的吸光度最大，故測定波長選為245 nm。

2.2流動(dòng)相的選擇

固定流動(dòng)相流速為1 mL/min，本文考察了流動(dòng)相體積比為甲醇：0.15%草酸=95∶5、90∶10、85∶15、80∶20時(shí)的出峰情況，發(fā)現(xiàn)流動(dòng)相配比為95∶5時(shí)，VC棕櫚酸酯在4.5 min時(shí)出峰，周圍雜峰多，與試樣中組分分離效果差；當(dāng)流動(dòng)相中甲醇低于85%時(shí)，VC棕櫚酸酯在10min之后出峰，延長了分析時(shí)間且峰型質(zhì)量差，當(dāng)流動(dòng)相體積比為甲醇：0.15%草酸=90∶10時(shí)，分離效果最好。

2.3VC棕櫚酸酯的穩(wěn)定性

不同溶劑中VC棕櫚酸酯穩(wěn)定性見表1。

表1　不同溶劑中VC棕櫚酸酯的穩(wěn)定性Table 1 Effect of different solvent on stability of ascorbyl palmitate

VC棕櫚酸酯結(jié)構(gòu)上含有烯二醇式結(jié)構(gòu)，溫度、光線、金屬離子及堿性環(huán)境等因素都可能促進(jìn)VC棕櫚酸酯的氧化。本文探討了不同的酸性條件下VC棕櫚酸酯的穩(wěn)定性，由表1可以看出在0.1%草酸乙醇溶液中VC棕櫚酸酯最穩(wěn)定，常溫下放置20 h，殘留量仍然在95%以上，而在0.1%三氯乙酸乙醇溶液中，常溫下放置5 h時(shí)僅殘留10%。

2.4提取劑的選擇

實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，VC棕櫚酸酯在乙醇中的溶解性遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于甲醇、乙腈等其他有機(jī)溶劑，且95%乙醇溶液作為提取劑可以達(dá)到良好的提取效果［8］，但VC棕櫚酸酯在乙醇溶液中穩(wěn)定性欠佳，為了避免VC棕櫚酸酯的損失，本文用含0.1%草酸的95%乙醇浸泡試樣，渦旋中速振蕩8 min，4 000 r/min離心5 min，能較完全地提取試樣中的待測組分。

2.5線性范圍和檢出限

按實(shí)驗(yàn)方法測得的VC棕櫚酸酯各濃度標(biāo)準(zhǔn)系列對應(yīng)的吸光度結(jié)果見表2，峰面積-濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1。

表2　各濃度VC棕櫚酸酯對應(yīng)的峰面積Table 2Peak area of different concentrations of ascorbyl palmitate

圖1　VC棕櫚酸酯標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1Standard curve of ascorbyl palmitate

由圖1可知，VC棕櫚酸酯在0.5 μg/mL～100 μg/mL濃度范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。以3倍基線噪聲所對應(yīng)的濃度計(jì)算本方法的檢出限，VC棕櫚酸酯的檢出限為2 μg/g。

2.6方法的精密度和準(zhǔn)確度試驗(yàn)

稱取未檢出VC棕櫚酸酯的乳粉試樣，加入不同量的VC棕櫚酸酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，做高、中、低3個(gè)濃度的加標(biāo)回收。按方法進(jìn)行樣品處理和測定，每個(gè)濃度各測6次，空白試樣的色譜圖和加標(biāo)樣品的色譜圖見圖2和圖3。根據(jù)峰面積和線性回歸方程計(jì)算VC棕櫚酸酯的含量，以測定值計(jì)算回收率和精密度，結(jié)果見表3。

圖2　空白試樣的色譜圖Fig.2Chromatogram of blank sample

圖3　加標(biāo)樣品的色譜圖Fig.3Chromatogram of sample with ascorbyl palmitate addition

表3　回收率和精密度試驗(yàn)結(jié)果（n=6）Table 3Results of recovery and precision test（n=6）

2.7樣品分析

目前市場上乳粉品牌和種類很多，本文隨機(jī)采集了8份乳粉按上述方法進(jìn)行檢測，其中有3份產(chǎn)品含有VC棕櫚酸酯，含量最高的為0.071 g/kg。

3　結(jié)論

本文建立了高效液相色譜法快速測定乳粉中VC棕櫚酸酯含量的方法。該方法樣品處理方法簡單，分析速度快，回收率為92.01%～105.84%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）為1.02%～2.70%，說明方法回收率高，精密度好，結(jié)果可靠，可應(yīng)用于Vc棕櫚酸酯的快速檢測及質(zhì)量控制。

［1］高蔭榆，雷占蘭，謝何融，等.L-抗壞血酸棕櫚酸酯的抗氧化效果研究［J］.食品科學(xué)，2007，28（11）：60-62

［2］中華人民共和國衛(wèi)生部.GB 2760-2011食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2011：40

［3］林富強(qiáng)，陳永恒，何松.L-抗壞血酸棕櫚酸酯在配方乳品中的應(yīng)用［J］.現(xiàn)代食品科技，2010，26（10）：1114-1116

［4］國家技術(shù)監(jiān)督局.GB 16314-1996中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑L-抗壞血酸棕櫚酸酯［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，1996：3-4

［5］黃少強(qiáng)，劉志同.食用油中L-抗壞血酸棕櫚酸酯含量測定方法研究［J］.中國糧油學(xué)報(bào)，2006，21（2）：121-123

［6］湯魯宏，孫云飛，張浩.薄層掃描法測定L-抗壞血酸棕櫚酸酯［J］.食品工業(yè)科技，1999（5）：57-58

［7］陸志蕓，張輝，趙敏，等.高效液相色譜法測定食品中抗壞血酸棕櫚酸酯［J］.理化檢驗(yàn)-化學(xué)分冊，2010，46（8）：869-871

［8］胡波年，謝華林，胡漢祥，等.化妝品中L-抗壞血酸棕櫚酸酯的薄層色譜分析［J］.武漢理工大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，26（11）：39-41

Rapid Determination of Content of Ascorbyl Palmitate in Milk Powder by HPLC

DU Shu-xia1，XU Li1，LIAO Yan-zhi1，SUTU Man-quan1，LI Wen-qing2
（1.Guangdong Industry Technical College，Guangzhou 510300，Guangdong，China；2.Jinan University，Guangzhou 510632，Guangdong，China）

The method for rapid determination of the content of ascorbyl palmitate in milk powder by high performance liquid chromatograph（HPLC）was established.It was separated through Inertsil ODS-SP chromatographic column with ethanol containing 0.1%oxalic acid as extraction agent and with methanol and 0.15%oxalic acid（vol/vol=90∶10）as mobile phase，and then was measured under 245 nm wavelength with a diode array detector.There was a good linear relationship between mass concentration of ascorbyl palmitate and peak area when the mass concentration was from 0.5 μg/mL to 100 μg/mL.Detection limit of ascorbyl palmitate was calculated as 2 μg/g by the concentration which corresponded to 3 times baseline noise.Standard addition recovery was 92.01%-105.84%，and relative standard deviation（n=6）was 1.02%-2.70%.

ascorbyl palmitate；high performance liquid chromatograph（HPLC）；milk powder

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.13.024

2013-09-17

廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目“安全、高效食品添加劑的開發(fā)”（2010A080403001）；廣東省產(chǎn)學(xué)研基地滾動(dòng)項(xiàng)目“酶法合成L-抗壞血酸棕櫚酸酯的中試研究”（2013CXZDC006）

杜淑霞（1969—），女（漢），教授，碩士，研究方向：食品分析。