張秀麗 鄭 琰 崔 巖

（朝陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，遼寧 朝陽(yáng) 122000）

HPLC-ELSD法測(cè)定復(fù)方桔梗止咳片中桔梗皂苷D的含量

張秀麗 鄭 琰 崔 巖

（朝陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，遼寧 朝陽(yáng) 122000）

目的 建立一方法來(lái)測(cè)定復(fù)方桔梗止咳片中的桔梗皂苷D。方法 采用HPLC-ELSD法，色譜柱為KromasilC18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈-水（28∶72），流速為0.9 mL/min，ELSD漂移管溫度為70 ℃，氣體流速為3.0 SLPM/min。結(jié)果 在0.513～10.26 μg線性范圍內(nèi)桔梗皂苷D進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系良好（r=0.9996），平均回收率99.44%，RSD=1.2%（n=6）。結(jié)論 該方法準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可有效的控制復(fù)方桔梗止咳片的質(zhì)量。

復(fù)方桔梗止咳片；桔梗皂苷D；高效液相色譜法-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器

復(fù)方桔梗止咳片收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第四冊(cè)，由桔梗、 遠(yuǎn)志、款冬花、甘草4味藥制備而成的復(fù)方制劑，具有鎮(zhèn)咳、祛痰之功效，桔梗為處方中的君藥，用量較大，其鎮(zhèn)咳祛痰的作用與與桔梗含量高低密切相關(guān)。桔梗含多種皂苷，其中以桔梗皂苷D為主。該標(biāo)準(zhǔn)中沒有對(duì)桔梗皂苷D進(jìn)行質(zhì)量控制。為保證藥品質(zhì)量，筆者采用HPLC-ELSD法對(duì)復(fù)方桔梗止咳片中桔梗皂苷 D進(jìn)行質(zhì)量控制［1］。

1　儀器與試藥

Waters2695-2424型高效液相色譜儀，CPA225D電子分析天平（德國(guó)賽多利斯公司），9860A型超聲儀（費(fèi)納米科技發(fā)展有限公司），桔梗皂苷D對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：111851-201204）；復(fù)方桔梗止咳片（新鄉(xiāng)佐今明制藥股份有限公司，批號(hào)：20130301，20130304，20130501）乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，甲醇、正丁醇、三氯甲烷均為分析純。

2　實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件：WatersC18（4.6 mm×250 mm；5 μm）為色譜柱；乙腈-水（28∶72）為流動(dòng)相；柱溫：28 ℃；流量：0.9 mL/min；漂移管的溫度：70 ℃，氣體的流速為3.0 SLPM/min。桔梗皂苷D峰的理論板數(shù)不低于4000。

2.2 溶液的制備：精密稱取一定量的桔梗皂苷D對(duì)照品，加甲醇溶解制成含0.5 mg/mL的對(duì)照品溶液。精稱樣品20T，至研缽中研細(xì)，取3.2068 g，置具塞錐形瓶中，精加50%甲醇50 mL，稱重，超聲處理（260 Hz，40 W）30 min，放至室溫，再稱重，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液25 mL，置水浴上蒸干，殘?jiān)铀?0 mL，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇30 mL振搖提取，分取正丁醇液，再重復(fù)上述操作2次，每次20 mL，合并正丁醇提取液，用50 mL氨試液洗滌，棄去氨液，再用正丁醇飽和的水50 mL洗滌，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，加硅膠0.5 g拌勻，置水浴上蒸干，加于硅膠柱［100～120目，10 g，內(nèi)徑為2 cm，用三氯甲烷-甲醇（9∶1）混合溶液濕法裝柱］上，以三氯甲烷-甲醇（9∶1）混合溶液50 mL洗脫，棄去洗脫液，再用三氯甲烷-甲醇-水（60∶20∶3）混合溶液100 mL洗脫，棄去洗脫液，繼用三氯甲烷-甲醇-水（60∶29∶6）混合溶液100 mL洗脫，收集洗脫液，低溫蒸干，殘?jiān)蒙倭考状既芙?，并定容? mL量瓶中，搖勻，即得供試品溶液。稱取不含桔梗的其他幾味藥材，按處方工藝制備陰性樣品，作為陰性對(duì)照溶液。

2.3 方法學(xué)考察：①陰性干擾實(shí)驗(yàn)：精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液，在上述色譜條件下測(cè)定，結(jié)果見圖1?？梢娫撋V條件下桔梗皂苷D峰形良好，陰性對(duì)照色譜在此處無(wú)干擾，表明其他組分對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。②系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)：分別精密吸取濃度為0.5 mg/mL的桔梗皂苷D對(duì)照品溶液1、5、10、15、20 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。以桔梗皂苷D的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），得線性回歸方程為Y=30205.9X+19474.1（r=0.9996）。結(jié)果在0.513～10.26 μg范圍內(nèi)桔梗皂苷D進(jìn)樣量與峰面積有良好的線性關(guān)系。③精密度試驗(yàn)：精密吸取精密吸取濃度為0.5 mg/mL的桔梗皂苷D對(duì)照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積積分值［2］。結(jié)果桔梗皂苷D的RSD為0.34%（n=6），說(shuō)明儀器精密度良好。④重現(xiàn)性試驗(yàn)：取批號(hào)為20130301的樣品6份，分別依法處理后測(cè)定。結(jié)果的RSD為0.98%，表明該方法重復(fù)性良好。⑤穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液（批號(hào)為20130301）10 μL，按上述色譜條件，分別于0、2、4、8、12、24 h內(nèi)測(cè)定，記錄峰面積積分值，按峰面積積分值計(jì)算，結(jié)果桔梗皂苷D的RSD為0.85%。說(shuō)明桔梗皂苷D在24 h內(nèi)是基本穩(wěn)定的。⑥回收率試驗(yàn)：精密稱取批號(hào)為20130301的樣品（桔梗皂苷D：0.1046 mg/g）6份，每份1.6 g，精密加入桔梗皂苷D 0.1654 mg，按供試品溶液方法制備，測(cè)定含量并計(jì)算回收率，見表1。

2.4 樣品含量測(cè)定：取3批樣品（批號(hào)為20130301、20130304、20130501），按供試品溶液方法制備，分別進(jìn)樣10 μL，依法測(cè)定，采用外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算樣品中桔梗皂苷D的含量，含量分別為0.0261、0.0207、0.0198毫克/片。

圖1 HPLC-ELSD色譜圖

表1 回收率試驗(yàn)

3　討　論

3.1 桔梗為處方中君藥，原標(biāo)準(zhǔn)未對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量控制，由于桔梗的活性成分桔梗皂苷D只有一個(gè)C=C雙鍵，在紫外幾乎無(wú)吸收，所以本文采用HPLC-ELSD法對(duì)其進(jìn)行定量分析［3］。

3.2 色譜條件和ELSD參數(shù)的選擇：本實(shí)驗(yàn)以乙腈-水（28∶72）為流動(dòng)相、流速降為1.0 mL/min與0.9 mL/min、ELSD漂移管溫度為50 ℃與70 ℃、載氣流速為3.0 SLPM/min進(jìn)行了比對(duì)，結(jié)果以乙腈-水（28∶72）為流動(dòng)相、流速降為0.9 mL/min、ELSD漂移管溫度為70 ℃、載氣流速為3.0 SLPM/min時(shí)樣品中桔梗皂苷D峰與其他組分無(wú)干擾，分離度＞1.5［4］。

［1］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典.一部［S］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:259.

［2］ 彭善貴，文永盛.高效液相色譜法-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器法測(cè)定甘桔冰梅片中桔梗皂苷D含量［J］.中國(guó)藥業(yè)，2012，21（19）:28-29.

［3］ 筆雪艷，劉曉風(fēng)，張清波，等.桔梗藥材及飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.中醫(yī)藥信息，2011，28（6）:69-71.

［4］ 龍芳.RP-HPLC-ELSD法測(cè)定貝杏止咳膏中桔梗皂苷D的含量［J］.中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2011，17（10）:68-69.

Determination of Compound Platycodon Cough of Platycodin D HPLC-ELSD Method

ZHAGN Xiu-li， ZHENG Yan， CUI Yan
（Chaoyang Institute for Food and Drug Control， Chaoyang 122000， China）

Objective To determine the compound Platycodon cough of platycodin D establish a method. Method Using the method of HPLC-ELSD， The column was KromasilC18（4.6 mm ×250 mm，5 μm）， mobile phase acetonitrile water （28∶72）， The flow rate was 0.9 mL/min， the ELSD drift tube temperature of 70 ℃， and the gas flow rate is 3.0 SLPM/ min. Results The linear range of Platycodin D was 0.1950～4.8750 μg （r=0.9996）， The average recovery was 99.44%， RSD=1.2% （n=6）. Conclusion The method is accurate with a good reproducibility ，and suitable for quality control of compound Platycodon cough.

Compound platycodon cough； Platycodin D； HPLC-ELSD

R282.710.3

B

1671-8194（2015）15-0055-02